Cell Viability in a Cryopreserved Human Cancellous Allograft

Purpose

To determine the persistence of living cells in cryopreserved bone grafts as well as their biological potential.

Materials and methods

Several cancellous bone fragments were processed that had been extracted from a bone-bank cryopreserved femoral condyle used in a revision total hip arthroplasty. After fragment lavage and digestion, a group of cells were isolated that were deposited in an α-MEM culture medium supplemented with 10% bovine fetal serum (BFS) (GIBCO) and 1% penicillin-streptomycin (GIBCO) and cultured under standard conditions at serum-free 37° C and 5% CO₂ enriched air (BCO).

Results

Some spindle-like cells bound to the plastic surface of the culture plate at 48 hs from processing. After 10 days’ culture, cells quickly started proliferating and generating colonies. Once the culture was expanded, the isolated population of cells was phenotyped. The expression of the surface markers was analyzed by means of flow cytometry and showed an expression pattern similar to that obtained for the population of mesenchymal stem cells derived from human bone marrow.

Conclusions

Bone cryopreserved allografts contain viable cells that could correspond, on the basis of their mesenchymal lineage and their low degree of morphological differentiation, to osteogenerating cell precursors.

Objetivo

Determinar la persistencia de células vivas en injertos óseos criopreservados y su potencialidad biológica.

Material y métodos

Se procesaron diversos fragmentos óseos esponjosos provenientes de un cóndilo femoral crioconservado, de nuestro banco de huesos, utilizado en la cirugía de un recambio de prótesis de cadera. Previo lavado y digestión de los fragmentos, se aislaron células que fueron depositadas en un medio de cultivo α-MEM suplementado con un 10% de suero fetal bovino (FBS) (GIBCO) y un 1% de penicilina-estreptomicina (GIBCO) y cultivadas en condiciones estándar a 37° C y 5% CO₂ en aire enriquecido (BCO) sin suero.

Resultados

Algunas células con aspecto fusiforme se adhirieron al plástico de la placa de cultivo a las 48 horas del procesamiento. Después de 10 días en cultivo, las células empezaron a proliferar rápidamente y a generar colonias. Una vez expandido el cultivo, se procedió al fenotipaje de la población celular aislada. La expresión de los marcadores de superficie analizada mediante citometría de flujo mostró un patrón de expresión similar al obtenido para la población de células madre mesenquimales derivadas de médula ósea humana.

Conclusiones

Los aloinjertos óseos criopreservados contienen células viables que pueden corresponder, atendiendo a su estirpe mesenquimal y a su escaso grado de diferenciación morfológica, a precursores de células osteoformadoras.