La enfermedad de Chagas es una antropozoonosis causada por el protozoario flagelado Trypanosoma cruzi (T. cruzi)1. Actualmente el tratamiento contra la infección por T. cruzi está restringido a 2 fármacos de limitada efectividad y alta toxicidad: benznidazol y nifurtimox2. Por lo tanto, es necesario encontrar nuevas herramientas terapéuticas. El uso de productos naturales como Artemisia annua (A. annua) representa una novedosa elección, su compuesto activo es la artemisinina, una lactona sesquiterpenoide que traspasa las membranas biológicas3. En el presente trabajo se evaluó el efecto de la infusión de A. annua sobre epimastigotes de T. cruzi.
Se utilizaron epimastigotes de T. cruzi (aislados: RHO/Ve/03/RG1 y CHHP). Para la preparación de las infusiones se utilizaron hojas secas y trituradas de A. annua de 2 orígenes distintos: de plantas cultivadas en Cumaná (Venezuela) y en Luxemburgo. Las infusiones se prepararon a concentraciones de 0,4; 0,6; 0,8; 1,0; 2,0 y 3,0%m/v de hojas secas de A. annua en el medio de cultivo Liver Infusion Tryptose (LIT)4. Los experimentos se realizaron ajustando los cultivos a una densidad celular de 2×106 parásitos/ml, en las diferentes concentraciones descritas previamente de la infusión de A. annua. Los ensayos se realizaron por triplicado y se incluyó un cultivo control. La viabilidad celular de los epimastigotes de T. cruzi, se determinó por el método de exclusión del colorante azul de tripano5. Para determinar el efecto de la concentración de la infusión de A. annua sobre el crecimiento de epimastigotes de T. cruzi, se aplicó un análisis de varianza multifactorial.
Las infusiones de A. annua provenientes de Cumaná y Luxemburgo tuvieron, en todas las concentraciones ensayadas, un efecto antiproliferativo dosis-dependiente sobre ambos aislados de T. cruzi estudiados, con respecto al cultivo control. Al final del tratamiento (7.° día) se constató que las concentraciones que produjeron una mayor inhibición del crecimiento fueron 2 y 3%, de igual forma se observó que las infusiones de A. annua proveniente de Luxemburgo tuvieron un efecto más potente en la inhibición de los parásitos, en comparación con las infusiones de plantas cultivadas en Cumaná, Venezuela (fig. 1). Este hecho se confirmó al evaluar la concentración mínima inhibitoria (CMI) en los distintos experimentos, encontrándose que la CMI del tratamiento Luxemburgo-RG1 fue 2,6 veces menor que la del tratamiento Cumaná-RG1; mientras que la CMI del tratamiento Luxemburgo-CHHP fue 2 veces menor que la del tratamiento Cumaná-CHHP. El análisis de varianza multifactorial reveló que el efecto de las infusiones sobre la densidad celular de los epimastigotes de T. cruzi, fue ejercido de manera altamente significativa (p<0,001) dependiendo del tipo de infusión, la concentración y el tiempo de exposición a las mismas, y no significativo para los distintos aislados evaluados. En cuanto al tiempo de incubación de los cultivos en la infusión de A. annua, se encontraron diferencias significativas entre los días 0, 1, 2, 3 y 5 con respecto al día 7, lo cual indica que los primeros días del tratamiento son claves en la inhibición activa de los epimastigotes de T. cruzi. Durante el curso del tratamiento, los epimastigotes perdieron gradualmente su movilidad, cambiaron su morfología típica fusiforme a una forma alargada y delgada o redondeada, sin flagelo.
Actividad de la infusión de Artemisia annua sobre epimastigotes de Trypanosoma cruzi: A) Tratamiento de planta cultivada en Luxemburgo sobre aislado CHHP. B) Tratamiento de planta cultivada en Cumaná, Venezuela sobre aislado CHHP. C) Tratamiento de planta cultivada en Luxemburgo sobre aislado RG1. D) Tratamiento de planta cultivada en Cumaná, Venezuela sobre aislado RG1.
Este es el primer estudio que demuestra el efecto antiproliferativo de infusiones de A. annua sobre aislados venezolanos de T. cruzi. Otros autores han ensayado los efectos antiproliferativos de la artemisinina purificada sobre T. cruzi y T. brucei rhodesiense6. El mayor efecto antiproliferativo que ejerció la infusión preparada con la planta proveniente de Luxemburgo, pudo deberse a la distinta producción de compuestos activos y aceites esenciales de ambas plantas, la cual varía dependiendo del origen geográfico de la planta y de la temperatura7. Elevadas temperaturas ambientales, como es el caso de Cumaná, Venezuela, producen una disminución en las concentraciones de artemisinina8. Asimismo, el hecho que las infusiones de A. annua ejercieron su efecto antiproliferativo durante los 7 días de tratamiento sugiere que los demás compuestos presentes en la infusión pudieron actuar sinérgicamente como una politerapia para ejercer su acción antiproliferativa9.
Los resultados obtenidos en este trabajo abren nuevas perspectivas de investigación sobre la acción tripanocida de A. annua sobre T. cruzi, y ofrecen una alternativa terapéutica a estudiar para el tratamiento de la infección por este parásito.
