Valoración de la técnica de PCR-Southern blot para el análisis de la viremia en pacientes con hepatitis aguda A

Resumen

El análisis de la viremia en la infección por el virus de la hepatitis A (VHA) mediante los métodos convencionales es poco utilizado debido a que la determinación viral se realiza habitualmente en heces y a que las técnicas empleadas son laboriosas y tienen baja rentabilidad diagnóstica. Los objetivos de este trabajo son el desarrollo de un método de amplificación génica y Southern blot para la detección de ARNVHA en el suero de los pacientes con infección aguda y relacionar la presencia de ARN-VHA con la detección de anticuerpos anti-VHA de tipo IgM y los valores de la alanina aminotransferasa (ALT). El ARN-VHA se ha estudiado en 26 muestras de suero de 21 pacientes con hepatitis aguda A, en 11 muestras de pacientes con hepatitis aguda B y en 15 con hepatitis aguda no A, no E. El ARN-VHA se detectó en 10 (38%) de las 26 muestras de suero de pacientes con hepatitis aguda A. En cinco muestras fue positivo por la técnica de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) simple y en 10 mediante la técnica de PCR-Southern blot. El ARN-VHA fue positivo en el 100% de las muestras de suero obtenidas en la primera semana de la sintomatología clínica, en el 50% de las muestras de la segunda semana y no se detectó en ninguna de las muestras obtenidas posteriormente. No se detectó ARN-VHA en ninguno de los 11 casos de hepatitis aguda B ni de los 15 de hepatitis aguda no A, no E. No se observó una relación significativa entre la detección de ARN-VHA y el grado de positividad de los anticuerpos anti-VHA de tipo IgM, pero sí en cambio con el aumento de la ALT.

En conclusión, la presencia de ARN-VHA en la hepatitis aguda A es frecuente, pero su detección es transitoria durante las primeras 2 semanas del inicio de la sintomatología clínica y requiere de una técnica de amplificación génica y Southern blot.

Abstract

Assessment of viremia in hepatitis A virus (HAV) infection is not frequently performed with conventional methods because the techniques used are laborious, have low sensitivity are usually performed in feces. The aims of this study were to develop a polymerase chain reaction (PCR) and Southern blot technique to detect HAV-RNA in the serum of patients with acute HAV infection and to determine the relationship between HAV-RNA and anti-HAV IgM and alanine aminotransferase (ALT) levels. The presence of HAV-RNA was studied in 26 serum samples from 21 patients with acute hepatitis A. We also studied 11 samples from patients with acute hepatitis B and 15 samples from patients with non-A, non-E hepatitis. HAV-RNA was detected in 10 (38%) of the 26 serum samples from patients with acute hepatitis A. Simple PCR was positive in 5 samples and PRC-Southern blot was positive in 10. All the serum samples obtained during the first week of onset were HAV-RNA positive and 50% of those obtained during the second week were positive. None of the serum samples obtained after the second week of onset were HAV-RNA positive. None of the serum samples from the 11 patients with acute hepatitis B or from the 15 patients with non-A, non-E acute hepatitis were positive for HAV-RNA. No significant relationship was detected between HAV-RNA detection and an IgM anti-HAV or ALT positive result. In conclusion, the presence of HAV-RNA in acute hepatitis A is frequent but the PCR Southern blot technique is required for detection, which is transitory during the first weeks after onset.