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Sobreexpresión de MMP-2 en cultivos de fibroblastos procedentes de fascia transversalis de pacientes jóvenes portadores de hernias inguinales directas (II)
MMP-2 overexpression in cultured fibroblasts derived from fascia transversalis in young patients with direct inguinal hernias (II)
JM. Bellón Caneiroa, N. García-Honduvillaa, G. Pascual Gonzáleza, MJ. Gimeno Longasa, A. Bajo Chuecaa, A. Guerrero Vaquerob, P. López Hervásc, J. Buján Varelaa
a Departamento de Ciencias Morfológicas y Cirugía. Facultad de Medicina. Universidad de Alcalá. Madrid.
b Instituto Carlos III. Madrid.
c Hospital Universitario Ramón y Cajal. Madrid.
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a pesar de la existencia de factores de tipo anat&#243;mico &#40;persistencia del conducto peritoneo-vaginal&#44; inserci&#243;n alta del arco del transverso&#41;&#44; y factores asociados a otras enfermedades &#40;obesidad&#44; enfermedad pulmonar obstructiva cr&#243;nica&#44; estre&#241;imiento&#41;&#44; deber&#237;a tener un sustrato biol&#243;gico&#46; De hecho&#44; algunas enfermedades&#44; como los s&#237;ndromes de Marfan y Ehlers-Danlos&#44; la osteog&#233;nesis imperfecta<span class="elsevierStyleSup">3</span> o la luxaci&#243;n cong&#233;nita de cadera<span class="elsevierStyleSup">4</span> se asocian con m&#225;s frecuencia a procesos herniarios que a la poblaci&#243;n normal&#46; </p><p class="elsevierStylePara"> Entre las estructuras que conforman la pared posterior del canal inguinal&#44; que pueden impedir la formaci&#243;n de hernias y de una manera especial las hernias de tipo directo&#44; se encuentra la <span class="elsevierStyleItalic">fascia transversalis</span> &#40;FT&#41;&#46; </p><p class="elsevierStylePara"> Se han efectuado estudios de muestras de tejido de la vaina de los m&#250;sculos rectos anteriores del abdomen<span class="elsevierStyleSup">5</span>&#44; crem&#225;ster&#44; sacos herniarios<span class="elsevierStyleSup">6</span>&#44; e incluso de la piel<span class="elsevierStyleSup">7</span> de pacientes con hernias&#46; Se han estudiado la expresi&#243;n de ciertos tipos de col&#225;geno<span class="elsevierStyleSup">8</span> y algunas disregulaciones enzim&#225;ticas<span class="elsevierStyleSup">9</span>&#46; Apenas existen estudios sobre alteraciones de la FT&#46; Nuestro grupo&#44; preocupado por la etiopatogenia de las hernias&#44; comenz&#243; estudiando muestras de tejido procedentes de biopsias de FT en pacientes con hernias&#46; Correlacionamos aspectos ultraestructurales con actividad de col&#225;geno&#44; as&#237; como degradaci&#243;n del mismo a trav&#233;s del estudio de algunas metaloproteinasas &#40;MMPs&#41;&#46; Objetivamos un aumento de la expresi&#243;n de la metaloproteinasa 2 &#40;MMP-2&#41; en tejido procedente de la FT&#44; de pacientes portadores de hernias directas<span class="elsevierStyleSup">10</span>&#46; Esta enzima degrada e interviene en el <span class="elsevierStyleItalic">turnover</span> de la matriz extracelular en relaci&#243;n con ciertos tipos de col&#225;genos y elastina&#46; Su expresi&#243;n se encuentra aumentada en procesos como prolapsos genitourinarios<span class="elsevierStyleSup">11</span> y aneurismas a&#243;rticos<span class="elsevierStyleSup">12&#44;13</span>&#46; En esta &#250;ltima afecci&#243;n se ha detectado que los pacientes tienen mayor incidencia de hernias<span class="elsevierStyleSup">14&#44;15</span>&#46; Esto nos llev&#243; a profundizar y a plantearnos una posible hip&#243;tesis del comportamiento observado con la MMP-2 en las biopsias de FT de pacientes con hernias&#46; Posiblemente podr&#237;a existir un mecanismo similar que explicara por qu&#233;&#44; en algunos casos&#44; la pared posterior del canal inguinal constituida por la FT permanece inalterable y&#44; en otros&#44; presenta fallos que ocasionan defectos herniarios&#46; </p><p class="elsevierStylePara"> Para ello dise&#241;amos un estudio <span class="elsevierStyleItalic">in vitro</span> en el que hemos investigado&#44; a trav&#233;s de cultivos de c&#233;lulas tomadas de FT&#44; la expresi&#243;n de MMP con el objetivo de comprobar si las modificaciones encontradas en el tejido se manten&#237;an en condiciones de cultivo&#46; Esto podr&#237;a&#44; en caso de confirmarse&#44; sugerir la existencia de alg&#250;n factor gen&#233;tico como inductor de esta afecci&#243;n&#46; De ser as&#237;&#44; los tipos herniarios en los que se demostrara alguna alteraci&#243;n estructural de base en la FT podr&#237;an ser subsidiarios de reparaci&#243;n primaria con un material prot&#233;sico&#46; </p><p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold">Pacientes y m&#233;todos</span></p><p class="elsevierStylePara">  Las muestras de FT control fueron obtenidas de pacientes donantes en el transcurso de extracciones multiorg&#225;nicas destinadas a trasplante&#46; Las otras muestras de FT procedieron de pacientes intervenidos de hernia inguinal&#46; En todos los casos&#44; la biopsia se efectu&#243; siempre en la misma zona central de la pared posterior del canal inguinal&#46; Todas las muestras fueron tomadas de pacientes con hernias primarias&#46; </p><p class="elsevierStylePara"> Se establecieron los siguientes grupos de estudio&#58; grupo control &#40;n &#61; 10&#41;&#44; grupo de pacientes con hernia indirecta &#40;n &#61; 36&#41; y grupo de pacientes con hernia directa &#40;n &#61; 32&#41;&#46; </p><p class="elsevierStylePara"> Las edades de los pacientes&#44; todos ellos varones&#44; oscilaron entre 20 y 60 a&#241;os &#40;media&#44; 39&#44;8 a&#241;os&#41;&#46; Atendiendo a este par&#225;metro&#44; los pacientes fueron subdivididos en dos subgrupos&#58; I&#44; 20-40 a&#241;os y II&#44; 41-60 a&#241;os&#46; </p><p class="elsevierStylePara"> Inmediatamente despu&#233;s de la cirug&#237;a&#44; las muestras fueron introducidas en un medio de cultivo est&#233;ril Minimun Essential Medium &#40;MEM&#41; &#40;Gibco BRL&#44; Life Technologie&#44; Barcelona-Espa&#241;a&#41; suplementado con 100 U penicilina&#47;100 &#181;g&#44; y streptomicina &#40;Gibco BRL&#41;&#44; para su transporte al laboratorio&#46; A continuaci&#243;n fueron sometidas a congelaci&#243;n &#40;&#173;20 &#176;C&#41; para su procesamiento y estudio bioqu&#237;mico posterior&#46;  </p><p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold">Cultivo de fibroblastos</span></p><p class="elsevierStylePara"> Las muestras de FT fueron procesadas en condiciones est&#233;riles en una campana de flujo laminar clase II &#40;Telstar AV 30&#47;70 Telstar S&#46;A&#46;&#44; Espa&#241;a&#41;&#46; </p><p class="elsevierStylePara"> La FT fue separada del tejido graso asociado mediante disecci&#243;n con hoja de bistur&#237; y a continuaci&#243;n cortada en peque&#241;os fragmentos de aproximadamente 1 mm<span class="elsevierStyleSup">2</span>&#46; Una vez obtenidos los explantos&#44; fueron colocados sobre la superficie de cultivo de frascos Roux de 25 cm<span class="elsevierStyleSup">2</span> de superficie &#40;Nuclon-Intermed&#44; Nunc A&#47;S&#44; Roskildo&#44; Dinamarca&#41; a los que previamente se a&#241;adieron 0&#44;5 ml de medio BIO-AMF 2 &#40;Biological Industries&#44; Kubbutz Beit Haemek&#44; Israel&#41; para mantener humedecida la superficie de cultivo y permitir una mejor adherencia de los explantos&#46; </p><p class="elsevierStylePara"> Terminado este proceso&#44; los frascos de cultivo fueron incubados&#44; en posici&#243;n vertical&#44; a 37 &#176;C en presencia de un 5&#37; de CO<span class="elsevierStyleInf">2</span>&#44; en estufa de cultivo &#40;Forma Scientific Inc&#46;&#44; Ohio&#44; EE&#46;UU&#46;&#41; durante 2 h&#46; Transcurrido este tiempo&#44; se a&#241;adieron 2&#44;5 ml&#47;frasco de medio BIO-AMF 2 y se incubaron en posici&#243;n horizontal bajo las mismas condiciones anteriores&#44; teniendo especial cuidado de no provocar movimientos bruscos para evitar el despegamiento de los explantos&#46; El medio de cultivo fue renovado cuidadosamente dos veces por semana&#46; </p><p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold">ELISA</span></p><p class="elsevierStylePara"> Alcanzada la subconfluencia celular&#44; los medios de cultivo fueron recogidos y centrifugados a 200 g durante 7 min&#46; El sobrenadante fue almacenado a &#173;70 &#176;C hasta su procesamiento&#46; Los fibroblastos fueron desprendidos de la superficie de cultivo mediante tripsinizaci&#243;n y se realiz&#243; el recuento de los mismos en una c&#225;mara de Neubauer &#40;Weber Scientific International Ltd&#46;&#44; Alemania&#41;&#46; Los valores de MMP fueron detectados en los medios de cultivo mediante la utilizaci&#243;n de un equipo ELISA frente a MMP-2 y MMP-9 &#40;The Binding Site&#44; Birmingham&#44; Reino Unido&#41;&#46;  </p><p class="elsevierStylePara"> Las microplacas fueron incubadas durante 1 h a temperatura ambiente con 100 &#181;l&#47;pocillo de cada una de las muestras&#46; A continuaci&#243;n&#44; se lavaron todos los pocillos tres veces con 250-300 &#181;l de soluci&#243;n de lavado y se a&#241;adieron 100 &#181;l&#47;pocillo de anticuerpo biotinado&#46; Tras 1 h de incubaci&#243;n a temperatura ambiente&#44; se retir&#243; el exceso de anticuerpo y cada uno de los pocillos se lav&#243; tres veces&#46; Se a&#241;adieron 100 &#181;l&#47;pocillo de estreptoavidina-peroxidasa y se incubaron a temperatura ambiente durante 30 min&#46; Transcurrido este tiempo se lavaron siguiendo los pasos anteriores y se a&#241;adieron 100 &#181;l&#47;pocillo de sustrato cromog&#233;nico &#40;TMB&#41;&#46; Las muestras se incubaron a temperatura ambiente durante 10 min&#46; Las placas fueron le&#237;das a una densidad &#243;ptica de 450 nm&#44; en un contador de microplaca ELX 800 &#40;Bio-Tek Instruments Inc&#46;&#44; Izasa&#44; Barcelona&#44; Espa&#241;a&#41;&#46; Los resultados fueron expresados en enzima&#47;10<span class="elsevierStyleSup">6</span> c&#233;lulas&#46; </p><p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold">Estudio inmunohistoqu&#237;mico </span></p><p class="elsevierStylePara"> Las c&#233;lulas fueron fijadas en formol al 10&#37;&#44; lavadas en PBS &#40;pH&#44; 7&#44;4&#41; y procesadas para detecci&#243;n de MMP-2 y MMP-9 usando dos anticuerpos monoclonales &#40;Binding Site&#44; Birmingham&#44; Reino Unido&#41;&#46; La reacci&#243;n ant&#237;geno-anticuerpo fue detectada por una t&#233;cnica de peroxidasa-antiperoxidasa &#40;PAP&#41;&#46; El sustrato cromog&#233;nico empleado fue el 3 amino-9 etil-carbazol en N&#44;N-dimetilformamida&#46; Los cultivos se examinaron en un microscopio &#40;Zeiss&#44; Alemania&#41;&#46; </p><p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold">An&#225;lisis por immunoblot para MMP-2 y MMP-9</span></p><p class="elsevierStylePara"> Cada muestra fue diluida al 50&#37; en soluci&#243;n tamp&#243;n &#40;0&#44;12 Tris-baser pH 6&#44;8&#44; con un 20&#37; de glicerol&#44; un 0&#44;04&#37; de azul de bromofenol&#44; un 6&#37; de dodecil sulfato s&#243;dico en presencia o ausencia de un 10&#37; de 2-mercaptoetanol&#41;&#46; A continuaci&#243;n&#44; las muestras fueron cargadas en un gel de poliacrilamida para electroforesis&#44; con el 6&#37; de dodecil sulfato s&#243;dico &#40;SDS-PAGE&#41;&#44; de acuerdo con el m&#233;todo modificado por Laemmli<span class="elsevierStyleSup">16</span>&#46; Finalizada la electroforesis&#44; los geles fueron transferidos a membranas de nitrocelulosa &#40;BioRad&#44; Hercules&#44; California&#44; EE&#46;UU&#46;&#41; seg&#250;n el m&#233;todo descrito por Towbin et al<span class="elsevierStyleSup">17</span>&#46; El exceso de sitios de uni&#243;n a prote&#237;nas fue saturado con TBS &#40;20 mmol&#47;l de Tris-base y 137 mmol&#47;l de NaCl&#44; pH 7&#44;6&#41;&#46; Las membranas transferidas fueron incubadas durante 1 h a temperatura ambiente&#44; con anticuerpo anti-MMP-2 y anti-MMP-9 para humanos &#40;diluci&#243;n 1&#58;1&#46;000 en TBS&#41;&#46; La reacci&#243;n inmunohistoqu&#237;mica fue revelada con IgG de conejo conjugada con peroxidasa &#40;Southern Biotechnology Associates&#44; Inc&#46;&#44; Birmingham&#44; EE&#46;UU&#46;&#41; &#40;diluci&#243;n 1&#58;1&#46;000 en TBS&#41; y analizada por luminiscencia<span class="elsevierStyleSup">18</span>&#46; </p><p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold">Actividad gelatinol&#237;tica</span></p><p class="elsevierStylePara"> El medio condicionado procedente de los cultivos de fibroblastos fue diluido en proporci&#243;n 1&#58;1 en soluci&#243;n tamp&#243;n &#40;0&#44;12 Tris-base pH 6&#44;8&#44; con un 20&#37; de glicerol&#44; un 0&#44;04&#37; de azul de bromofenol y un 6&#37; dodecil sulfato s&#243;dico&#41;&#46; Las muestras fueron analizadas por t&#233;cnicas de zimograf&#237;a usando un 10&#37; de SDS-PAGE con un 0&#44;1&#37; &#40;W&#47;v&#41; de gelatina &#40;SIGMA&#44; Chemical&#44; Espa&#241;a&#41; como sustrato&#46; Cada carril del gel fue cargado con 3 &#181;g de prote&#237;na total&#46; La electroforesis fue realizada en condiciones de 25 mA&#47;gel a 4 &#176;C de temperatura&#46; A continuaci&#243;n&#44; los geles fueron lavados dos veces en Tris &#40;50 mmol&#47;l&#41;&#44; pH 7&#44;4&#44; que conten&#237;a un 2&#44;5&#37; &#40;v&#47;v&#41; de Trit&#243;n X-100&#44; durante un tiempo total de 1 h&#46; Este proceso fue seguido por 2 lavados de 10 min con Tris &#40;50 mmol&#47;l&#41;&#44; pH 7&#44;4&#46; Despu&#233;s se retir&#243; el SDS y se incubaron los geles en agitaci&#243;n durante toda la noche a 37 &#176;C en Tris &#40;50 mmol&#47;l&#41;&#44; pH 7&#44;5&#44; con 10 mmol&#47;l de CaCl<span class="elsevierStyleInf">2</span>&#44; 0&#44;15 mmol&#47;l de NaCl&#44; un 0&#44;1&#37; &#40;v&#47;v&#41; de Trit&#243;n X-100 y un 0&#44;02&#37; de azida s&#243;dica&#46; Transcurrido este tiempo&#44; los geles fueron te&#241;idos con un 0&#44;25&#37; de azul brillante de Coomasie R-250 &#40;SIGMA Chemical&#44; Espa&#241;a&#41; y posteriormente lavados en una soluci&#243;n acuosa compuesta por un 7&#44;5&#37; de &#225;cido ac&#233;tico y un 20&#37; de metanol&#46; Tras la realizaci&#243;n de la zimograf&#237;a&#44; las bandas aparecen de color blanco sobre un fondo azul&#46; La actividad degradati va de MMP-2 y MMP-9 fue valorada por t&#233;cnicas semicuantitativas de densitometr&#237;a &#243;ptica&#46; </p><p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold">An&#225;lisis estad&#237;stico</span></p><p class="elsevierStylePara"> Fue llevado a cabo empleando el test no param&#233;trico de la U de Mann-Whitney&#46; </p><p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold">Resultados</span></p><p class="elsevierStylePara"> La expresi&#243;n de MMP-2 en fibroblastos se detect&#243; en todos los grupos de estudio&#46; La presencia de MMP-2 fue mayor en los fibroblastos de pacientes con hernia directa pertenecientes al subgrupo 1 &#40;20-40 a&#241;os&#41;&#46; Los fibroblastos de la poblaci&#243;n del subgrupo II presentaron una menor intensidad en el marcaje que los procedentes del subgrupo I&#46; No se detect&#243; MMP-9 en ninguno de los grupos estudiados&#46; </p><p class="elsevierStylePara"> Todas las muestras estudiadas procedentes de los medios de cultivo por immunobloting&#44; tanto de la poblaci&#243;n control como de la poblaci&#243;n patol&#243;gica&#44; independientemente de la edad&#44; demuestran la presencia de MMP-2 &#40;fig&#46; 1A y B&#41;&#44; y no de MMP-9&#46; En presencia de agentes reductores &#40;2-mercaptoetanol&#41;&#44; la banda caracter&#237;stica de la MMP-2 &#40;aproximadamente 110 kD&#41; &#40;fig&#46; 2A&#41; es sustituida por una banda cuyo peso molecular est&#225; en torno a 67 kD &#40;fig&#46; 2B&#41;&#46;  <img src="3668931.JPG" width="229" height="284"></img><img src="3668932.JPG" width="229" height="374"></img></p><p class="elsevierStylePara"> La cuantificaci&#243;n de MMP-2 por ELISA en los medios de cultivo &#40;fig&#46; 3&#41; pone de manifiesto un incremento significativo de los valores de esta enzima en la poblaci&#243;n patol&#243;gica herniaria de tipo directo entre 20 y 40 a&#241;os&#44; con respecto a pacientes controles de la misma edad y pacientes portadores de hernia indirecta &#40;p &#60; 0&#44;05&#41;&#46; Sin embargo&#44; en el grupo de 40-60 a&#241;os&#44; la cantidad de MMP-2 secretada al medio en pacientes portadores de hernias directas es significativamente menor que en los grupos control y el grupo de hernia indirecta &#40;p &#60; 0&#44;05&#41;&#46; En la comparaci&#243;n entre grupos de edades&#44; solamente se han detectado diferencias significativas entre los pacientes portadores de hernia directa &#40;p &#60; 0&#44;05&#41;&#46;  <img src="3668933.JPG" width="229" height="252"></img></p><p class="elsevierStylePara"> La actividad gelatinol&#237;tica de la MMP-2 activa se expone en las figuras 4A y B&#46; La cuantificaci&#243;n de la misma &#40;fig&#46; 5&#41; evidenci&#243; un incremento significativo en el grupo de hernias perteneciente a la poblaci&#243;n del subgrupo I &#40;20-40 a&#241;os&#41; con respecto a los controles de la misma edad&#46; La cantidad de enzima activa mostraba un patr&#243;n similar al observado para el ELISA en la poblaci&#243;n del subgrupo II &#40;41-60 a&#241;os&#41;&#44; manteni&#233;ndose una disminuci&#243;n significativa en los pacientes portadores de hernia directa en relaci&#243;n con controles y pacientes con hernia indirecta &#40;p &#60; 0&#44;05&#41;&#46;  <img src="3668934.JPG" width="229" height="231"></img><span class="elsevierStyleBold"><img src="3668935.JPG" width="229" height="263"></img></span></p><p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold">Discusi&#243;n </span></p><p class="elsevierStylePara"> El balance entre la s&#237;ntesis y la degradaci&#243;n de la matriz extracelular es un factor importante para la integridad tisular&#46; Cambios o defectos en la matriz pueden provocar alteraciones en la arquitectura de la misma&#44; que pueden ocasionar modificaciones importantes en las propiedades mec&#225;nicas de los tejidos&#46; Profundizando en esta idea&#44; hab&#237;amos estudiado el papel de la MMP-2 en tejido procedente de FT&#44; encontrando un incremento de esta enzima degradativa en pacientes portadores de hernias de tipo directo&#46; </p><p class="elsevierStylePara"> En el presente trabajo nos planteamos comprobar si esta modificaci&#243;n podr&#237;a ser debida a factores ambientales o bien hubiese un componente m&#225;s estable que indujera modificaciones permanentes en los fibroblastos de la FT afectada por la patolog&#237;a herniaria&#46; Esto nos llev&#243; a realizar cultivos de fibroblastos con el fin de que todas las c&#233;lulas estuvieran en las mismas condiciones ambientales y poder determinar si las modificaciones encontradas en el tejido persist&#237;an en las condiciones de cultivo&#46; </p><p class="elsevierStylePara"> En la valoraci&#243;n de las metaloproteinasas &#40;MMP-2&#41; pro cedentes de sobrenadantes de cultivos de fibroblastos de pacientes normales y portadores de hernias&#44; hemos encontrado cambios significativos en la expresi&#243;n de la MMP-2&#46; Por immunobloting hemos detectado en todos los casos la presencia de una banda pr&#243;xima a 110 kD&#46; Sin embargo&#44; en presencia de un agente reductor&#44; como el mercaptoetanol&#44; esta banda desaparece siendo sustituida por una banda en el entorno de 67 kD&#46; Estos hallazgos parecen sugerir la presencia de MMP-2 en forma de d&#237;meros&#46; </p><p class="elsevierStylePara"> Para poder cuantificar la cantidad de MMP-2 expresada en medio de cultivo realizamos un an&#225;lisis mediante ELISA&#46; Objetivamos que la cantidad de MMP-2 secretada por los fibroblastos de pacientes portadores de hernias directas era significativamente mayor en el subgrupo I &#40;20-40 a&#241;os&#41;&#46; Cuando analizamos la cantidad de MMP-2 en la poblaci&#243;n del subgrupo II &#40;41-60 a&#241;os&#41;&#44; s&#243;lo encontramos variaciones significativas en pacientes portadores de hernia directa&#46; Si tenemos en cuenta el factor edad&#44; observamos una fuerte reducci&#243;n de secreci&#243;n de MMP-2 en los pacientes con hernia directa del subgrupo II&#46; Todo esto nos induce a pensar que existe una relaci&#243;n entre la existencia del proceso patol&#243;gico herniario y la secreci&#243;n de MMP-2&#46; Adem&#225;s&#44; el incremento significativo en pacientes j&#243;venes portadores de hernia directa podr&#237;a concordar con las caracter&#237;sticas macrosc&#243;picas de debilidad que presenta la FT en estos pacientes&#46;  </p><p class="elsevierStylePara"> Este an&#225;lisis no ser&#237;a concluyente si no valoramos la cantidad de MMP-2 en forma activa que ser&#237;a la que realmente tendr&#237;a capacidad para degradar la matriz extracelular&#46; Para ello realizamos un an&#225;lisis semicuantitativo de la actividad gelatinol&#237;tica&#44; encontrando en la zimograf&#237;a valores estad&#237;sticamente significativos en el caso de pacientes j&#243;venes portadores de hernias&#46; Esto corrobora en parte los datos anteriores&#44; ya que confirma que en la poblaci&#243;n de pacientes j&#243;venes con hernia directa no s&#243;lo hay una mayor expresi&#243;n de la enzima MMP-2&#44; sino tambi&#233;n de su forma activa&#46; Este hecho resulta muy interesante dada la poca frecuencia de aparici&#243;n de este tipo de hernias en pacientes j&#243;venes&#46; </p><p class="elsevierStylePara"> Otro hecho importante a rese&#241;ar es la coincidencia de la sobreexpresividad de esta enzima en otros tipos de afecciones&#44; como los aneurismas<span class="elsevierStyleSup">12&#44;13</span> y los prolapsos genitourinarios<span class="elsevierStyleSup">11</span>&#46; Esto podr&#237;a indicar la existencia de un disbalance entre la s&#237;ntesis y degradaci&#243;n en la matriz extracelular en todas estas afecciones&#46; </p><p class="elsevierStylePara"> En cuanto a la MMP-9&#44; enzima secretada fundamentalmente por neutr&#243;filos&#44; macr&#243;fagos y otras c&#233;lulas que participan en la respuesta inflamatoria&#44; no fue hallada&#44; como cabr&#237;a esperar&#44; en nuestros medios de cultivo analizados&#44; corroborando as&#237; que la actividad MMP-9 encontrada en los tejidos podr&#237;a ser debida a estirpes celulares diferentes a la fibrobl&#225;stica<span class="elsevierStyleSup">19</span>&#46; </p><p class="elsevierStylePara"> De nuestros estudios podemos concluir afirmando que los fibroblastos procedentes de FT de pacientes j&#243;venes portadores de hernias directas demuestran una mayor expresi&#243;n de la MMP-2 activa&#44; por lo que esta enzima puede estar &#237;ntimamente implicada en el proceso degradativo de la matriz extracelular&#46; La persistencia de dicha modificaci&#243;n a trav&#233;s de los cultivos parece sugerir la idea de un defecto gen&#233;tico&#44; o bien de una transformaci&#243;n posterior de dicho material&#44; descartando como causa principal los factores ambientales&#44; aunque &#233;stos podr&#237;an contribuir como factores secundarios&#46; Desde el punto de vista de la aplicabilidad cl&#237;nica&#44; estos hallazgos sugerir&#237;an la conveniencia de colocar un material prot&#233;sico en todos aquellos pacientes portadores de una hernia inguinal directa&#44; a fin de reforzar la pared posterior del canal inguinal&#46; </p><p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold">Agradecimiento</span></p><p class="elsevierStylePara"> A la Unidad de Trasplante Hep&#225;tico del Hospital Universitario Ram&#243;n y Cajal &#40;Dr&#46; E&#46; Vicente L&#243;pez&#41;&#44; por habernos permitido la obtenci&#243;n de las muestras control y poder llevar a buen t&#233;rmino este trabajo&#46; </p>"
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        "resumen" => "<p class="elsevierStylePara">Introducci&#243;n&#46; Entre las estructuras que conforman la pared posterior del canal inguinal que puedan impedir la formaci&#243;n de hernias&#44; y de una manera especial las hernias de tipo directo&#44; se encuentra la fascia transversalis&#46; En estudios previos demostramos la existencia en muestras in vivo de un aumento en la expresi&#243;n de metaloproteinasa 2 &#40;MMP-2&#41;&#46; El objetivo del presente trabajo ha sido investigar&#44; a trav&#233;s de cultivos de fibroblastos tomados de fascia transversalis&#44; la expresi&#243;n de algunas MMP con el fin de comprobar si las modificaciones encontradas en tejido se manten&#237;an en condiciones de cultivo&#46; </p> <p class="elsevierStylePara"> Pacientes y m&#233;todos&#46; La fascia transversalis fue obtenida de pacientes portadores de hernias indirectas y directas&#44; siempre de una misma zona situada en la pared posterior del canal inguinal&#46; Las muestras control se obtuvieron de pacientes donantes en el transcurso de extracciones multiorg&#225;nicas destinadas a trasplante&#46; Se establecieron los siguientes grupos de estudio&#58; control &#40;n &#61; 10&#41;&#44; pacientes con hernia directa &#40;n &#61; 32&#41;&#44; pacientes con hernia indirecta &#40;n &#61; 36&#41;&#46; Las edades de los pacientes oscilaron entre 20 y 60 a&#241;os &#40;media&#44; 39&#44;8 a&#241;os&#41;&#46; Atendiendo a este par&#225;metro&#44; se dise&#241;aron dos subgrupos de estudio&#44; I&#58; 20-40 a&#241;os y II&#58; 41-60 a&#241;os&#46; Las muestras de fascia transversalis fueron procesadas para estudio en cultivo y obtenci&#243;n de fibroblastos&#46; La expresi&#243;n celular y de los medios de cultivo para MMP-2 y MMP-9 fueron analizada por inmunohistoqu&#237;mica&#44; ELISA&#44; immunobloting y zimograf&#237;a&#46; El an&#225;lisis estad&#237;stico fue realizado empleando un test no param&#233;trico &#40;test de la U de Mann-Whitney&#41;&#46; </p> <p class="elsevierStylePara"> Resultados&#46; La sobreexpresi&#243;n de MMP-2 fue siempre detectada en los fibroblastos procedentes de pacientes con hernia inguinal directa del subgrupo I&#46; No fue detectada actividad de MMP-9&#46; La cuantificaci&#243;n de MMP-2 por ELISA en los medios de cultivo puso de manifiesto un incremento significativo de esta enzima en el subgrupo I e</p>"
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Información del artículo
ISSN: 0009739X
Idioma original: Español
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