Las bacteriemias están asociadas a una elevada morbimortalidad, por lo que el diagnóstico preciso y el inicio temprano de una terapia antibiótica eficaz son esenciales para su tratamiento1.
Uno de los principales mecanismos de resistencia en bacilos gramnegativos es la producción de carbapenemasas, por ello, es necesario contar con métodos que permitan la detección rápida de las mismas directamente a partir de muestras clínicas.
El ensayo BD MAX™ Check-Points CPO es una PCR en tiempo real cualitativa, automatizada y diseñada para la detección de los genes de carbapenemasas blaKPC, blaNDM, blaVIM/blaIMP y blaOXA-48 a partir de hisopados de pacientes con sospecha de colonización rectal.
El objetivo de este estudio fue evaluar el desempeño del ensayo BD MAX™ Check-Points CPO directamente en frascos de hemocultivos positivos con bacilos gramnegativos. Se estudiaron pacientes ingresados con sospecha de bacteriemia y con factores de riesgo de infección por bacilos gramnegativos portadores de carbapenemasas. Los factores de riesgo considerados asociados fueron: antecedentes de ingreso en los 30 días previos; pacientes derivados de otras instituciones de salud; antecedentes de colonización o infección previa por bacilos gramnegativos resistentes a carbapenemes.
Aquellos frascos positivos donde en la tinción de Gram se evidenció la presencia de bacilos gramnegativos se realizó en paralelo el cultivo convencional y el ensayo BD MAX™ Check-Points CPO. Las placas de cultivo convencional se incubaron durante 18h a 37°C. La identificación y la sensibilidad antibiótica de los aislamientos se estudió mediante sistema automatizado Phoenix™ (Becton Dickinson). Los ensayos y la interpretación de los resultados se realizaron de acuerdo a las recomendaciones del Clinical and Laboratory Standard Institute (CLSI)2. La búsqueda fenotípica de carbapenemasas se realizó mediante sinergia con discos de ácido borónico y EDTA (Britania), y la metodología CARB BLUE Kit® (ROSCO)3.
Para realizar el ensayo BD MAX™ Check-Points CPO, se tomaron 50μl del frasco, se realizó una dilución 1/50 de la cual se tomaron 10μl que se colocaron en el buffer muestra del kit. Posteriormente se continuó el ensayo siguiendo las indicaciones del fabricante.
Se estudiaron un total de 59 frascos positivos para bacilos gramnegativos, de los cuales, se recuperaron 61 aislados por cultivo convencional.
Un total de 33 aislados fueron no-sensibles a carbapenemas mediante cultivo. En 21 se evidenció la presencia de carbapenemasas mediante la inhibición con ácido borónico (19), EDTA (2) y/o método CARB BLUE Kit®.
Los resultados obtenidos mediante BD MAX™ Check-Points CPO fueron: 32 negativos y 29 positivos (17 blaKPC, 8 blaOXA-48, 2 blaNDM y 2 resultaron positivas para blaKPC y blaOXA-48, simultáneamente) (tabla 1). Solo una cepa fue positiva para OXA-48, sin evidenciarse resistencia a carbapenemas.
Resultados obtenidos con el ensayo BD MAX™ Check-Points CPO directo de hemocultivos positivos
| Cultivo | BD MAX™ | ||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Germen | N.° | No sensibilidad a carbapenemas | Sensibilidad a carbapenemas | blaKPC | blaOXA-48 | blaNDM | blaKPC blaOXA-48 |
| Klebsiella pneumoniae | 31 | 25 | 6 | 17 | 4 | 2 | 2 |
| Escherichia coli | 9 | — | 9 | — | — | — | — |
| Acinetobacter baumannii | 4 | 4 | — | — | — | — | — |
| Enterobacter cloacae | 3 | 2 | 1 | — | 2 | — | — |
| Proteus mirabilis | 3 | — | 3 | — | — | — | — |
| Pseudomonas aeruginosa | 3 | — | 3 | — | — | — | — |
| Klebsiella oxytoca | 2 | — | 2 | — | — | — | — |
| Providencia stuartii | 2 | — | 2 | — | 1 | — | — |
| Serratia marcescens | 2 | 1 | 1 | — | 1 | — | — |
| Aeromonas veronii | 1 | 1 | — | — | — | — | — |
| Citrobacter koseri | 1 | — | 1 | — | — | — | — |
| Total | 61 | 33 | 28 | 17 | 8 | 2 | 2 |
Los resultados obtenidos permitieron demostrar que BD MAX™ Check-Points CPO detectó el 100% de las cepas productoras de carbapenemasas tipo blaKPC, blaNDM y blaOXA-48. El único caso discordante entre el cultivo y BD MAX™ Check-Points CPO fue una cepa de Providencia stuartii, en la cual se detectó blaOXA-48 sin evidenciarse resistencia a carbapenemas, lo cual pude deberse a la falta de expresión de la enzima en dicho aislado.
Existen métodos inmunocromatográficos que permiten detectar carbapenemasas a partir de colonias aisladas donde la sensibilidad y la especificidad son del 100%4. En nuestro medio no hay comunicaciones del uso de dicha metodología sobre muestra directa y los costes de estas determinaciones son similares a los de los métodos moleculares.
Hay evidencia de la utilización de BD MAX™ sobre muestra directa de hemocultivo para la detección de Staphylococcus aureus resistente a meticilina5–7. En dichos estudios se obtuvieron valores de sensibilidad y especificidad entre el 98-100%.
En nuestro conocimiento, no hay comunicaciones en la literatura de la evaluación del ensayo BD MAX™ Check-Points CPO a partir de muestras directas. En nuestro trabajo evidenciamos que el ensayo detectó el 100% de los bacilos gramnegativos productores de carbapenemasa tipo blaKPC, blaNDM y blaOXA-48 en comparación con los métodos de cultivo tradicional. Consideramos una limitación del estudio que en el período evaluado no se han detectado la presencia de blaVIM/blaIMP como consecuencia de la baja frecuencia en nuestro medio.
Este estudio nos permitió evaluar la eficiencia de la metodología BD MAX™ Check-Points CPO en la detección de blaKPC, blaNDM y blaOXA-48 en muestras directas de frascos de hemocultivos en un tiempo estimado de 3h.
Becton Dickinson Argentina proporcionó los ensayos para realizar el estudio.
