Actividad antifúngica in vitro de azoles y anfotericina B frente a Malassezia furfur por el método de microdilución M27-A3 del CLSI y Etest®

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Actualmente hay descritas 14 especies con Malassezia furfur, Malassezia globosa, Malassezia sympodialis, Malassezia restricta y Malassezia slooffiae como las más frecuentes en el ser humano<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0210">9,11,16,17,26</a>.Estas levaduras son comensales de la piel, pero pueden convertirse en patógenos cuando hay factores predisponentes, como cambios en el microambiente cutáneo o alteración de los mecanismos de defensa del hospedero<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0175">2,5,9</a>. M. furfur ha sido aislada en pacientes inmunocompetentes como responsable de desórdenes dermatológicos como la pitiriasis versicolor, la foliculitis, la dermatitis seborreica y la dermatitis atópica. Además se ha reportado su capacidad para producir infecciones sistémicas en pacientes inmunodeprimidos que reciben nutrición parenteral total con suplementación lipídica, especialmente neonatos pretérmino en unidades de cuidados intensivos con catéteres venosos centrales, pacientes positivos para el VIH y pacientes con cáncer<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0210">9,24,30,32</a>.Con respecto a la terapia antifúngica para el manejo de las enfermedades asociadas a M. furfur, se recomienda utilizar azoles tópicos u orales dependiendo de la gravedad y extensión del cuadro clínico; para las infecciones sistémicas se utilizan el ketoconazol, el itraconazol, el fluconazol o la anfotericina B<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0170">1,30,32,33</a>. Sin embargo, existen en la literatura reportes de sensibilidad disminuida in vitro a la anfotericina B y el fluconazol<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0170">1,13,18,27,32</a>.Aunque la infección sistémica es la menos frecuente, se han documentado fungemias causadas por Malassezia, lo que implica realizar terapias inmediatas y adecuadas. Sin embargo, los métodos de referencia in vitro establecidos por el Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), el método de microdilución en caldo (documento M27-A3) y el de difusión en agar (documento M44-A2), para determinar los perfiles de sensibilidad, no son aplicables para este género por su condición lipodependiente. Dado que aún no existe un consenso sobre las pruebas de sensibilidad en Malassezia, las mismas requieren ser estandarizadas<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0180">3,4,12,15,18</a>.Por lo anterior, y teniendo en cuenta que en Colombia son escasos los estudios que evalúan el perfil de sensibilidad antifúngica<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0290">25</a>, así como los que buscan correlacionar estos datos por diferentes métodos, en este estudio se evaluó la sensibilidad in vitro de aislamientos de M. furfur asociados a diferentes cuadros clínicos por los métodos de microdilución en caldo (CLSI) y Etest® frente a antifúngicos comúnmente utilizados en terapia clínica.Materiales y métodosAislamientosVeinte aislamientos clínicos de pacientes con pitiriasis versicolor, dermatitis atópica y dermatitis seborreica fueron recuperados de la colección de microorganismos del Laboratorio de Micología y Fitopatología (Universidad de Los Andes). Estos aislamientos fueron conservados en leche descremada al 10% a –70°C y recuperados en agar Dixon modificado por incubación a 32°C<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0235">14</a>. La identificación de la especie se llevó a cabo por secuenciación de las regiones 5.8S rDNA-ITS2 y 26S rDNA D1/D2<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0215">10,21</a>.Pruebas de sensibilidadMicrodilución en caldoEl método de microdilución en caldo fue realizado de acuerdo al documento M27-A3 (CLSI 2008) con modificaciones para cumplir los requerimientos nutricionales del género Malassezia. El medio de cultivo utilizado fue caldo Sabouraud con dextrosa suplementado con Tween 40 0,5% (v/v) y Tween 60 0,5% (v/v)<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0310">29</a>. La utilización de este medio de cultivo se determinó en un estudio previo en el que se compararon los caldos de cultivo Urea de Christensen y Saboureaud dextrosa, y diferentes suplementos lipídicos como glicerol y Tween 40, Tween 60 y Tween 80. En un estudio de Carfachia et al. no se obtuvo un buen crecimiento de esta levadura en el medio RPMI 1640 con suplementos lipídicos<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0180">3</a>, razón por la cual no se evaluó en nuestro estudio previo. Por otro lado, aunque el medio Dixon modificado es el más utilizado para el crecimiento de Malassezia, no puede ser empleado para evaluar la sensibilidad por el método de microdilución en caldo debido a la turbidez provocada por los suplementos lipídicos<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0180">3</a>. Las soluciones stock de anfotericina B, itraconazol, ketoconazol y voriconazol (Sigma-Aldrich) fueron preparadas en dimetil sulfóxido (16mg de antifúngico en 10ml de dimetil sulfóxido). A partir de las diluciones seriadas de cada antifúngico se depositaron 100μl en las microplacas de 96 pocillos, en un rango de 0,06-32μg/ml. Posteriormente se añadieron 100μl de cada inóculo, preparado a partir de cultivos de 5 días de incubación en agar Dixon modificado con Tween 80 al 1% (v/v), con un ajuste de la suspensión a 0,4-0,45UA (Abs 530nm), equivalente a 1-5×106 cél/ml, para una concentración final en el pocillo de 0,5×103 a 2,5×103 cél/ml.Las microplacas fueron incubadas a 32°C y la lectura se realizó a las 72h. Para los azoles la concentración mínima inhibitoria (CMI) fue definida como la concentración más baja que produjo el 50% de inhibición del crecimiento en comparación con el pocillo control del crecimiento. Para la anfotericina B, la CMI se definió como la concentración más baja con la que no se produjo crecimiento. Se utilizaron como controles de calidad las cepas Candida parapsilosis ATCC 22019 y C. krusei ATCC 6258. Todas las pruebas se realizaron por triplicado<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0185">4,7,23,31</a>.Etest®El medio de cultivo utilizado para la prueba de Etest® fue agar Sabouraud dextrosa suplementado con Tween 40 al 0,5% (v/v) y Tween 60 al 0,5% (v/v). La superficie del agar se sembró por inundación con una suspensión ajustada a 0,4-0,45UA (Abs 530nm), equivalente a 1-5×106 cél/ml (0,5 escala de McFarland). Una vez la suspensión en la superficie de la placa fue absorbida se colocaron las tiras de Etest® (bioMérieux, Marcy-l’Étoile). Los antifúngicos evaluados fueron la anfotericina B, el itraconazol, el ketoconazol y el voriconazol en una concentración de 0,002-32μg/ml. Las placas fueron incubadas a 32°C y la lectura realizada a las 72h. Los valores de CMI fueron determinados en el punto de intersección de la elipse de inhibición del crecimiento con la tira de Etest®. Se utilizaron los mismos controles de calidad descritos para el método de microdilución. Las pruebas fueron realizadas por triplicado<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0185">4,8,23,31</a>.Análisis de resultadosSe determinaron los percentiles 50 (CMI50) y 90 (CMI90) para cada antifúngico. Las medias geométricas (MG) fueron calculadas a partir de los datos de los valores CMI obtenidos de todos los aislamientos. Además, los resultados fueron categorizados siguiendo los criterios establecidos por Cafarchia et al. en sensible (S)=CMI aislamiento≤CMI50, sensible-intermedio (I)=CMI50<CMI aislamiento≤CMI90, o resistente (R)=CMI aislamiento>CMI90<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0185">4</a>.Para comparar los métodos de microdilución en caldo y Etest® se estableció un acuerdo esencial cuando los valores de CMI obtenidos en cada método no diferían en más de dos diluciones. Se determinaron discrepancias entre los métodos de acuerdo a la propuesta de Cafarchia, y se clasificaron en menores, para los aislamientos S o R por uno de los dos métodos pero I por el otro; mayores, los aislamientos S por el método de microdilución en caldo y R por Etest®; y muy mayores los aislamientos R por el método de microdilución en caldo y S por Etest®. El acuerdo categórico fue asignado a la concordancia de S, I y R por ambos métodos<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0185">4</a>.La correlación entre los valores CMI para cada antifúngico por microdilución y Etest® fue evaluada mediante el test de correlación lineal de Spearman y el software IBM SPSS Statistics (versión 20), con un valor p<0,01 como estadísticamente significativo.ResultadosLos resultados de las CMI de las cepas ATCC se correspondieron con los rangos esperados según el documento de referencia<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0200">7,8</a>. Los valores de CMI50, CMI90, media geométrica e intervalos de las CMI de los 20 aislamientos de M. furfur frente a los antifúngicos evaluados se muestran en la <a class="elsevierStyleCrossRef" href="#tbl0005">tabla 1</a>. Se muestra también el acuerdo esencial en porcentaje entre ambos métodos.<elsevierMultimedia ident="tbl0005"></elsevierMultimedia>Los valores más bajos de CMI50, CMI90 y MG se presentaron con los antifúngicos del grupo de los azoles por el método de microdilución y Etest®. Por el contrario, la anfotericina B fue el compuesto que mostró menor actividad antifúngica frente a todos los aislamientos evaluados con ambos métodos, especialmente con el método de microdilución.El acuerdo esencial fue de 60-85% para los compuestos azólicos, lo que sugiere una alta concordancia entre los dos métodos utilizados. Para la anfotericina B el valor del acuerdo esencial fue solo del 10%, lo que indica una baja concordancia entre los métodos. La interpretación de los perfiles de sensibilidad in vitro, de acuerdo con los criterios definidos por Cafarchia et al., se muestran en la <a class="elsevierStyleCrossRef" href="#tbl0010">tabla 2</a><a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0185">4</a>.<elsevierMultimedia ident="tbl0010"></elsevierMultimedia>El 70% de los aislamientos fueron clasificados en resistentes a la anfotericina B por el método de microdilución; esta resistencia fue del 10% por el método Etest®, por lo que el acuerdo categórico entre los métodos fue bajo, lo que coincide con el acuerdo esencial para los dos métodos determinado por las diferencias en las CMI. Por el contrario, los azoles mostraron acuerdos categóricos y esenciales altos. Se observó una correlación lineal de los resultados entre la microdilución en caldo y el Etest® con la anfotericina B (r=0,621; p=0,003) y el voriconazol (r=0,707; p<0,001) con la prueba de Spearman.DiscusiónLos valores de CMI y las MG mostraron una mayor actividad de los azoles frente a los aislamientos de M. furfur, lo que coincide con lo publicado en investigaciones similares<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0225">12,15,26–28</a>. El itraconazol presentó una mayor actividad inhibitoria por el método de microdilución en caldo, mientras que el voriconazol lo hizo con el Etest®, resultados igualmente similares a los de Nakamura et al. y Rincón et al.<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0275">22,26</a>. A diferencia de nuestros resultados, y de los reportados por los investigadores mencionados anteriormente, Velegraki et al. encontraron la misma actividad antifúngica para el itraconazol por ambos métodos, microdilución en caldo y Etest®<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0320">31</a>. La diferencia en los resultados podría atribuirse a que las pruebas fueron realizadas en diferentes medios de cultivo y suplementos lipídicos, pues la composición del medio no solo influye en el crecimiento de la especies de Malassezia, sino que también puede permitir una mayor o menor difusión de los antifúngicos en el caso del Etest®. Aunque el documento M27-A3 define el uso del medio de cultivo RPMI 1640, Cafarchia et al. describen un mejor crecimiento de M. pachydermatis, especie no lipodependiente, en caldos de cultivo como Urea de Christensen, Sabouraud dextrosa y Dixon<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0180">3</a>.Los resultados de concordancia entre los métodos de microdilución y Etest® para los azoles difieren de lo publicado por Velegraki et al., quienes describieron una concordancia del 84-97% para los azoles y del 49% para la anfotericina B, lo que les permitió sugerir la posibilidad de determinar perfiles de sensibilidad frente a los azoles por cualquiera de los dos métodos<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0320">31</a>. Teniendo en cuenta el número de aislamientos evaluados en nuestro estudio, una muestra mayor permitiría tener una mayor certeza de los porcentajes de concordancia entre los dos métodos.Dado que no existen puntos de corte definidos por el CLSI para determinar la sensibilidad o la resistencia en levaduras del género Malassezia, la clasificación se llevó a cabo según los criterios propuestos por Cafarchia et al. con aislamientos de M. pachydermatis<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0180">3</a>. Nuestros resultados mostraron diferencias entre los dos métodos para la anfotericina B, hallazgos difíciles de interpretar, dado que la mayoría de los estudios que comparan los dos métodos se centran en los azoles y no existe una regla universal para categorizar como sensibles o resistentes aislamientos de Malassezia.Aunque no han sido estudiados los mecanismos de resistencia en Malassezia, la resistencia observada para la anfotericina B por el método de microdilución en caldo se podría explicar por los hallazgos en otras levaduras de importancia clínica, como Candida y Cryptococcus, donde se han descrito cepas con defectos en genes involucrados en la síntesis del ergosterol, como el gen ERG3, que implican una menor concentración de ergosterol en la membrana celular<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0260">19,20</a>; bombas de eflujo a múltiples fármacos pueden determinar también una resistencia cruzada a la anfotericina B y al fluconazol<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0195">6</a>.Las mayores discrepancias observadas entre los métodos<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0185">4</a> han sido con la anfotericina B. No obstante, para el ketoconazol y el voriconazol las discrepancias fueron menores, lo que podría indicar una mejor concordancia entre los dos métodos. Son pocos los estudios que determinan el grado de correlación entre los dos métodos evaluados; Velegraki et al. describieron un coeficiente de correlación lineal de Pearson (R2) de 0,89 entre ambos métodos para la anfotericina B y los azoles<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0320">31</a>. Por otro lado, Cafarchia et al. describieron una buena concordancia categórica entre los dos métodos, lo que confirmó la fiabilidad del Etest® como método de rutina en el laboratorio clínico<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0185">4</a>.El voriconazol fue el antifúngico con mayor concordancia entre los dos métodos. A pesar de lo anterior, y de lo documentado por algunos autores que recomiendan el uso de Etest® como un método menos laborioso y más fácil de implementar en los laboratorios de microbiología<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0185">4</a>, nuestros resultados con los antifúngicos evaluados no permiten apoyar el uso rutinario de esta técnica.Este estudio muestra que los azoles son los compuestos con mayor actividad antifúngica frente a M. furfur. No obstante, es necesario realizar más estudios que comparen los métodos de microdilución en caldo y Etest® para establecer su concordancia y poder implementar métodos más rápidos y fáciles en la rutina del laboratorio clínico, que permitan tomar decisiones terapéuticas para el manejo de estas infecciones.FinanciaciónEste proyecto fue financiado por la Vicerrectoría de Investigación de la Pontificia Universidad Javeriana (convocatoria 2011, ID PPTA 4598).Conflicto de interesesLos autores declaran no tener ningún conflicto de intereses." "textoCompletoSecciones" => array:1 [ "secciones" => array:11 [ 0 => array:3 [ "identificador" => "xres834826" "titulo" => "Resumen" "secciones" => array:5 [ 0 => array:2 [ "identificador" => "abst0005" "titulo" => "Antecedentes" ] 1 => array:2 [ "identificador" => "abst0010" "titulo" => "Objetivos" ] 2 => array:2 [ "identificador" => "abst0015" "titulo" => "Métodos" ] 3 => array:2 [ "identificador" => "abst0020" "titulo" => "Resultados" ] 4 => array:2 [ "identificador" => "abst0025" "titulo" => "Conclusiones" ] ] ] 1 => array:2 [ "identificador" => "xpalclavsec830739" "titulo" => "Palabras clave" ] 2 => array:3 [ "identificador" => "xres834825" "titulo" => "Abstract" "secciones" => array:5 [ 0 => array:2 [ "identificador" => "abst0030" "titulo" => "Background" ] 1 => array:2 [ "identificador" => "abst0035" "titulo" => "Aims" ] 2 => array:2 [ "identificador" => "abst0040" "titulo" => "Methods" ] 3 => array:2 [ "identificador" => "abst0045" "titulo" => "Results" ] 4 => array:2 [ "identificador" => "abst0050" "titulo" => "Conclusions" ] ] ] 3 => array:2 [ "identificador" => "xpalclavsec830740" "titulo" => "Keywords" ] 4 => array:3 [ "identificador" => "sec0005" "titulo" => "Materiales y métodos" "secciones" => array:2 [ 0 => array:2 [ "identificador" => "sec0010" "titulo" => "Aislamientos" ] 1 => array:3 [ "identificador" => "sec0015" "titulo" => "Pruebas de sensibilidad" "secciones" => array:3 [ 0 => array:2 [ "identificador" => "sec0020" "titulo" => "Microdilución en caldo" ] 1 => array:2 [ "identificador" => "sec0025" "titulo" => "Etest" ] 2 => array:2 [ "identificador" => "sec0030" "titulo" => "Análisis de resultados" ] ] ] ] ] 5 => array:2 [ "identificador" => "sec0035" "titulo" => "Resultados" ] 6 => array:2 [ "identificador" => "sec0040" "titulo" => "Discusión" ] 7 => array:2 [ "identificador" => "sec0045" "titulo" => "Financiación" ] 8 => array:2 [ "identificador" => "sec0050" "titulo" => "Conflicto de intereses" ] 9 => array:2 [ "identificador" => "xack280469" "titulo" => "Agradecimientos" ] 10 => array:1 [ "titulo" => "Bibliografía" ] ] ] "pdfFichero" => "main.pdf" "tienePdf" => true "fechaRecibido" => "2015-02-25" "fechaAceptado" => "2016-05-16" "PalabrasClave" => array:2 [ "es" => array:1 [ 0 => array:4 [ "clase" => "keyword" "titulo" => "Palabras clave" "identificador" => "xpalclavsec830739" "palabras" => array:4 [ 0 => "Malassezia furfur" 1 => "Sensibilidad" 2 => "Microdilución" 3 => "Etest®" ] ] ] "en" => array:1 [ 0 => array:4 [ "clase" => "keyword" "titulo" => "Keywords" "identificador" => "xpalclavsec830740" "palabras" => array:4 [ 0 => "Malassezia furfur" 1 => "Susceptibility" 2 => "Broth microdilution" 3 => "Etest®" ] ] ] ] "tieneResumen" => true "resumen" => array:2 [ "es" => array:3 [ "titulo" => "Resumen" "resumen" => "AntecedentesMalassezia furfur es una levadura comensal de la piel del ser humano que ha sido asociada con la presencia de algunas entidades dermatológicas e infecciones sistémicas oportunistas. Por su condición dependiente de lípidos, los métodos de referencia establecidos para las levaduras por el Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) para evaluar la sensibilidad antifúngica no son aplicables. ObjetivosEvaluar la sensibilidad in vitro de aislamientos de M. furfur asociados a procesos patológicos en el ser humano frente a antifúngicos de uso clínico. MétodosSe evaluó el perfil de sensibilidad a la anfotericina B, el itraconazol, el ketoconazol y el voriconazol de 20 aislamientos de M. furfur mediante el método de microdilución en caldo (CLSI M27-A3) y Etest®. ResultadosEl itraconazol y el voriconazol presentaron la mayor actividad antifúngica frente a los aislamientos evaluados. El acuerdo esencial entre los dos métodos usados para evaluar la actividad antifúngica de los azoles estuvo en el 60-85%, y el acuerdo categórico en el 70-80%; para la anfotericina B tanto el acuerdo esencial como el categórico fueron del 10%. ConclusionesDe acuerdo con los dos métodos evaluados los azoles fueron los compuestos que presentaron la mayor actividad antifúngica frente a M. furfur; sin embargo, es necesario realizar más estudios que permitan afirmar que Etest® es un método confiable para ser implementado en la rutina del laboratorio clínico." "secciones" => array:5 [ 0 => array:2 [ "identificador" => "abst0005" "titulo" => "Antecedentes" ] 1 => array:2 [ "identificador" => "abst0010" "titulo" => "Objetivos" ] 2 => array:2 [ "identificador" => "abst0015" "titulo" => "Métodos" ] 3 => array:2 [ "identificador" => "abst0020" "titulo" => "Resultados" ] 4 => array:2 [ "identificador" => "abst0025" "titulo" => "Conclusiones" ] ] ] "en" => array:3 [ "titulo" => "Abstract" "resumen" => "BackgroundMalassezia furfur is a human skin commensal yeast that can cause skin and opportunistic systemic infections. Given its lipid dependant status, the reference methods established by the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) to evaluate antifungal susceptibility in yeasts are not applicable. AimsTo evaluate the in vitro susceptibility of M. furfur isolates from infections in humans to antifungals of clinical use. MethodsThe susceptibility profile to amphotericin B, itraconazole, ketoconazole and voriconazole of 20 isolates of M. furfur, using the broth microdilution method (CLSI M27-A3) and Etest®, was evaluated. ResultsItraconazole and voriconazole had the highest antifungal activity against the isolates tested. The essential agreement between the two methods for azoles antifungal activity was in the region of 60-85% and the categorical agreement was around 70-80%, while the essential and categorical agreement for amphotericin B was 10%. ConclusionsThe azoles were the compounds that showed the highest antifungal activity against M. furfur, as determined by the two techniques used; however more studies need to be performed to support that Etest® is a reliable method before its implementation as a routine clinical laboratory test." "secciones" => array:5 [ 0 => array:2 [ "identificador" => "abst0030" "titulo" => "Background" ] 1 => array:2 [ "identificador" => "abst0035" "titulo" => "Aims" ] 2 => array:2 [ "identificador" => "abst0040" "titulo" => "Methods" ] 3 => array:2 [ "identificador" => "abst0045" "titulo" => "Results" ] 4 => array:2 [ "identificador" => "abst0050" "titulo" => "Conclusions" ] ] ] ] "multimedia" => array:2 [ 0 => array:8 [ "identificador" => "tbl0005" "etiqueta" => "Tabla 1" "tipo" => "MULTIMEDIATABLA" "mostrarFloat" => true "mostrarDisplay" => false "detalles" => array:1 [ 0 => array:3 [ "identificador" => "at1" "detalle" => "Tabla " "rol" => "short" ] ] "tabla" => array:2 [ "leyenda" => "CMI50 y CMI90 corresponden a las concentraciones de antifúngico en las que el crecimiento fue inhibido en un 50% y un 90%, respectivamente. Los valores corresponden a μg/ml.AE: acuerdo esencial; AMB: anfotericina B; ITZ: itraconazol; KTZ: ketoconazol; MG: media geométrica; VRZ: voriconazol." "tablatextoimagen" => array:1 [ 0 => array:2 [ "tabla" => array:1 [ 0 => """ <table border="0" frame="\n \t\t\t\t\tvoid\n \t\t\t\t" class=""><thead title="thead"><tr title="table-row"><th class="td" title="table-head " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Antifúngico \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Método \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Rango \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">CMI50 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">CMI90 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">MG \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">AE (%) \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</th></tr></thead><tbody title="tbody"><tr title="table-row"><td class="td" title="table-entry " rowspan="2" align="left" valign="top">AMB</td><td class="td" title="table-entry " align="left" valign="top">CLSI \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">4,0-16,0 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">16,00 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">16,00 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">12,55 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " rowspan="2" align="char" valign="top">10</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; 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Original

Actividad antifúngica in vitro de azoles y anfotericina B frente a Malassezia furfur por el método de microdilución M27-A3 del CLSI y Etest®

In vitro antifungal activity of azoles and amphotericin B against Malassezia furfur by the CLSI M27-A3 microdilution and Etest® methods

Juan Camilo Galvis-Marína, María Ximena Rodríguez-Bocanegraa, Adriana del Pilar Pulido-Villamarína, Rubiela Castañeda-Salazara, Adriana Marcela Celis-Ramírezb, Melva Yomary Linares-Linaresa,

Autor para correspondencia

linares-m@javeriana.edu.co
melvayomary@gmail.com

Autor para correspondencia.

a Unidad de Investigaciones Agropecuarias (UNIDIA), Departamento de Microbiología, Facultad de Ciencias, Pontificia Universidad Javeriana, Bogotá, Colombia

b Laboratorio de Micología y Fitopatología (LAMFU), Departamento de Ciencias Biológicas, Facultad de Ciencias, Universidad de los Andes, Bogotá, Colombia

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como cambios en el microambiente cut&#225;neo o alteraci&#243;n de los mecanismos de defensa del hospedero<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0175"><span class="elsevierStyleSup">2&#44;5&#44;9</span></a>&#46; <span class="elsevierStyleItalic">M&#46; furfur</span> ha sido aislada en pacientes inmunocompetentes como responsable de des&#243;rdenes dermatol&#243;gicos como la pitiriasis versicolor&#44; la foliculitis&#44; la dermatitis seborreica y la dermatitis at&#243;pica&#46; Adem&#225;s se ha reportado su capacidad para producir infecciones sist&#233;micas en pacientes inmunodeprimidos que reciben nutrici&#243;n parenteral total con suplementaci&#243;n lip&#237;dica&#44; especialmente neonatos pret&#233;rmino en unidades de cuidados intensivos con cat&#233;teres venosos centrales&#44; pacientes positivos para el VIH y pacientes con c&#225;ncer<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0210"><span class="elsevierStyleSup">9&#44;24&#44;30&#44;32</span></a>&#46;</p><p id="par0015" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Con respecto a la terapia antif&#250;ngica para el manejo de las enfermedades asociadas a <span class="elsevierStyleItalic">M&#46; furfur</span>&#44; se recomienda utilizar azoles t&#243;picos u orales dependiendo de la gravedad y extensi&#243;n del cuadro cl&#237;nico&#59; para las infecciones sist&#233;micas se utilizan el ketoconazol&#44; el itraconazol&#44; el fluconazol o la anfotericina B<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0170"><span class="elsevierStyleSup">1&#44;30&#44;32&#44;33</span></a>&#46; Sin embargo&#44; existen en la literatura reportes de sensibilidad disminuida <span class="elsevierStyleItalic">in vitro</span> a la anfotericina B y el fluconazol<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0170"><span class="elsevierStyleSup">1&#44;13&#44;18&#44;27&#44;32</span></a>&#46;</p><p id="par0020" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Aunque la infecci&#243;n sist&#233;mica es la menos frecuente&#44; se han documentado fungemias causadas por <span class="elsevierStyleItalic">Malassezia</span>&#44; lo que implica realizar terapias inmediatas y adecuadas&#46; Sin embargo&#44; los m&#233;todos de referencia <span class="elsevierStyleItalic">in vitro</span> establecidos por el <span class="elsevierStyleItalic">Clinical and Laboratory Standards Institute</span> &#40;CLSI&#41;&#44; el m&#233;todo de microdiluci&#243;n en caldo &#40;documento M27-A3&#41; y el de difusi&#243;n en agar &#40;documento M44-A2&#41;&#44; para determinar los perfiles de sensibilidad&#44; no son aplicables para este g&#233;nero por su condici&#243;n lipodependiente&#46; Dado que a&#250;n no existe un consenso sobre las pruebas de sensibilidad en <span class="elsevierStyleItalic">Malassezia</span>&#44; las mismas requieren ser estandarizadas<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0180"><span class="elsevierStyleSup">3&#44;4&#44;12&#44;15&#44;18</span></a>&#46;</p><p id="par0025" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Por lo anterior&#44; y teniendo en cuenta que en Colombia son escasos los estudios que eval&#250;an el perfil de sensibilidad antif&#250;ngica<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0290"><span class="elsevierStyleSup">25</span></a>&#44; as&#237; como los que buscan correlacionar estos datos por diferentes m&#233;todos&#44; en este estudio se evalu&#243; la sensibilidad <span class="elsevierStyleItalic">in vitro</span> de aislamientos de <span class="elsevierStyleItalic">M&#46; 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La identificaci&#243;n de la especie se llev&#243; a cabo por secuenciaci&#243;n de las regiones 5&#46;8<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>S rDNA-ITS2 y 26S rDNA D1&#47;D2<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0215"><span class="elsevierStyleSup">10&#44;21</span></a>&#46;</p></span><span id="sec0015" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0085">Pruebas de sensibilidad</span><span id="sec0020" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0090">Microdiluci&#243;n en caldo</span><p id="par0035" class="elsevierStylePara elsevierViewall">El m&#233;todo de microdiluci&#243;n en caldo fue realizado de acuerdo al documento M27-A3 &#40;CLSI 2008&#41; con modificaciones para cumplir los requerimientos nutricionales del g&#233;nero <span class="elsevierStyleItalic">Malassezia</span>&#46; El medio de cultivo utilizado fue caldo Sabouraud con dextrosa suplementado con Tween 40 0&#44;5&#37; &#40;v&#47;v&#41; y Tween 60 0&#44;5&#37; &#40;v&#47;v&#41;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0310"><span class="elsevierStyleSup">29</span></a>&#46; La utilizaci&#243;n de este medio de cultivo se determin&#243; en un estudio previo en el que se compararon los caldos de cultivo Urea de Christensen y Saboureaud dextrosa&#44; y diferentes suplementos lip&#237;dicos como glicerol y Tween 40&#44; Tween 60 y Tween 80&#46; En un estudio de Carfachia et al&#46; no se obtuvo un buen crecimiento de esta levadura en el medio RPMI 1640 con suplementos lip&#237;dicos<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0180"><span class="elsevierStyleSup">3</span></a>&#44; raz&#243;n por la cual no se evalu&#243; en nuestro estudio previo&#46; Por otro lado&#44; aunque el medio Dixon modificado es el m&#225;s utilizado para el crecimiento de <span class="elsevierStyleItalic">Malassezia</span>&#44; no puede ser empleado para evaluar la sensibilidad por el m&#233;todo de microdiluci&#243;n en caldo debido a la turbidez provocada por los suplementos lip&#237;dicos<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0180"><span class="elsevierStyleSup">3</span></a>&#46; Las soluciones stock de anfotericina B&#44; itraconazol&#44; ketoconazol y voriconazol &#40;Sigma-Aldrich&#41; fueron preparadas en dimetil sulf&#243;xido &#40;16<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mg de antif&#250;ngico en 10<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>ml de dimetil sulf&#243;xido&#41;&#46; A partir de las diluciones seriadas de cada antif&#250;ngico se depositaron 100<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#956;l en las microplacas de 96 pocillos&#44; en un rango de 0&#44;06-32<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#956;g&#47;ml&#46; Posteriormente se a&#241;adieron 100<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#956;l de cada in&#243;culo&#44; preparado a partir de cultivos de 5 d&#237;as de incubaci&#243;n en agar Dixon modificado con Tween 80 al 1&#37; &#40;v&#47;v&#41;&#44; con un ajuste de la suspensi&#243;n a 0&#44;4-0&#44;45<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>UA &#40;Abs 530<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>nm&#41;&#44; equivalente a 1-5<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#215;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>10<span class="elsevierStyleSup">6</span> c&#233;l&#47;ml&#44; para una concentraci&#243;n final en el pocillo de 0&#44;5<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#215;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>10<span class="elsevierStyleSup">3</span> a 2&#44;5<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#215;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>10<span class="elsevierStyleSup">3</span> c&#233;l&#47;ml&#46;</p><p id="par0040" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Las microplacas fueron incubadas a 32<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#176;C y la lectura se realiz&#243; a las 72<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>h&#46; Para los azoles la concentraci&#243;n m&#237;nima inhibitoria &#40;CMI&#41; fue definida como la concentraci&#243;n m&#225;s baja que produjo el 50&#37; de inhibici&#243;n del crecimiento en comparaci&#243;n con el pocillo control del crecimiento&#46; Para la anfotericina B&#44; la CMI se defini&#243; como la concentraci&#243;n m&#225;s baja con la que no se produjo crecimiento&#46; Se utilizaron como controles de calidad las cepas <span class="elsevierStyleItalic">Candida parapsilosis</span> ATCC 22019 y <span class="elsevierStyleItalic">C&#46; krusei</span> ATCC 6258&#46; Todas las pruebas se realizaron por triplicado<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0185"><span class="elsevierStyleSup">4&#44;7&#44;23&#44;31</span></a>&#46;</p></span><span id="sec0025" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0095">Etest<span class="elsevierStyleSup">&#174;</span></span><p id="par0045" class="elsevierStylePara elsevierViewall">El medio de cultivo utilizado para la prueba de Etest<span class="elsevierStyleSup">&#174;</span> fue agar Sabouraud dextrosa suplementado con Tween 40 al 0&#44;5&#37; &#40;v&#47;v&#41; y Tween 60 al 0&#44;5&#37; &#40;v&#47;v&#41;&#46; La superficie del agar se sembr&#243; por inundaci&#243;n con una suspensi&#243;n ajustada a 0&#44;4-0&#44;45<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>UA &#40;Abs 530<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>nm&#41;&#44; equivalente a 1-5<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#215;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>10<span class="elsevierStyleSup">6</span> c&#233;l&#47;ml &#40;0&#44;5 escala de McFarland&#41;&#46; Una vez la suspensi&#243;n en la superficie de la placa fue absorbida se colocaron las tiras de Etest<span class="elsevierStyleSup">&#174;</span> &#40;bioM&#233;rieux&#44; Marcy-l&#8217;&#201;toile&#41;&#46; Los antif&#250;ngicos evaluados fueron la anfotericina B&#44; el itraconazol&#44; el ketoconazol y el voriconazol en una concentraci&#243;n de 0&#44;002-32<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#956;g&#47;ml&#46; Las placas fueron incubadas a 32<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#176;C y la lectura realizada a las 72<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>h&#46; Los valores de CMI fueron determinados en el punto de intersecci&#243;n de la elipse de inhibici&#243;n del crecimiento con la tira de Etest<span class="elsevierStyleSup">&#174;</span>&#46; Se utilizaron los mismos controles de calidad descritos para el m&#233;todo de microdiluci&#243;n&#46; Las pruebas fueron realizadas por triplicado<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0185"><span class="elsevierStyleSup">4&#44;8&#44;23&#44;31</span></a>&#46;</p></span><span id="sec0030" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0100">An&#225;lisis de resultados</span><p id="par0050" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Se determinaron los percentiles 50 &#40;CMI<span class="elsevierStyleInf">50</span>&#41; y 90 &#40;CMI<span class="elsevierStyleInf">90</span>&#41; para cada antif&#250;ngico&#46; Las medias geom&#233;tricas &#40;MG&#41; fueron calculadas a partir de los datos de los valores CMI obtenidos de todos los aislamientos&#46; Adem&#225;s&#44; los resultados fueron categorizados siguiendo los criterios establecidos por Cafarchia et al&#46; en sensible &#40;S&#41;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#61;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>CMI aislamiento<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#8804;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>CMI<span class="elsevierStyleInf">50</span>&#44; sensible-intermedio &#40;I&#41;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#61;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>CMI<span class="elsevierStyleInf">50</span><span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#60;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>CMI aislamiento<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#8804;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>CMI<span class="elsevierStyleInf">90</span>&#44; o resistente &#40;R&#41;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#61;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>CMI aislamiento<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#62;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>CMI<span class="elsevierStyleInf">90</span><a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0185"><span class="elsevierStyleSup">4</span></a>&#46;</p><p id="par0055" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Para comparar los m&#233;todos de microdiluci&#243;n en caldo y Etest<span class="elsevierStyleSup">&#174;</span> se estableci&#243; un acuerdo esencial cuando los valores de CMI obtenidos en cada m&#233;todo no difer&#237;an en m&#225;s de dos diluciones&#46; Se determinaron discrepancias entre los m&#233;todos de acuerdo a la propuesta de Cafarchia&#44; y se clasificaron en <span class="elsevierStyleItalic">menores</span>&#44; para los aislamientos S o R por uno de los dos m&#233;todos pero I por el otro&#59; <span class="elsevierStyleItalic">mayores</span>&#44; los aislamientos S por el m&#233;todo de microdiluci&#243;n en caldo y R por Etest<span class="elsevierStyleSup">&#174;</span>&#59; y <span class="elsevierStyleItalic">muy mayores</span> los aislamientos R por el m&#233;todo de microdiluci&#243;n en caldo y S por Etest<span class="elsevierStyleSup">&#174;</span>&#46; El acuerdo categ&#243;rico fue asignado a la concordancia de S&#44; I y R por ambos m&#233;todos<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0185"><span class="elsevierStyleSup">4</span></a>&#46;</p><p id="par0060" class="elsevierStylePara elsevierViewall">La correlaci&#243;n entre los valores CMI para cada antif&#250;ngico por microdiluci&#243;n y Etest<span class="elsevierStyleSup">&#174;</span> fue evaluada mediante el test de correlaci&#243;n lineal de Spearman y el software IBM SPSS Statistics &#40;versi&#243;n 20&#41;&#44; con un valor p<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#60;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>0&#44;01 como estad&#237;sticamente significativo&#46;</p></span></span></span><span id="sec0035" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0105">Resultados</span><p id="par0065" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Los resultados de las CMI de las cepas ATCC se correspondieron con los rangos esperados seg&#250;n el documento de referencia<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0200"><span class="elsevierStyleSup">7&#44;8</span></a>&#46; Los valores de CMI<span class="elsevierStyleInf">50</span>&#44; CMI<span class="elsevierStyleInf">90</span>&#44; media geom&#233;trica e intervalos de las CMI de los 20 aislamientos de <span class="elsevierStyleItalic">M&#46; furfur</span> frente a los antif&#250;ngicos evaluados se muestran en la <a class="elsevierStyleCrossRef" href="#tbl0005">tabla 1</a>&#46; Se muestra tambi&#233;n el acuerdo esencial en porcentaje entre ambos m&#233;todos&#46;</p><elsevierMultimedia ident="tbl0005"></elsevierMultimedia><p id="par0070" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Los valores m&#225;s bajos de CMI<span class="elsevierStyleInf">50</span>&#44; CMI<span class="elsevierStyleInf">90</span> y MG se presentaron con los antif&#250;ngicos del grupo de los azoles por el m&#233;todo de microdiluci&#243;n y Etest<span class="elsevierStyleSup">&#174;</span>&#46; Por el contrario&#44; la anfotericina B fue el compuesto que mostr&#243; menor actividad antif&#250;ngica frente a todos los aislamientos evaluados con ambos m&#233;todos&#44; especialmente con el m&#233;todo de microdiluci&#243;n&#46;</p><p id="par0075" class="elsevierStylePara elsevierViewall">El acuerdo esencial fue de 60-85&#37; para los compuestos az&#243;licos&#44; lo que sugiere una alta concordancia entre los dos m&#233;todos utilizados&#46; Para la anfotericina B el valor del acuerdo esencial fue solo del 10&#37;&#44; lo que indica una baja concordancia entre los m&#233;todos&#46; La interpretaci&#243;n de los perfiles de sensibilidad <span class="elsevierStyleItalic">in vitro</span>&#44; de acuerdo con los criterios definidos por Cafarchia et al&#46;&#44; se muestran en la <a class="elsevierStyleCrossRef" href="#tbl0010">tabla 2</a><a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0185"><span class="elsevierStyleSup">4</span></a>&#46;</p><elsevierMultimedia ident="tbl0010"></elsevierMultimedia><p id="par0080" class="elsevierStylePara elsevierViewall">El 70&#37; de los aislamientos fueron clasificados en resistentes a la anfotericina B por el m&#233;todo de microdiluci&#243;n&#59; esta resistencia fue del 10&#37; por el m&#233;todo Etest<span class="elsevierStyleSup">&#174;</span>&#44; por lo que el acuerdo categ&#243;rico entre los m&#233;todos fue bajo&#44; lo que coincide con el acuerdo esencial para los dos m&#233;todos determinado por las diferencias en las CMI&#46; Por el contrario&#44; los azoles mostraron acuerdos categ&#243;ricos y esenciales altos&#46; Se observ&#243; una correlaci&#243;n lineal de los resultados entre la microdiluci&#243;n en caldo y el Etest<span class="elsevierStyleSup">&#174;</span> con la anfotericina B &#40;r<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span><span class="elsevierStyleItalic">&#61;</span><span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>0&#44;621&#59; p<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span><span class="elsevierStyleItalic">&#61;</span><span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>0&#44;003&#41; y el voriconazol &#40;r<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span><span class="elsevierStyleItalic">&#61;</span><span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>0&#44;707&#59; p<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span><span class="elsevierStyleItalic">&#60;</span><span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>0&#44;001&#41; con la prueba de Spearman&#46;</p></span><span id="sec0040" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0110">Discusi&#243;n</span><p id="par0085" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Los valores de CMI y las MG mostraron una mayor actividad de los azoles frente a los aislamientos de <span class="elsevierStyleItalic">M&#46; furfur</span>&#44; lo que coincide con lo publicado en investigaciones similares<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0225"><span class="elsevierStyleSup">12&#44;15&#44;26&#8211;28</span></a>&#46; El itraconazol present&#243; una mayor actividad inhibitoria por el m&#233;todo de microdiluci&#243;n en caldo&#44; mientras que el voriconazol lo hizo con el Etest<span class="elsevierStyleSup">&#174;</span>&#44; resultados igualmente similares a los de Nakamura et al&#46; y Rinc&#243;n et al&#46;<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0275"><span class="elsevierStyleSup">22&#44;26</span></a>&#46; A diferencia de nuestros resultados&#44; y de los reportados por los investigadores mencionados anteriormente&#44; Velegraki et al&#46; encontraron la misma actividad antif&#250;ngica para el itraconazol por ambos m&#233;todos&#44; microdiluci&#243;n en caldo y Etest<span class="elsevierStyleSup">&#174;</span><a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0320"><span class="elsevierStyleSup">31</span></a>&#46; La diferencia en los resultados podr&#237;a atribuirse a que las pruebas fueron realizadas en diferentes medios de cultivo y suplementos lip&#237;dicos&#44; pues la composici&#243;n del medio no solo influye en el crecimiento de la especies de <span class="elsevierStyleItalic">Malassezia</span>&#44; sino que tambi&#233;n puede permitir una mayor o menor difusi&#243;n de los antif&#250;ngicos en el caso del Etest<span class="elsevierStyleSup">&#174;</span>&#46; Aunque el documento M27-A3 define el uso del medio de cultivo RPMI 1640&#44; Cafarchia et al&#46; describen un mejor crecimiento de <span class="elsevierStyleItalic">M&#46; pachydermatis</span>&#44; especie no lipodependiente&#44; en caldos de cultivo como Urea de Christensen&#44; Sabouraud dextrosa y Dixon<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0180"><span class="elsevierStyleSup">3</span></a>&#46;</p><p id="par0090" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Los resultados de concordancia entre los m&#233;todos de microdiluci&#243;n y Etest<span class="elsevierStyleSup">&#174;</span> para los azoles difieren de lo publicado por Velegraki et al&#46;&#44; quienes describieron una concordancia del 84-97&#37; para los azoles y del 49&#37; para la anfotericina B&#44; lo que les permiti&#243; sugerir la posibilidad de determinar perfiles de sensibilidad frente a los azoles por cualquiera de los dos m&#233;todos<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0320"><span class="elsevierStyleSup">31</span></a>&#46; Teniendo en cuenta el n&#250;mero de aislamientos evaluados en nuestro estudio&#44; una muestra mayor permitir&#237;a tener una mayor certeza de los porcentajes de concordancia entre los dos m&#233;todos&#46;</p><p id="par0095" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Dado que no existen puntos de corte definidos por el CLSI para determinar la sensibilidad o la resistencia en levaduras del g&#233;nero <span class="elsevierStyleItalic">Malassezia</span>&#44; la clasificaci&#243;n se llev&#243; a cabo seg&#250;n los criterios propuestos por Cafarchia et al&#46; con aislamientos de <span class="elsevierStyleItalic">M&#46; pachydermatis</span><a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0180"><span class="elsevierStyleSup">3</span></a>&#46; Nuestros resultados mostraron diferencias entre los dos m&#233;todos para la anfotericina B&#44; hallazgos dif&#237;ciles de interpretar&#44; dado que la mayor&#237;a de los estudios que comparan los dos m&#233;todos se centran en los azoles y no existe una regla universal para categorizar como sensibles o resistentes aislamientos de <span class="elsevierStyleItalic">Malassezia</span>&#46;</p><p id="par0100" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Aunque no han sido estudiados los mecanismos de resistencia en <span class="elsevierStyleItalic">Malassezia</span>&#44; la resistencia observada para la anfotericina B por el m&#233;todo de microdiluci&#243;n en caldo se podr&#237;a explicar por los hallazgos en otras levaduras de importancia cl&#237;nica&#44; como <span class="elsevierStyleItalic">Candida</span> y <span class="elsevierStyleItalic">Cryptococcus</span>&#44; donde se han descrito cepas con defectos en genes involucrados en la s&#237;ntesis del ergosterol&#44; como el gen <span class="elsevierStyleItalic">ERG3</span>&#44; que implican una menor concentraci&#243;n de ergosterol en la membrana celular<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0260"><span class="elsevierStyleSup">19&#44;20</span></a>&#59; bombas de eflujo a m&#250;ltiples f&#225;rmacos pueden determinar tambi&#233;n una resistencia cruzada a la anfotericina B y al fluconazol<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0195"><span class="elsevierStyleSup">6</span></a>&#46;</p><p id="par0105" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Las mayores discrepancias observadas entre los m&#233;todos<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0185"><span class="elsevierStyleSup">4</span></a> han sido con la anfotericina B&#46; No obstante&#44; para el ketoconazol y el voriconazol las discrepancias fueron menores&#44; lo que podr&#237;a indicar una mejor concordancia entre los dos m&#233;todos&#46; Son pocos los estudios que determinan el grado de correlaci&#243;n entre los dos m&#233;todos evaluados&#59; Velegraki et al&#46; describieron un coeficiente de correlaci&#243;n lineal de Pearson &#40;R<span class="elsevierStyleSup">2</span>&#41; de 0&#44;89 entre ambos m&#233;todos para la anfotericina B y los azoles<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0320"><span class="elsevierStyleSup">31</span></a>&#46; Por otro lado&#44; Cafarchia et al&#46; describieron una buena concordancia categ&#243;rica entre los dos m&#233;todos&#44; lo que confirm&#243; la fiabilidad del Etest<span class="elsevierStyleSup">&#174;</span> como m&#233;todo de rutina en el laboratorio cl&#237;nico<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0185"><span class="elsevierStyleSup">4</span></a>&#46;</p><p id="par0110" class="elsevierStylePara elsevierViewall">El voriconazol fue el antif&#250;ngico con mayor concordancia entre los dos m&#233;todos<span class="elsevierStyleItalic">&#46;</span> A pesar de lo anterior&#44; y de lo documentado por algunos autores que recomiendan el uso de Etest<span class="elsevierStyleSup">&#174;</span> como un m&#233;todo menos laborioso y m&#225;s f&#225;cil de implementar en los laboratorios de microbiolog&#237;a<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0185"><span class="elsevierStyleSup">4</span></a>&#44; nuestros resultados con los antif&#250;ngicos evaluados no permiten apoyar el uso rutinario de esta t&#233;cnica&#46;</p><p id="par0115" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Este estudio muestra que los azoles son los compuestos con mayor actividad antif&#250;ngica frente a <span class="elsevierStyleItalic">M&#46; furfur&#46;</span> No obstante&#44; es necesario realizar m&#225;s estudios que comparen los m&#233;todos de microdiluci&#243;n en caldo y Etest<span class="elsevierStyleSup">&#174;</span> para establecer su concordancia y poder implementar m&#233;todos m&#225;s r&#225;pidos y f&#225;ciles en la rutina del laboratorio cl&#237;nico&#44; que permitan tomar decisiones terap&#233;uticas para el manejo de estas infecciones&#46;</p></span><span id="sec0045" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0115">Financiaci&#243;n</span><p id="par0120" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Este proyecto fue financiado por la Vicerrector&#237;a de Investigaci&#243;n de la Pontificia Universidad Javeriana &#40;convocatoria 2011&#44; ID PPTA 4598&#41;&#46;</p></span><span id="sec0050" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0120">Conflicto de intereses</span><p id="par0125" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Los autores declaran no tener ning&#250;n conflicto de intereses&#46;</p></span></span>"
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                  \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head  " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Rango&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">4&#44;0-16&#44;0&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " rowspan="2" align="char" valign="top">10</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">Etest<span class="elsevierStyleSup">&#174;</span>&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">2&#44;00&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">2&#44;558&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td" title="table-entry  " rowspan="2" align="left" valign="top">ITZ</td><td class="td" title="table-entry  " align="left" valign="top">CLSI&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">0&#44;03-0&#44;5&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">0&#44;125&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " rowspan="2" align="char" valign="top">60</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">Etest<span class="elsevierStyleSup">&#174;</span>&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">0&#44;250&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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                  \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td" title="table-entry  " rowspan="2" align="left" valign="top">KTZ</td><td class="td" title="table-entry  " align="left" valign="top">CLSI&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">0&#44;06-0&#44;5&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">0&#44;06-0&#44;38&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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                  \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td" title="table-entry  " rowspan="2" align="left" valign="top">VRZ</td><td class="td" title="table-entry  " align="left" valign="top">CLSI&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">0&#44;06-8&#44;0&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">0&#44;250&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">0&#44;500&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " rowspan="2" align="char" valign="top">65</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">Etest<span class="elsevierStyleSup">&#174;</span>&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">0&#44;008-2&#44;0&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">0&#44;135&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td></tr></tbody></table>
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                  \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head  " align="" valign="top" scope="col">&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head  " colspan="3" align="center" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">N&#250;mero aislamientos &#40;&#37;&#41;</th><th class="td" title="table-head  " colspan="3" align="center" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Discrepancia &#40;&#37;&#41;</th><th class="td" title="table-head  " rowspan="2" align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">AC &#40;&#37;&#41;</th></tr><tr title="table-row"><th class="td" title="table-head  " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Antif&#250;ngico&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head  " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">M&#233;todo&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head  " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">S&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head  " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">I&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head  " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">R&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head  " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Menor&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head  " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Mayor&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head  " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Muy mayor&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</th></tr></thead><tbody title="tbody"><tr title="table-row"><td class="td" title="table-entry  " rowspan="2" align="left" valign="top">AMB</td><td class="td" title="table-entry  " align="left" valign="top">CLSI&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">0 &#40;0&#41;&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">6 &#40;30&#41;&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " rowspan="2" align="char" valign="top">14 &#40;70&#41;</td><td class="td" title="table-entry  " rowspan="2" align="char" valign="top">0 &#40;0&#41;</td><td class="td" title="table-entry  " rowspan="2" align="char" valign="top">4 &#40;20&#41;</td><td class="td" title="table-entry  " rowspan="2" align="left" valign="top">10</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">Etest<span class="elsevierStyleSup">&#174;</span>&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">10 &#40;50&#41;&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">8 &#40;40&#41;&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">2 &#40;10&#41;&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td" title="table-entry  " rowspan="2" align="left" valign="top">ITZ</td><td class="td" title="table-entry  " align="left" valign="top">CLSI&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">0 &#40;0&#41;&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">2 &#40;10&#41;&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " rowspan="2" align="char" valign="top">0 &#40;0&#41;</td><td class="td" title="table-entry  " rowspan="2" align="char" valign="top">2 &#40;10&#41;</td><td class="td" title="table-entry  " rowspan="2" align="char" valign="top">2 &#40;10&#41;</td><td class="td" title="table-entry  " rowspan="2" align="left" valign="top">80</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">Etest<span class="elsevierStyleSup">&#174;</span>&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">0 &#40;0&#41;&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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                  \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td" title="table-entry  " rowspan="2" align="left" valign="top">KTZ</td><td class="td" title="table-entry  " align="left" valign="top">CLSI&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">16 &#40;80&#41;&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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Información del artículo

ISSN: 11301406
Idioma original: Español

DOI:10.1016/j.riam.2016.05.004

Datos actualizados diariamente

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2024 Septiembre	89	4	93
2024 Agosto	101	3	104
2024 Julio	69	17	86
2024 Junio	51	2	53
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2020 Julio	34	12	46
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2017 Octubre	15	14	29
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2017 Agosto	25	5	30
2017 Julio	23	5	28
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