Angiogénesis terapéutica de extremidades isquémicas mediante linfocitos y monocitos de médula ósea en un modelo murino y de sangre periférica con uso clínico

Investigamos la utilidad de la angiogénesis terapéutica con linfocitos y monocitos de médula ósea (LM-MO) en un modelo murino de isquemia de extremidad inferior y, con uso clínico, de los linfocitos y monocitos obtenidos a partir de sangre periférica (LM-SP) de los pacientes. En el modelo animal, los linfocitos y monocitos de médula ósea se aislaron e inyectaron en los músculos esqueléticos isquémicos de ratones. Después del procedimiento quirúrgico se efectuó una evaluación con láser Doppler e histológica. En el ensayo clínico, 15 pacientes con isquemia crítica de la extremidad inferior recibieron previamente inyecciones subcut aneas de factor humano recombinante estimulante de colonias granulocíticas (G-CSF), a fin de estimular la producción de linfocitos y monocitos. Tras su aislamiento en sangre periférica se trasplantaron directamente en la extremidad isquémica. Las células endoteliales derivadas de linfocitos y monocitos de médula ósea se prepararon en una placa, y acto seguido, se indujeron para la formación de redes tridimensionales mediante invasión de Matrigel. En el modelo murino, a las 4 semanas de la implantación de los linfocitos y monocitos de médula ósea, el análisis con láser Doppler demostró que el cociente del flujo sanguíneo había aumentado significativamente en las patas iosquémicas de los ratones (0,67 ± 0,2 comparado con 0,44 ± 0,02). El análisis de fosfatasa alcalina y el inmunohistoquímico demostraron que la densidad capilar aumentó significativamente (95,25 ± 0,07% comparado con 39,6 ± 0,04%). En los pacientes incluidos en el ensayo clínico, a los 2 meses de la implantación de los linfocitos y monocitos de sangre periférica, los valores del índice tobillo-brazo, distancia deambulada, escala de dolor y presión de oxígeno transcutánea (TcO2) mejoraron significativamente ( p < 0,005). Después del trasplante de células se curó un total de seis de 15 úlceras de las extremidades de pacientes sometidos al trasplante. El implante de linfocitos de médula ósea fue capaz de inducir una angiogénesis funcional en la pata trasera isquémica de ratones. En el ensayo clínico se demuestra que el trasplante de linfocitos de sangre periférica tras estimular su producción con G-CSF es un tratamiento viable para la isquemia de la extremidad inferior.