Estabilización del 99m Tc-HMPAO con azul de metileno: su utilización en el marcaje de leucocitos.
Stabilization of 99m Tc-HMPAO with methylene blue: its use in leukocyte labelling.
V. García Seguí, M. Roca Engroñat, F. Armero Muñoz, F. Iglesias Allende, V. Gomes Barreto de Mélo, J. Martín-Comín
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Esp. Med. Nuclear, 17, 4 (261-264), 1998</span></p><p class="elsevierStylePara">Estabilización del <span class="elsevierStyleSup">99m</span>Tc-HMPAO con azul de metileno: su utilización en el marcaje de leucocitos</p><p class="elsevierStylePara">V García Seguí, M Roca Engroñat, F Armero Muñoz, F Iglesias Allende, V Gomes Barreto de Mélo, J Martín-Comín</p><p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleItalic">Unidad de Radiofarmacia. Servicio de Medicina Nuclear. Ciutat Sanitària i Universitària de Bellvitge. Barcelona.</span></p><p class="elsevierStylePara">Recibido: 27-XI-97.<br></br> Aceptado: 15-I-98.</p><p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleItalic">Correspondencia:</span><br></br> M Roca Engroñat<br></br> Unitat de Radiofarmacia. Servei de Medicina Nuclear<br></br> Ciutat Sanitària i Universitària de Bellvitge<br></br> Feixa Llarga, s/n.<br></br> 08907 L''Hospitalet de Llobregat. Barcelona</p><hr></hr><p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold">Resumen.</span>--Se describe un método para estabilizar el <span class="elsevierStyleSup">99m</span>Tc-HMPAO obtenido a partir de alícuotas salinas del vial de Ceretec<span class="elsevierStyleSup">®</span> basado en la adición de azul de metileno. A las dos horas de la preparación del radiofármaco se obtiene una pureza radioquímica media del 92,5% (DE 1,8%), un pH entre 7,0 y 7,6 y una osmolalidad entre 305 y 309 mOsm/kg que permiten su utilización en el marcaje de leucocitos.</p><p class="elsevierStylePara">Para su valoración se procedió al marcaje de dos muestras iguales de leucocitos obtenidas de 10 voluntarios. La primera se marcó con <span class="elsevierStyleSup">99m</span>Tc-HMPAO recien preparado y la segunda con <span class="elsevierStyleSup">99m</span>Tc-HMPAO que fue estabilizado dos horas antes con azul de metileno. Los rendimientos de marcaje medios obtenidos fueron 70,9% (DE 6,9%) y 66,1% (DE 4,2%), respectivamente. En las condiciones que se describen con el <span class="elsevierStyleSup">99m</span>Tc-HMPAO estabilizado con azul de metileno, no se observaron inconvenientes derivados del color del estabilizante ni afectación de la viabilidad celular.</p><p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold">PALABRAS CLAVE: <span class="elsevierStyleSup">99m</span>Tc-HMPAO. Estabilización. Azul de metileno. Leucocitos.</span></p><p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold">Summary.</span>--A method to stabilize the <span class="elsevierStyleSup"> 99m</span>Tc-HMPAO obtained from Ceretec<span class="elsevierStyleSup">®</span> saline fractions using methylene blue is described. The mean radiochemical purity two hours after the stabilized <span class="elsevierStyleSup">99m</span>Tc-HMPAO preparation was 92.5% (SD 1.8%), the pH ranged from 7.0 to 7.6 and the osmolality ranged from 305 to 309 mOsm/kg. These features made the stabilized <span class="elsevierStyleSup">99m</span>Tc-HMPAO suitable for leukocyte labelling.</p><p class="elsevierStylePara">In order to evaluate this method, we performed the labelling of two identical leukocyte samples withdrawed from 10 blood donors. The first sample was labeled using <span class="elsevierStyleSup"> 99m</span>Tc-HMPAO non-stabilized and the second one was labelled using <span class="elsevierStyleSup">99m</span>Tc-HMPAO stabilized 2 hours before with methylene blue. The mean labelling efficiencies we obtained were 70.9% (SD 6.9%) and 66.1% (SD 4.2%) respectively. With the conditions described using the <span class="elsevierStyleSup">99m</span>Tc-HMPAO stabilized with methylene blue, we had no drawbacks from the stabilizing blue colour and we did not found changes in the cellular viability.</p><p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold">KEY WORDS: <span class="elsevierStyleSup">99m</span>Tc-HMPAO. Stabilization. Methy-lene blue. Leukocytes.</span></p><hr></hr><p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold">INTRODUCCIÓN</span></p><p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleSup">99m</span>Tc-d,l,hexametilpropilenamina oxima (<span class="elsevierStyleSup">99m</span>Tc-HMPAO), es un radiofármaco de naturaleza lipofílica empleado en la obtención de imágenes de perfusión cerebral y en el marcaje <span class="elsevierStyleItalic">in vitro</span> de leucocitos para la detección de áreas de infección y/o inflamación.</p><p class="elsevierStylePara">El <span class="elsevierStyleSup">99m</span>Tc-HMPAO se prepara mediante la reconstitución de un equipo reactivo de Ceretec<span class="elsevierStyleSup">®</span>‚ (Amersham International plc) con una disolución de pertecnetato sódico eluido de un generador de tecnecio. El complejo lipofílico formado presenta una baja estabilidad, lo que obliga a su utilización en un intervalo de 30 minutos tras su preparación <span class="elsevierStyleSup">1</span>.</p><p class="elsevierStylePara">Es una práctica común, en muchos centros de Medicina Nuclear, la división del equipo reactivo de Ceretec<span class="elsevierStyleSup">®</span> en varias fracciones tras su reconstitución con una solución salina. Una vez disuelto el contenido del vial con la solución salina, las fracciones se congelan para su posterior utilización. El <span class="elsevierStyleSup">99m</span>Tc-HMPAO obtenido de estas fracciones se degrada en igual proporción que el obtenido del equipo reactivo original <span class="elsevierStyleSup">2</span>.</p><p class="elsevierStylePara">Se han descrito numerosos agentes que disminuyen la degradación del <span class="elsevierStyleSup">99m</span>Tc-HMPAO <span class="elsevierStyleSup">3-6</span>. En la formulación del Ceretec<span class="elsevierStyleSup">®</span> en los Estados Unidos, el fabricante ofrece la posibilidad de utilizar el <span class="elsevierStyleSup"> 99m</span>Tc-HMPAO sin estabilizar o bien estabilizado con una disolución de azul de metileno que se suministra concentrado y se prepara momentos antes de añadirse al radiofármaco <span class="elsevierStyleSup">7</span>.</p><p class="elsevierStylePara">El azul de metileno es un agente antioxidante que presenta una serie de ventajas:</p><p class="elsevierStylePara">1.ª Es una sustancia aprobada por la FDA, descrita en las farmacopeas americana y europea, que se utiliza en la práctica clínica como agente antioxidante en metahemoglobinemias, como antídoto en intoxicaciones por cianuro y como colorante en la identificación de glándulas paratiroides previo a cirugía <span class="elsevierStyleSup"> 8</span>.</p><p class="elsevierStylePara">2.ª Ausencia de toxicidad a las dosis utilizadas.</p><p class="elsevierStylePara">3.ª Es un agente económicamente asequible.</p><p class="elsevierStylePara">No obstante, el azul de metileno presenta algunos inconvenientes:</p><p class="elsevierStylePara">a) Su inestabilidad a bajas concentraciones en medio acuoso.</p><p class="elsevierStylePara">b) Su color azul oscuro puede dificultar la separación del concentrado leucocitario en el caso que se utilice en el marcaje in vitro de leucocitos.</p><p class="elsevierStylePara">En nuestro servicio se marcan un máximo de dos muestras al mismo tiempo, con el objeto de minimizar el riesgo de confusión entre sangres. Cuando se tiene la necesidad de marcar tres o cuatro muestras en la misma mañana, se debe utilizar una nueva preparación de <span class="elsevierStyleSup">99m</span>Tc-HMPAO para el marcaje de las nuevas muestras de leucocitos con el incremento en el coste que ello supone.</p><p class="elsevierStylePara">La finalidad de este trabajo fue conocer la posibilidad de realizar el marcaje leucocitario con <span class="elsevierStyleSup">99m</span>Tc-HMPAO obtenido de una fracción salina y estabilizado con azul de metileno dos horas antes de su utilización.</p><p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold">MATERIAL Y MÉTODOS</span></p><p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleItalic">Preparación de las fracciones salinas de HMPAO.</span> Cada equipo reactivo de exametazima (Ceretec<span class="elsevierStyleSup">®</span>) fue reconstituido con 2,1 ml de suero salino fisiológico. Fracciones de 0,5 ml fueron extraídas e introducidas en viales purgados en nitrógeno y congeladas a una temperatura de ­40 grados centígrados.</p><p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleItalic">Preparación de la solución de <span class="elsevierStyleSup"> 99m</span>Tc-HMPAO.</span> Una fracción salina de HMPAO se extrajo del congelador justo antes del marcaje y se añadió alrededor de 1.100 Mbq en un volumen de 1,1 ml de <span class="elsevierStyleSup">99m</span>TcO-<span class="elsevierStyleInf">4</span>, eluido como máximo dos horas antes. El pertecnetato se obtuvo de un generador comercial de <span class="elsevierStyleSup">99</span>Mo/<span class="elsevierStyleSup">99m</span>Tc [Amertec II (Amersham International plc), Elumatic II (Cis Bio International)], que había sido eluido como máximo 24 horas antes. La proporción de quelato lipofílico fue analizada rutinariamente con la técnica de extracción en cloroformo <span class="elsevierStyleSup">9</span> y, en algunos casos, mediante cromatografia instantánea en capa fina según el método descrito por el fabricante <span class="elsevierStyleSup">10</span>.</p><p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleItalic">Preparación de la solución de azul de metileno.</span> El azul de metileno fue suministrado por el Servicio de Farmacia Hospitalaria de nuestro hospital a una concentración de 20 mg/ml en ampollas cerradas de vidrio. Esta solución fue diluida con suero salino fisiológico hasta obtener una concentración final de 0,6 mg/ml.</p><p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleItalic">Preparación de la solución de <span class="elsevierStyleSup"> 99m</span>Tc-HMPAO estabilizada.</span> La estabilización del <span class="elsevierStyleSup">99m</span>Tc-HMPAO se realizó entre tres y cinco minutos tras la formación del quelato lipofílico, añadiendo un 10% en volumen de la solución de azul de metileno (0,096 mg de azul de metileno/0,125 mg de HMPAO).</p><p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleItalic">Obtención de muestras de sangre y marcaje leucocitario.</span> Las muestras de sangre fueron obtenidas de 10 voluntarios de los cuales se extrajeron 2 x 45 ml de sangre mediante dos jeringas conteniendo 6 ml de ACD-A cada una. De cada muestra se separon 10 ml para obtener el plasma libre de células. El plasma rico en leucocitos y plaquetas se obtuvo añadiendo al resto de cada muestra 8 ml de hidroxietilalmidón (HES) al 8%, dejando sedimentar durante 60 minutos. Los botones leucocitarios se obtuvieron centrifugando ese plasma rico en células a 150 g durante cinco minutos. Los botones celulares fueron resuspendidos en 0,5 ml de plasma libre de células y el plasma pobre en leucocitos con HES se guardó para su utilización después de la incubación. Una suspensión de leucocitos se marcó añadiendo 0,4 ml de <span class="elsevierStyleSup">99m</span>Tc-HMPAO fresco y a la otra suspensión de leucocitos se le añadió el mismo volumen de <span class="elsevierStyleSup">99m</span>Tc-HMPAO que había sido estabilizado con azul de metileno dos horas antes. Ambas muestras fueron incubadas a 37 grados centígrados durante 30 minutos. Una vez finalizó la incubación, se añadió a cada muestra 4 ml de plasma pobre en leucocitos-HES y se centrifugaron a 150 g durante cinco minutos. El plasma con el radiofármaco no unido a las células se extrajo por aspiración, y el botón de leucocitos marcados fue resuspendido en 4 ml de plasma libre de células.</p><p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleItalic">Viabilidad celular.</span> Se estimó la viabilidad celular usando la técnica de exclusión con eosina Y. Sobre un portaobjetos se mezclaron 50 µl de la suspensión celular con 50 µl de colorante (eosina Y al 5%), se esperaron cinco minutos y la muestra se observó al microscopio óptico. El número de células no viables (teñidas) y viables (no teñidas) fue contado. El resultado se expresó como porcentaje de células viables.</p><p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold">RESULTADOS</span></p><p class="elsevierStylePara">La pureza radioquímica media de las fracciones salinas de <span class="elsevierStyleSup">99m</span>Tc-HMPAO sin estabilizar a los cinco minutos fue de 96,1% (DE 1,1%) (n = 10), siendo siempre superior al 94%, con un pH análogo al obtenido con el vial entero de HMPAO.</p><p class="elsevierStylePara">La pureza radioquímica de las fracciones salinas de <span class="elsevierStyleSup">99m</span>Tc-HMPAO estabilizadas con azul de metileno se resumen en la tabla I. Utilizando azul de metileno como agente estabilizante se obtuvo una pureza radioquímica a las dos horas siempre superior al 90%, suficiente para poder utilizar el radiofármaco en un nuevo marcaje de leucocitos.</p><table><tr><td colspan="2"><span class="elsevierStyleBold">Tabla I</span></td></tr><tr><td colspan="2"><p class="elsevierStylePara">PUREZA RADIOQUIMICA DE LAS FRACCIONES SALINAS DE <span class="elsevierStyleSup">99m</span>Tc-HMPAO ESTABILIZADAS CON AZUL DE METILENO (n = 10)</p></td></tr><tr><td colspan="2"><hr></hr></td></tr><tr><td><span class="elsevierStyleItalic">Fracción lipofílica media (DE)<br></br> %</span></td><td><span class="elsevierStyleItalic">Tiempo postpreparación</span></td></tr><tr><td colspan="2"><hr></hr></td></tr><tr><td>95,7 (1,3)</td><td>10 min.</td></tr><tr><td>93,7 (1,2)</td><td>1 h.</td></tr><tr><td>92,5 (1,8)</td><td>2 h.</td></tr><tr><td>91,2 (2,6)</td><td>3 h.</td></tr><tr><td>88,8 (2,8)</td><td>4 h.</td></tr><tr><td colspan="2"><hr></hr></td></tr></table><p class="elsevierStylePara">La tabla II muestra la pérdida de capacidad estabilizante del azul de metileno con el tiempo de preparación. Utilizando una solución de azul de metileno que fue preparada como máximo 24 horas antes de su utilización obtuvimos una pureza radioquímica media a las tres horas del 84% (DE 1,9%).</p><table><tr><td colspan="3"><span class="elsevierStyleBold">Tabla II</span></td></tr><tr><td colspan="3"><p class="elsevierStylePara">PÉRDIDA DE CAPACIDAD DE LA SOLUCION DE AZUL DE METILENO PARA ESTABILIZAR EL <span class="elsevierStyleSup"> 99m</span>Tc-HMPAO CON EL TIEMPO (n = 5)</p></td></tr><tr><td colspan="3"><hr></hr></td></tr><tr><td colspan="2"><span class="elsevierStyleItalic"> Pureza radioquímica media (DE)<br></br> %</span></td><td><span class="elsevierStyleItalic">Tiempo postpreparación<br></br> del <span class="elsevierStyleSup">99m</span>Tc-HMPAO</span></td></tr><tr><td><span class="elsevierStyleItalic">AM 1 hora</span></td><td><span class="elsevierStyleItalic">AM 24 horas</span></td></tr><tr><td colspan="3"><hr></hr></td></tr><tr><td>95 (1,0)</td><td>96 (1,5)</td><td>10 min.</td></tr><tr><td>93 (1,1)</td><td>92 (1,2)</td><td>1 h.</td></tr><tr><td>92 (1,6)</td><td>88 (1,5)</td><td>2 h.</td></tr><tr><td>91 (1,8)</td><td>84 (1,9)</td><td>3 h.</td></tr><tr><td colspan="3"><hr></hr></td></tr><tr><td colspan="3"><p class="elsevierStylePara">AM: Azul de metileno (0,6 mg/ml en salino). AM 1 hora: Solución preparada una hora antes de su utilización. AM 24 horas: Solución preparada 24 horas antes de su utilización.</p></td></tr></table><p class="elsevierStylePara">El pH de las fracciones salinas de <span class="elsevierStyleSup">99m</span>Tc-HMPAO estabilizado con azul de metileno estuvo comprendido entre 7,0 y 7,6 y la osmolalidad entre 305 y 309 mOsm/kg (n = 5).</p><p class="elsevierStylePara">La eficiencia de marcaje media de los leucocitos utilizando <span class="elsevierStyleSup">99m</span>Tc-HMPAO sin estabilizar fue de 70,9% (DE 6,9%) y de 66,1% (DE 4,2%) utilizando <span class="elsevierStyleSup">99m</span>Tc-HMPAO estabilizado dos horas antes, diferencia que resultó ser estadísticamente significativa (P < 0,02).</p><p class="elsevierStylePara">La influencia del proceso de marcaje en la viabilidad de los leucocitos no presentó diferencia al utilizar <span class="elsevierStyleSup"> 99m</span>Tc-HMPAO no estabilizado o estabilizado, siendo en ambos casos superior al 98%.</p><p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold">DISCUSIÓN</span></p><p class="elsevierStylePara">Varias sustancias se han utilizado para impedir la conversión del <span class="elsevierStyleSup">99m</span>Tc-HMPAO en especies hidrofílicas. Alguna de estas sustancias son: el ácido gentísico, cloruro de cobalto, solución etanólica, INa, etc. El azul de metileno es una sustancia cuya utilización ha sido recomendada por el fabricante para estabilizar el <span class="elsevierStyleSup">99m</span>Tc-HMPAO para estudios de perfusión cerebral, desaconsejando su utilización en el marcaje de leucocitos, puesto que si se utiliza la concentración de azul de metileno y el método de marcaje de leucocitos indicados por el fabricante, la fuerte coloración que se obtiene imposibilita la visualización de las células y, por consiguiente, el buen manejo de las mismas, independiente de la posibilidad de daño celular por la alta concentración de azul de metileno.</p><p class="elsevierStylePara">El resultado de este trabajo demostró que utilizando azul de metileno en solución salina a una concentración cinco veces menor que la recomendada por el fabricante <span class="elsevierStyleSup">7</span>, la conversión del complejo primario de <span class="elsevierStyleSup">99m</span>Tc-HMPAO en especies hidrofílicas puede ser reducida lo suficiente para que la pureza radioquímica se mantenga a niveles aceptables hasta cuatro horas, con un pH y osmolalidad adecuados.</p><p class="elsevierStylePara">La baja concentración de estabilizante utilizada y la dilución del medio de incubación con plasma (4 ml) antes de la centrifugación final, permitió una perfecta visualización y separación del botón leucocitario (Fig. 1).</p><p class="elsevierStylePara"><img src="125v17n4-13011735fig01.jpg"></img></p><p class="elsevierStylePara">Fig 1.--<span class="elsevierStyleItalic">Marcaje de leucocitos con <span class="elsevierStyleSup"> 99m</span>Tc-HMPAO estabilizado con azul de metileno. La ligera coloración azul del plasma sobrenadante no obstaculiza la separación del radiofármaco libre de las</span><span class="elsevierStyleItalic">células marcadas.</span></p><p class="elsevierStylePara">El azul de metileno es una sustancia que es inestable a bajas concentraciones. Así, la dilución preparada por nosotros debe utilizarse como máximo en 24 horas, ya que con una dilución de azul de metileno que estuvo más de 24 horas preparada, obtuvimos un <span class="elsevierStyleSup">99m</span>Tc-HMPAO con una pureza radioquímica insuficiente para poder ser utilizado satisfactoriamente en un nuevo marcaje leucocitario.</p><p class="elsevierStylePara">Los resultados obtenidos en este trabajo demuestran que el <span class="elsevierStyleSup">99m</span>Tc-HMPAO estabilizado con azul de metileno no influye en la viabilidad de los leucocitos.</p><p class="elsevierStylePara">El <span class="elsevierStyleSup">99m</span>Tc-HMPAO estabilizado con azul de metileno:</p><p class="elsevierStylePara">1. Permite la realización de varios marcajes leucocitarios de forma secuenciada utilizando una sola preparación del radiofármaco.</p><p class="elsevierStylePara">2. Supone un ahorro económico importante al permitir un mejor aprovechamiento del equipo reactivo.</p><p class="elsevierStylePara">3. No altera la viabilidad leucocitaria.</p><p class="elsevierStylePara">Como conclusión podemos afirmar que el <span class="elsevierStyleSup"> 99m</span>Tc-HMPAO obtenido de fracciones salinas y estabilizado con azul de metileno en las condiciones descritas, puede ser utilizado para el marcaje leucocitario con una alta eficiencia, sin problemas debido al color oscuro del azul de metileno y sin pérdida de viabilidad celular.</p><p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold">BIBLIOGRAFÍA</span></p><p class="elsevierStylePara">l. Neirinckx RD, Canning LR, Piper IM, et al. Technetium-<span class="elsevierStyleSup">99m</span>d, l-HMPAO: a new radiopharmaceutical for SPECT imaging of regional cerebral blood perfusion. J Nucl Med 1987;28:191-202.</p><p class="elsevierStylePara">2. Chamoiseau S, Waegebaert J. Marquage des leucocytes par le <span class="elsevierStyleSup">99m</span>Tc-HMPAO à partir de fractions salines de HMPAO congelées à ­80 °C: Intérêts en routine. Revue de l''ACOMEN. Avril 1995; n.º 1:77-81.</p><p class="elsevierStylePara">3. Hung JCV, Volkert WA, Holmes RA. Stabilization of technetium-<span class="elsevierStyleSup">99m</span>-d, l-hexametyl propylene amine oxime (<span class="elsevierStyleSup">99m</span>Tc-HMPAO) using gentisic acid. Nucl Med Biol 1989;16:675-80.</p><p class="elsevierStylePara">4. Weisner PS, Bower GR, Dollimore LA, Forster AM, Higley B, Storey AE. A method for stabilising technetium-<span class="elsevierStyleSup">99m</span> exametazime prepared from a commercial kit. Eur J Nucl Med 1993; 20:661-6.</p><p class="elsevierStylePara">5. Sampson CB, Solanki C. Stabilization of Tc<span class="elsevierStyleSup">99m</span> exametazime using ethanol and storage at low temperature. Eur J Nucl Med 1991;18:532.</p><p class="elsevierStylePara">6. Millar AM. A routine method for using sodium iodide to stabilize sodium pertechnetate -<span class="elsevierStyleSup">99</span>Tc<span class="elsevierStyleSup">m</span>-dispensed for the preparation of <span class="elsevierStyleSup"> 99</span>Tc<span class="elsevierStyleSup">m</span>-exametazime. Nucl Med Commun, 1992;13:306-11.</p><p class="elsevierStylePara">7. Medi-Physics. Amersham USA. Ltd (April, 1995) Ceretec<span class="elsevierStyleSup">®</span>‚ package insert.</p><p class="elsevierStylePara">8. Martindale. The Extra Pharmacopoeia, 35th edition. London: Royal Pharmaceutical Society, 1996:985.</p><p class="elsevierStylePara">9. Láng J, Barbarics E, Lázár J, Gy A, Jánoki M, Papós L. Csernay. Effects of labelling conditions and formulation of kit on in vitro stability of <span class="elsevierStyleSup">99m</span>-Tc-d, l-HM-PAO in quantitative analysis in imaging and function, In European Nuclear Medicine Congress, Strasbourg 1989, Schmidt HAE, Chambron J. De. 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Amersham International plc, Amersham, UK.</p>" "tienePdf" => false "PalabrasClave" => array:1 [ "es" => array:1 [ 0 => array:4 [ "clase" => "keyword" "titulo" => "Palabras clave" "identificador" => "xpalclavsec236465" "palabras" => array:4 [ 0 => "99mTc-HMPAO" 1 => "Estabilización" 2 => "Azul de metileno" 3 => "Leucocitos" ] ] ] ] "multimedia" => array:1 [ 0 => array:6 [ "identificador" => "fig1" "tipo" => "MULTIMEDIAFIGURA" "mostrarFloat" => true "mostrarDisplay" => false "copyright" => "Elsevier España" "figura" => array:1 [ 0 => array:4 [ "imagen" => "125v17n4-13011735fig01.jpg" "Alto" => 205 "Ancho" => 229 "Tamanyo" => 4313 ] ] ] ] ] "idiomaDefecto" => "es" "url" => "/2253654X/0000001700000004/v0_201308011546/13011735/v0_201308011546/es/main.assets" "Apartado" => array:4 [ "identificador" => "17594" "tipo" => "SECCION" "es" => array:2 [ "titulo" => "Originales" "idiomaDefecto" => true ] "idiomaDefecto" => "es" ] "EPUB" => "https://multimedia.elsevier.es/PublicationsMultimediaV1/item/epub/13011735?idApp=UINPBA00004N" ]
Información del artículo
ISSN: 2253654XIdioma original: Español
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