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Para ello se realiza inicialmente una elusión de la evidencia en agua destilada con un <span class="elsevierStyleItalic">buffer</span><a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0070"><span class="elsevierStyleSup">3</span></a> para que los espermatozoides se liberen al medio. Esta ha sido la técnica convencional empleada en los laboratorios, pero se requiere aplicar una técnica que permita una mejor liberación de estas células al medio y sin sufrir alteración de su morfología<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0075"><span class="elsevierStyleSup">4</span></a>. Por lo anterior se pretende mejorar la eficiencia para la recuperación de espermatozoides en la investigación de los presuntos delitos sexuales en laboratorios forenses haciendo una variación del método que permitirá la mayor liberación de espermatozoides y así aumentar la positividad en la casuística.</p></span><span id="sec0010" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0070">Materiales y métodos</span><span id="sec0015" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0075">Tipo de estudio</span><p id="par0015" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Se realizó un estudio experimental donde se compararon 2 técnicas para la recuperación de espermatozoides.</p></span><span id="sec0020" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0080">Descripción del experimento</span><p id="par0020" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Para realizar el procedimiento se impregnaron hisopos de algodón con una muestra conocida de semen. La muestra de semen fue aportada por un voluntario sano y recolectada en un tubo plástico estéril. Se prepararon diluciones: 1:1, 1:10, 1:100, 1:250 y 1:500, cuyo recuento de espermatozoides se realizó mediante cámara de Neubauer.</p><p id="par0025" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Se adicionaron 20<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>μl por dilución a los hisopos con micropipeta por triplicado para ambos métodos, evitando contaminación cruzada; utilizando tijeras de disección se desprendió una porción de algodón de los hisopos, y se depositó en viales con 1<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>ml de agua destilada estéril, se dejaron 30<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>min en cadena de frío.</p><p id="par0030" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Del total de 30 muestras, 15 fueron tratadas en agitación magnética por 5<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>min y las otras 15 fueron sometidas a ultrasonido, empleando sonicador (35<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>kHz) por 15<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>min de manera continua. Posteriormente se extrajo el remanente de algodón y se centrifugó a 14.000<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>rpm durante un minuto, finalizado este paso se retiró el sobrenadante y el <span class="elsevierStyleItalic">pellet</span> se deposita en láminas portaobjetos en 2 volúmenes (3<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>μl y 5<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>μl).</p><p id="par0035" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Las muestras fueron fijadas a 60<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>°C durante 30<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>min, y se colorearon mediante la tinción «Árbol de Navidad»<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0080"><span class="elsevierStyleSup">5,6</span></a>. Posteriormente se procedió a realizar el recuento de espermatozoides utilizando el método de búsqueda por franjas, y los resultados fueron registrados (<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#fig0005">fig. 1</a>).</p><elsevierMultimedia ident="fig0005"></elsevierMultimedia><p id="par0040" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Finalmente se calculó el promedio, número y porcentaje de recuperación de espermatozoides para cada una de las diluciones en los volúmenes analizados. Se compararon proporciones de recuperación de espermatozoides utilizando la prueba ultrasonido y la prueba tradicional para los volúmenes de 3<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>μl y 5<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>μl mediante el test de Chi-cuadrado.</p></span></span><span id="sec0025" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0085">Resultados</span><p id="par0045" class="elsevierStylePara elsevierViewall">En la muestra inicial de semen puro se obtuvo un recuento de 23.837 espermatozoides por milímetro cúbico, de la misma manera en cada una de las diluciones encontrando un total de 359 células espermáticas en la dilución 1:10, 225 en la 1:100, 81 en la 1:250 y 25 en la 1:500, evidenciado una reducción significativa de las células con el aumento de la dilución.</p><p id="par0050" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Los resultados obtenidos de la observación microscópica una vez realizada la lectura de los extractos de los hisopos para la técnica de solo agitación en 3<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>μl y 5<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>μl por triplicado se describen en la <a class="elsevierStyleCrossRef" href="#tbl0005">tabla 1</a>.</p><elsevierMultimedia ident="tbl0005"></elsevierMultimedia><p id="par0055" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Se obtuvo un recuento significativo superior para todas las eluciones y distintos sedimentos (3 y 5<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>μl) tras el tratamiento con ultrasonido, en comparación con la técnica de elución tradicional (<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#tbl0005">tabla 1</a>). Para las diluciones mayores, incluso, se recuperaron un número de espermatozoides en escasa cantidad. Esto permitió considerar el indicio como positivo.</p><p id="par0060" class="elsevierStylePara elsevierViewall">En el volumen de 3<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>μl la muestra de semen total recuperó 805 células para la técnica de agitación y 1.020 con la técnica con ultrasonido, para la dilución de 1:10 se extrajeron 11 espermatozoides para agitación y 63 para ultrasonido, a partir la dilución de 1:100 no se extrajeron espermatozoides con la aplicación de solo agitación, sin embargo se obtuvieron 2 espermatozoides con la técnica de ultrasonido en las demás diluciones<span class="elsevierStyleItalic">.</span></p><p id="par0065" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Para el recuento realizado en el volumen de 5<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>μl en la muestra de semen total sin exposición al ultrasonido se obtuvieron 507 células a diferencia de la muestra expuesta a ultrasonido donde se obtuvieron 1.507 espermatozoides, una diferencia igual al 29,2%. De igual manera, a partir de la dilución de 1:250 en el método sin exposición al ultrasonido no se recuperaron espermatozoides a diferencia de las muestras expuestas a ultrasonido donde se recuperaron hasta 2 espermatozoides.</p><p id="par0070" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Según la comparación inicial y los hallazgos obtenidos de las muestras sometidas a ultrasonido y aquellas que no fueron expuestas al ultrasonido se evidencia una recuperación en la dilución de 1:10 para el volumen de 3<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>μl, con la técnica estándar se recuperó el 3,1% y con la técnica de ultrasonido el 17,5%; observándose una diferencia estadísticamente significativa en el porcentaje de recuperación (p<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span><<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>0,001). Esto demuestra una recuperación de 6 veces más espermatozoides con la técnica de ultrasonido.</p><p id="par0075" class="elsevierStylePara elsevierViewall">En el volumen de 5<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>μl la técnica estándar recuperó el 5,6% y el ultrasonido un 20%, observándose una diferencia estadísticamente significativa en el porcentaje de recuperación (p<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span><span class="elsevierStyleItalic">=</span><span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>0,000) presentando una recuperación de 4 veces más espermatozoides con ultrasonido. Para la dilución de 1:100 las muestras sometidas a ultrasonido recuperaron el 0,88% con respecto al conteo inicial, representando el doble de las que no fueron sometidas al ultrasonido y a partir de la dilución 1:250 la única técnica que recuperó espermatozoides fue con ultrasonido.</p></span><span id="sec0030" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0090">Discusión</span><p id="par0080" class="elsevierStylePara elsevierViewall">La evidencia biológica en los casos de delitos sexuales puede identificar un victimario o excluir a un indiciado; en el estudio de estos delitos se hace necesaria la recolección de evidencia biológica, en el cuerpo o en las prendas de vestir<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0090"><span class="elsevierStyleSup">7,8</span></a>, esta recolección en la victima se realiza mediante un frotis con hisopo<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0100"><span class="elsevierStyleSup">9</span></a>, donde queda contenida la muestra para realizar la extracción de las células espermáticas a través del estudio microscópico<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0105"><span class="elsevierStyleSup">10,11</span></a>, razón por la cual se utilizaron como soporte de las muestras los hisopos de algodón.</p><p id="par0085" class="elsevierStylePara elsevierViewall">El uso de ultrasonido durante el proceso de extracción del fluido biológico, facilita la liberación de células al medio eluyente, debido a que las ondas, que se desplazan en el medio acuso liberan los espermatozoides fijados al algodón. Esto se evidenció en el presente estudio por la mayor proporción de recuperación de espermatozoides en las diferentes diluciones, incluso en muestras negativas a altas diluciones permitiendo la recuperación de espermatozoides, evento también observado por Hueske<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0110"><span class="elsevierStyleSup">11</span></a> en prendas de vestir.</p><p id="par0090" class="elsevierStylePara elsevierViewall">La relación método de extracción volumen no permitió establecer diferencias significativas, en ambas extracciones los resultados fueron coincidentes, para confirmar este hallazgo se sugiere nuevas investigaciones con un mayor tamaño de muestras.</p><p id="par0095" class="elsevierStylePara elsevierViewall">En el presente estudio se evidenció que el uso del ultrasonido puede ser una técnica eficiente para la recuperación de espermatozoides. El presente experimento solo utilizó semen puro en un soporte de algodón, por lo que se requiere replicar los hallazgos en condiciones reales utilizando otros soportes y la presencia de células procedentes de la víctima y contenido espermático.</p><p id="par0100" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Este estudio pone en evidencia la necesidad de que los laboratorios evalúen la eficiencia de los diferentes métodos aplicados para la recuperación de espermatozoides, dado que una adecuada estandarización y validación de los diferentes métodos de análisis mejoraría las diferencias que se puedan presentar entre los diferentes laboratorios.</p></span><span id="sec0035" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0095">Conflicto de intereses</span><p id="par0105" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Los autores declaran no tener ningún conflicto de intereses.</p></span></span>" "textoCompletoSecciones" => array:1 [ "secciones" => array:11 [ 0 => array:3 [ "identificador" => "xres1137862" "titulo" => "Resumen" "secciones" => array:4 [ 0 => array:2 [ "identificador" => "abst0005" "titulo" => "Objetivo" ] 1 => array:2 [ "identificador" => "abst0010" "titulo" => "Materiales y métodos" ] 2 => array:2 [ "identificador" => "abst0015" "titulo" => "Resultados" ] 3 => array:2 [ "identificador" => "abst0020" "titulo" => "Conclusión" ] ] ] 1 => array:2 [ "identificador" => "xpalclavsec1069550" "titulo" => "Palabras clave" ] 2 => array:3 [ "identificador" => "xres1137863" "titulo" => "Abstract" "secciones" => array:4 [ 0 => array:2 [ "identificador" => "abst0025" "titulo" => "Objective" ] 1 => array:2 [ "identificador" => "abst0030" "titulo" => "Materials and methods" ] 2 => array:2 [ "identificador" => "abst0035" "titulo" => "Results" ] 3 => array:2 [ "identificador" => "abst0040" "titulo" => "Conclusion" ] ] ] 3 => array:2 [ "identificador" => "xpalclavsec1069549" "titulo" => "Keywords" ] 4 => array:2 [ "identificador" => "sec0005" "titulo" => "Introducción" ] 5 => array:3 [ "identificador" => "sec0010" "titulo" => "Materiales y métodos" "secciones" => array:2 [ 0 => array:2 [ "identificador" => "sec0015" "titulo" => "Tipo de estudio" ] 1 => array:2 [ "identificador" => "sec0020" "titulo" => "Descripción del experimento" ] ] ] 6 => array:2 [ "identificador" => "sec0025" "titulo" => "Resultados" ] 7 => array:2 [ "identificador" => "sec0030" "titulo" => "Discusión" ] 8 => array:2 [ "identificador" => "sec0035" "titulo" => "Conflicto de intereses" ] 9 => array:2 [ "identificador" => "xack387574" "titulo" => "Agradecimientos" ] 10 => array:1 [ "titulo" => "Bibliografía" ] ] ] "pdfFichero" => "main.pdf" "tienePdf" => true "fechaRecibido" => "2017-10-24" "fechaAceptado" => "2018-01-18" "PalabrasClave" => array:2 [ "es" => array:1 [ 0 => array:4 [ "clase" => "keyword" "titulo" => "Palabras clave" "identificador" => "xpalclavsec1069550" "palabras" => array:4 [ 0 => "Espermatozoides" 1 => "Delitos sexuales" 2 => "Ultrasonido" 3 => "Genética forense" ] ] ] "en" => array:1 [ 0 => array:4 [ "clase" => "keyword" "titulo" => "Keywords" "identificador" => "xpalclavsec1069549" "palabras" => array:4 [ 0 => "Spermatozoa" 1 => "Sex offences" 2 => "Ultrasound" 3 => "Forensic genetics" ] ] ] ] "tieneResumen" => true "resumen" => array:2 [ "es" => array:3 [ "titulo" => "Resumen" "resumen" => "<span id="abst0005" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0010">Objetivo</span><p id="spar0005" class="elsevierStyleSimplePara elsevierViewall">Evaluar la eficiencia para la recuperación de espermatozoides utilizando una técnica estándar y una técnica basada en ultrasonido.</p></span> <span id="abst0010" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0015">Materiales y métodos</span><p id="spar0010" class="elsevierStyleSimplePara elsevierViewall">Se realizó un estudio experimental para comparar 2 técnicas de recuperación de espermatozoides: <span class="elsevierStyleItalic">1)</span> la técnica estándar, basada en la elución de la evidencia en agua destilada con un solución tampón, y <span class="elsevierStyleItalic">2)</span> una técnica modificada, que incluyó la concentración por centrifugado y el uso de ultrasonido. La eficacia se basó en el recuento manual de espermatozoides utilizando diluciones de 1:1 a 1:500.</p></span> <span id="abst0015" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0020">Resultados</span><p id="spar0015" class="elsevierStyleSimplePara elsevierViewall">La técnica modificada mejoró sustancialmente la recuperación de los espermatozoides. En la dilución 1:10, la técnica estándar recuperó el 3,1%, la modificada recuperó un 17,5%; representando un aumento de 6 veces más en la recuperación. La técnica modificada fue la única capaz de recuperar espermatozoides en diluciones superiores a 1:250.</p></span> <span id="abst0020" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0025">Conclusión</span><p id="spar0020" class="elsevierStyleSimplePara elsevierViewall">La implementación de la técnica ultrasónica mejora la recuperación de espermatozoides.</p></span>" "secciones" => array:4 [ 0 => array:2 [ "identificador" => "abst0005" "titulo" => "Objetivo" ] 1 => array:2 [ "identificador" => "abst0010" "titulo" => "Materiales y métodos" ] 2 => array:2 [ "identificador" => "abst0015" "titulo" => "Resultados" ] 3 => array:2 [ "identificador" => "abst0020" "titulo" => "Conclusión" ] ] ] "en" => array:3 [ "titulo" => "Abstract" "resumen" => "<span id="abst0025" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0035">Objective</span><p id="spar0025" class="elsevierStyleSimplePara elsevierViewall">To evaluate the efficiency for the recovery of spermatozoa using the standard technique and a technique based on ultrasound.</p></span> <span id="abst0030" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0040">Materials and methods</span><p id="spar0030" class="elsevierStyleSimplePara elsevierViewall">An experimental study was carried out to compare two techniques for spermatozoa recovery; i) the standard technique, based on elution of the evidence in distilled water with a buffer and, ii) a modified technique that included concentration by centrifugation and ultrasound. The efficiency was based on manual counting of spermatozoa using dilutions 1:1 to 1:500.</p></span> <span id="abst0035" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0045">Results</span><p id="spar0035" class="elsevierStyleSimplePara elsevierViewall">The modified technique substantially improved the recovery of spermatozoa. While the standard technique recovered 3.1%, the modified one resulted in a recovery of 17.5% using the 1:10 dilution, which represents a six-fold increase. The modified technique was the only one able to recover spermatozoa in dilutions higher than 1:250.</p></span> <span id="abst0040" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0050">Conclusion</span><p id="spar0040" class="elsevierStyleSimplePara elsevierViewall">The implementation of the ultrasonic technique improves the recovery of spermatozoa.</p></span>" "secciones" => array:4 [ 0 => array:2 [ "identificador" => "abst0025" "titulo" => "Objective" ] 1 => array:2 [ "identificador" => "abst0030" "titulo" => "Materials and methods" ] 2 => array:2 [ "identificador" => "abst0035" "titulo" => "Results" ] 3 => array:2 [ "identificador" => "abst0040" "titulo" => "Conclusion" ] ] ] ] "multimedia" => array:2 [ 0 => array:7 [ "identificador" => "fig0005" "etiqueta" => "Figura 1" "tipo" => "MULTIMEDIAFIGURA" "mostrarFloat" => true "mostrarDisplay" => false "figura" => array:1 [ 0 => array:4 [ "imagen" => "gr1.jpeg" "Alto" => 3536 "Ancho" => 2297 "Tamanyo" => 229885 ] ] "descripcion" => array:1 [ "es" => "<p id="spar0045" class="elsevierStyleSimplePara elsevierViewall">Descripción del experimento.</p>" ] ] 1 => array:8 [ "identificador" => "tbl0005" "etiqueta" => "Tabla 1" "tipo" => "MULTIMEDIATABLA" "mostrarFloat" => true "mostrarDisplay" => false "detalles" => array:1 [ 0 => array:3 [ "identificador" => "at1" "detalle" => "Tabla " "rol" => "short" ] ] "tabla" => array:1 [ "tablatextoimagen" => array:1 [ 0 => array:2 [ "tabla" => array:1 [ 0 => """ <table border="0" frame="\n \t\t\t\t\tvoid\n \t\t\t\t" class=""><thead title="thead"><tr title="table-row"><th class="td-with-role" title="table-head ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top" scope="col">Dilución \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head " align="left" valign="top" scope="col">Concentración de semen puro \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head " colspan="2" align="center" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Conteo en 3<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>μl</th><th class="td" title="table-head " colspan="2" align="center" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Conteo en 5<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>μl</th></tr><tr title="table-row"><th class="td" title="table-head " align="" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black"> \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head " align="" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black"> \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Técnica de extracción sin ultrasonido \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Técnica de extracción con ultrasonido \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Técnica de extracción sin ultrasonido \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Técnica de extracción con ultrasonido \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</th></tr></thead><tbody title="tbody"><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">1:1 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="left" valign="top">23.837 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="left" valign="top">805 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="left" valign="top">1.020 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="left" valign="top">507 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="left" valign="top">1.507 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">1:10 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="left" valign="top">359 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="left" valign="top">11 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="left" valign="top">63 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="left" valign="top">20 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="left" valign="top">72 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; 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Original breve
Eficacia del tratamiento ultrasónico en la recuperación de espermatozoides en la investigación de delitos sexuales
Efficacy of an ultrasound technique in the recovery of spermatozoa during the investigation of sexual offenses
Ana Nataly Lezcano Martinez, Luz Eliana Giraldo Vasquez, Estefania Vanegas Londoño, Tatiana Espinosa Montoya, Jose Daniel Zuluaga Barrios, Carlos Federico Molina Castaño
Corresponding author
Tecnológico de Antioquia Institución Universitaria, Medellín, Colombia