P-018. - EXPRESIÓN Y FUNCIONALIDAD DEL RECEPTOR BOMBESINA SUBTIPO-3 (BRS-3) EN EL TEJIDO ADIPOSO DE HUMANO Y MODELOS ANIMALES
Fundación Jiménez Díaz. Madrid.
Introducción: Previamente describimos, la menor expresión del Receptor Bombesina Subtipo-3 (BRS3) en músculo de pacientes obesos (OB) o diabéticos tipo 2 (DT2) comparado con sujetos normales, y los efectos insulino-miméticos de su agonista [D-Tyr6,β-Ala11,Phe13,Nle14]bombesina6-14, el cual en adipocitos aislados de rata, estimuló la lipogénesis, efecto completamente abolido por wortmanina -inhibidor de PI3K/PKB- y parcialmente por rapamicina -inhibidor de p70s6K-.
Objetivos: Estudiar: A) expresión del BRS-3 en tejido adiposo humano y de rata con/sin alteraciones metabólicas; B) características de las rutas celulares del receptor empleando su agonista; y el efecto de éste, sobre el transporte de glucosa (TG) en adipocitos diferenciados de humanos (AH) o aislados de rata (AR).
Material y métodos: Extracción ARNm y proteína de piezas de grasa humana (29 N, 17 OB y 16 DT2) y de rata [7 normal (n), 7 hiperlipidémicas (HL) y 4 DT2]. Diferenciación de adipocitos humanos a partir de una línea de preadipocitos, según proveedor. Aislamiento de adipocitos de rata mediante digestión enzimática de grasa epididimaria (24 machos Wistar, 250 g, dieta estándar-agua ad libitum). Medición de: expresión génica -PCR-TR- y proteica del BRS-3, fosforilación de PKB y p70s6K -Western Blot-, transporte de glucosa (TG) -incorporación 3H-2-deoxy-D-glucosa-, en adipocitos incubados en ausencia (control) o presencia del agonista (10-13-10-7 M) con o sin 10-6 M wortmanina o 10-7 M rapamicina.
Resultados: La expresión génica del receptor BRS-3 en piezas de tejido adiposo de pacientes OB o DT2, es menor que en sujetos normales (1,91 ± 0,01 y 1,93 ± 0,01 veces menos expresado; p < 0,001, respectivamente), como en ratas HL o DT2 (1,96 ± 0,04 y 10,30 ± 0,34 veces menos; p < 0,001). Los valores de proteína en humano (OB: 75 ± 4% control N, DT2: 66 ± 5%; p < 0,05) corresponden con la disminución de ARNm; sin embargo, en rata la disminución fue observada, únicamente, en DT2 (HL: 106% ± 2 control n, DT2: 55 ± 6; p < 0,05). En AH, el agonista a 10-8 M incrementó (p < 0,05) la fosforilación de PKB y p70s6K (130 ± 2% control N, 183 ± 28%; respectivamente), como la insulina (10-9 M: 147 ± 5%, 152 ± 10%; p < 0,05); y a 10-9 M indujo fosforilación de p70s6K (152 ± 5%), pero no de PKB (117 ± 6%; p < 0,05). En AR, el ligando a 10-9 y 10-8 M aumentó (p < 0,05) la fosforilación de ambas enzimas (PKB: 134 ± 5%, 133 ± 5%; p70s6K: 156 ± 10%, 161 ± 12%), similar al efecto de la insulina (10-9 M: 144 ± 11%, 156 ± 22%; p < 0,05). En AH, el compuesto estimuló el TG a 10-8 M (165 ± 17% control N; p < 0,05), bloqueado por wortmanina (100 ± 5%), y parcialmente reducido por rapamicina (118 ± 6%; p < 0,05 vs control, p < 0,05 vs 10-9 M agonista). En cambio, en AR el efecto máximo en TG (10-9 M: 157 ± 8%; p < 0,02) fue abolido por ambos inhibidores (102 ± 6%, 104 ± 5% control; p < 0,05).
Conclusiones: Los resultados confirman el papel específico del receptor BRS-3 en tejido adiposo humano y de rata; además, de señalar el uso potencial del receptor BRS-3, y/o su péptido agonista, como diana molecular para el tratamiento de la diabetes u obesidad.
