17 - EVALUACIÓN DE LA FUNCIÓN DE OSTEOGLICINA EN CÉLULAS RENALES
1Unidad de Endocrinología y Nutrición. Hospital Universitario Clínico San Cecilio. Instituto de Investigación Biosanitaria de Granada (Ibs.GRANADA). Granada. 2Departamento de Medicina. Universidad de Granada. 3Fundación para la Investigación Biosanitaria de Andalucía Oriental (FIBAO). Granada. 4Grupo de Genética Funcional de Enfermedades Raras. Área de Genética. Facultad de Biología. Universidad de Salamanca. 5CIBERFES. Instituto de Salud Carlos III. Madrid.
La osteoglicina (OGN) es un componente básico de la matriz extracelular vascular que actúa principalmente como regulador del metabolismo óseo participando además en la patología vascular. Recientemente se ha descrito como un nuevo biomarcador de enfermedad renal, aunque hasta la fecha no se conoce la función que desempeña a este nivel. Por ello, el objetivo de este estudio fue determinar el efecto de la sobreexpresión de OGN en células embrionarias de riñón humano 293 (HEK293) en condiciones calcificantes para evaluar su papel a nivel renal. Se generaron lentivirales de segunda generación con los plásmidos pLVX-IRES-HYG (mock) y pLVX-IRES-HYG+OGN, para la posterior transducción y selección de HEK293 mock y HEK293-OGN+. Se comprobó la eficiencia de la transducción por RT-qPCR y Western Blot. Las células mock y HEK293-OGN+ se cultivaron en medio calcificante durante 15 días. Se determinaron las concentraciones intra y extracelulares de Ca, Pi y la actividad fosfatasa alcalina (ALP). Además, se cuantificó la viabilidad celular, y la mineralización ósea mediante la tinción Alizarin red por conteo mediante microscopía. Por último, se determinó la expresión génica de genes implicados en regulación ósea y enfermedades inflamatorias por RT-qPCR. Se observó una disminución significativa de Pi extracelular (p = 0,001), un incremento de Pi insoluble (p = 0,019), una mayor concentración de cristales Ca5 (PO4)3 (p = 0,004), y un incremento en la actividad de ALP extracelular (p < 0,001) en HEK293-OGN+ con respecto a mock. La viabilidad celular fue significativamente menor en HEK293-OGN+ en comparación con mock (p = 0,005). Por último, se observó una regulación positiva de genes implicados en procesos de mineralización ósea (SOST, RUNX2 y MSX2) y en procesos inflamatorios (ATX) en HEK293-OGN+ con respecto a mock. Por tanto, la expresión incrementada de OGN a nivel renal en condiciones calcificantes podría estar asociada a procesos inflamatorios y de mineralización en este tipo celular, por lo que parece desempeñar una función patológica en la enfermedad renal.
