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Estudio de la presencia de leucocitos en muestras de semen posvasectomía
Study of the presence of leukocytes in postvasectomy semen samples
María Somolinosa, Carlos Aulesaa, María Cabreraa, Isabel Caragolb, Irene Planellsc, Emilio Zahonerod
a Laboratorios Clínicos. Unidad de Seminología. Servicios Clínicos Centrales. Hospital Universitario Valle de Hebrón. Barcelona. España.
b Laboratorio de Inmunología. Unidad de Inmunología. Servicios Clínicos Centrales. Hospital Universitario Valle de Hebrón. Barcelona. España.
c Servicio de Microbiología. Unidad de Urocultivos y Genitales. Servicios Clínicos Centrales. Hospital Universitario Valle de Hebrón. Barcelona. España.
d Unidad de Cirugía Sin Ingreso (UCSI). Parque Sanitario Pere Virgili. Barcelona. España.
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No obstante&#44; no siempre se encuentra esta correlaci&#243;n<span class="elsevierStyleSup">6-8</span>&#46; Entre otros posibles factores etiol&#243;gicos&#44; es posible que la abstinencia sexual influya en la aparici&#243;n de leucospermia&#44; ya que cuanto m&#225;s tiempo permanezcan los espermatozoides en el epid&#237;dimo&#44; m&#225;s macr&#243;fagos y granulocitos ser&#225;n atra&#237;dos por los espermatozoides envejecidos&#44; ocasionando un aumento de la presencia de leucocitos en el eyaculado<span class="elsevierStyleSup">2</span>&#46;</p><p class="elsevierStylePara">Con relaci&#243;n a la vasectom&#237;a&#44; diversos estudios demuestran que los varones vasectomizados presentan cifras m&#225;s bajas de leucocitos en semen que los no vasectomizados&#46; De hecho&#44; se encuentran valores de leucocitos entre un 70 y un 80&#37; menores en varones vasectomizados que en varones no vasectomizados<span class="elsevierStyleSup">2</span>&#46; Sin embargo&#44; con frecuencia se demuestra la presencia de par&#225;metros anormales en el an&#225;lisis de semen y disfunci&#243;n esperm&#225;tica en pacientes sometidos a una vasectom&#237;a reversa o vasovasostom&#237;a&#46; En muchos de estos casos se encuentran en semen&#44; como principales candidatos del origen de esta disfunci&#243;n esperm&#225;tica&#44; altos valores de especies reactivas del ox&#237;geno &#40;ROS&#41;&#44; y los leucocitos seminales est&#225;n asociados a este incremento de ROS&#44; aunque no de una manera absoluta<span class="elsevierStyleSup">9</span>&#46;</p><p class="elsevierStylePara">En el Laboratorio de Androlog&#237;a del complejo hospitalario Valle de Hebr&#243;n&#44; se lleva a cabo el control seminal posvasectom&#237;a que&#44; actualmente&#44; se considera como el mejor m&#233;todo para valorar la efectividad de la t&#233;cnica quir&#250;rgica<span class="elsevierStyleSup">10-12</span>&#46; En nuestro laboratorio se realizan m&#225;s de 400 controles anal&#237;ticos posvasectom&#237;a al a&#241;o de pacientes procedentes del hospital y de otros centros de cirug&#237;a ambulatoria&#44; y constituye el laboratorio de referencia de su &#225;rea sanitaria provincial&#46;</p><p class="elsevierStylePara">Durante la realizaci&#243;n de los controles posvasectom&#237;a siguiendo el protocolo establecido por la British Andrology Society<span class="elsevierStyleSup">13</span>&#44; se ha observado la presencia de leucocitos en m&#250;ltiples muestras de semen&#46; Al relacionar este hallazgo con los conocimientos actuales acerca de la etiolog&#237;a de la leucospermia&#44; se plante&#243; la inc&#243;gnita del origen y significado de la presencia de estos leucocitos en el semen de los pacientes vasectomizados&#46;</p><p class="elsevierStylePara">El objetivo de este estudio fue intentar conocer la etiopatogenia de esta leucospermia en las muestras de semen de pacientes vasectomizados y comprobar si ten&#237;a alg&#250;n significado cl&#237;nico relevante&#46;</p><p class="elsevierStylePara"> M&#201;TODOS</p><p class="elsevierStylePara">Se analizaron un total de 137 muestras de semen para control posvasectom&#237;a&#44; que llegaron a nuestra unidad en un per&#237;odo de 2 meses&#46; Ning&#250;n paciente presentaba s&#237;ntomas de infecci&#243;n genitourinaria cl&#237;nicamente activa&#46; Las muestras de semen se recogieron tal y como especifica la British Andrology Society<span class="elsevierStyleSup">13</span>&#46; De estas muestras&#44; se alicuotaron inmediatamente 500 &#181;l que se depositaron en tubos est&#233;riles para su posterior estudio microbiol&#243;gico&#44; si proced&#237;a&#46;</p><p class="elsevierStylePara"> An&#225;lisis seminal</p><p class="elsevierStylePara">En primer lugar se realiz&#243; un examen del semen en fresco&#44; depositando una al&#237;cuota de 10 &#181;l en un portaobjetos termostatizado a 37 &#186;C&#44; con un cubreobjetos de 22 x 22 mm&#46; Se examinaron de 20 a 30 campos con un microscopio &#243;ptico para detectar la presencia de espermatozoides y&#47;o la presencia de otros elementos formes como leucocitos o c&#233;lulas germinales&#46;</p><p class="elsevierStylePara">Las muestras se centrifugaron a 500 g durante 10 min y el sedimento se examin&#243; de la misma manera que en fresco&#46; En los casos en los que se observ&#243; la presencia de abundantes leucocitos&#44; se procedi&#243; a la tinci&#243;n de &#233;stos para su identificaci&#243;n y diferenciaci&#243;n con el equipo de tinci&#243;n LeucoScreen<span class="elsevierStyleSup">&#174;</span> &#40;Fertipro lab&#41; para hacer el diagn&#243;stico diferencial de los leucocitos con las dem&#225;s c&#233;lulas que puede contener el semen &#40;c&#233;lulas germinales&#44; <span class="elsevierStyleItalic">rounds cells&#44;</span> etc&#46;&#41;&#46; Asimismo&#44; se analizaron las muestras de semen con un cit&#243;metro de flujo Sysmex UF-100<span class="elsevierStyleSup">&#174;</span> para orinas &#40;Roche Diagnostics&#41; para confirmar el diagn&#243;stico de leucospermia &#40;desde 1 x 10<span class="elsevierStyleSup">6</span> leucocitos&#47;mm semen&#41;&#46;</p><p class="elsevierStylePara">Una vez seleccionadas las muestras que cumpl&#237;an los criterios establecidos de leucospermia&#44; se procedi&#243; al an&#225;lisis microbiol&#243;gico e inmunol&#243;gico como se describe a continuaci&#243;n&#46;</p><p class="elsevierStylePara"> An&#225;lisis microbiol&#243;gico</p><p class="elsevierStylePara">Se seleccionaron las muestras positivas para leucospermia&#44; y se remitieron a microbiolog&#237;a las al&#237;cuotas separadas en los tubos est&#233;riles reservados inicialmente&#46;</p><p class="elsevierStylePara">Las muestras se sembraron en agar sangre y en medio de MacConkey con asa calibrada de 1&#47;100&#46; Las placas de agar sangre se incubaron en atm&#243;sfera aerobia con un 5&#37; de CO<span class="elsevierStyleInf">2</span> a 37&#186;&#44; y las placas de MacConkey en atm&#243;sfera aerobia a 37&#186;&#46; La primera lectura se efectu&#243; a las 24 h&#44; y la lectura definitiva a las 48 h de incubaci&#243;n&#46; Se consider&#243; valorable el crecimiento de microorganismos posibles pat&#243;genos&#44; distingui&#233;ndolos de la flora sin significado patol&#243;gico&#44; frecuente en este tipo de muestra&#46; En los cultivos positivos valorables se aislaron enterobacterias&#46; La identificaci&#243;n de los microorganismos se realiz&#243; por una galer&#237;a de pruebas bioqu&#237;micas dise&#241;adas para este fin&#46; Las pruebas de sensibilidad se realizaron por el m&#233;todo de Kirby-Bauer &#40;disco-difusi&#243;n&#41; en medio de Mueller-Hinton&#44; con un in&#243;culo equivalente al patr&#243;n de turbidez de MacFarland 0&#44;5&#46; Para la investigaci&#243;n de <span class="elsevierStyleItalic">Mycoplasma</span> las muestras se sembraron en medio s&#243;lido A7B para <span class="elsevierStyleItalic"> Mycoplasma</span>&#46; Se incubaron durante 48 h en atm&#243;sfera anaerobia&#46; La lectura se realiz&#243; en microscopio a 10 3 10 aumentos&#46;</p><p class="elsevierStylePara"> Estudio estad&#237;stico</p><p class="elsevierStylePara">Los resultados obtenidos para las muestras con leucospermia fueron comparados con el grupo de control mediante un an&#225;lisis de contingencia aplicando la prueba de x<span class="elsevierStyleSup">2</span> con un nivel de significaci&#243;n de p &#61; 0&#44;05 y entre s&#237; para estudiar la influencia del lugar de realizaci&#243;n de la cirug&#237;a y de la fecha su realizaci&#243;n&#46;</p><p class="elsevierStylePara"> An&#225;lisis inmunol&#243;gico</p><p class="elsevierStylePara">Al llegar al Laboratorio de Inmunolog&#237;a&#44; las muestras de semen se centrifugaron durante 5 min a 300 g&#44; se lavaron 2 veces con tamp&#243;n PBS &#40;pH 7&#44;2&#41; fr&#237;o y las c&#233;lulas&#44; resuspendidas en un volumen m&#237;nimo de PBS &#40;350 &#181;l&#41;&#44; se repartieron entre los tubos con una combinaci&#243;n de anticuerpos monoclonales conjugados con distintos fluorocromos&#46; Tubo 1&#58; CD45FITC y CD14PE&#59; tubo 2&#58; CD3FITC&#44; CD8PE&#44; CD45PerCP&#44;CD4APC&#44; y tubo 3&#58; CD3FITC&#44; CD16&#43;CD56PE&#44; CD45PerCP&#44; CD19APC &#40;Becton Dickinson&#44; San Jos&#233;&#44; California&#41;&#46; Tras una incubaci&#243;n de 20 min a temperatura ambiente y preservadas de la luz&#44; las c&#233;lulas se lavaron con 2 ml de PBS y se resuspendieron para su adquisici&#243;n en un cit&#243;metro FACSCalibur<span class="elsevierStyleSup">&#174;</span> &#40;Becton-Dickinson&#41; con 2 l&#225;seres de arg&#243;n y diodo rojo&#44; respectivamente&#44; que permiten la utilizaci&#243;n de 4 colores simult&#225;neamente&#46; El <span class="elsevierStyleItalic">software</span> que se utiliz&#243; para la adquisici&#243;n y an&#225;lisis de las muestras fue el CELLQuest<span class="elsevierStyleSup">&#174;</span>&#46;</p><p class="elsevierStylePara">El primer tubo se utiliz&#243; para conocer la distribuci&#243;n de las poblaciones leucocitarias&#44; mediante los par&#225;metros tama&#241;o y granularidad&#44; intensidad de CD45 y la expresi&#243;n de CD14 para identificar monocitos&#46; Los tubos 2 y 3 se adquirieron con el umbral en CD45 para seleccionar la poblaci&#243;n de linfocitos&#46; Mediante ventana electr&#243;nica en dicha poblaci&#243;n&#44; y con los distintos marcadores de inmunofenotipo&#44; se obtuvo la distribuci&#243;n de subpoblaciones linfocitarias en cada muestra&#58; linfocitos T &#40;CD3&#43;&#41; colaboradores &#40;CD4&#43;&#41;&#44; upresores&#47;citot&#243;xicos &#40;CD8&#43;&#41;&#44; linfocitos B &#40;CD19&#43;&#41; y c&#233;lulas NK &#40;CD3-CD16&#43;CD56&#43;&#41;&#46;</p><p class="elsevierStylePara">El estudio de la presencia de anticuerpos antiespermatozoides se realiz&#243; con el equipo SpermMar Test IgG<span class="elsevierStyleSup">&#174;</span> &#40;Fertipro NV&#41; realizando el test de SpermMar indirecto con plasma seminal de los pacientes y espermatozoides frescos de un paciente control normal&#46;</p><p class="elsevierStylePara"> RESULTADOS</p><p class="elsevierStylePara">De las 137 muestras analizadas en este estudio&#44; 33 &#40;24&#37;&#41; cumpl&#237;an los criterios de leucospermia propuestos por la OMS&#46;</p><p class="elsevierStylePara">El cultivo microbiol&#243;gico de estas muestras dio como resultado&#58; negativo en el 72&#44;7&#37; de los casos&#44; presencia de abundantes colonias de flora grampositiva aerobia en el 9&#44;1&#37; y presencia de colonias con significado patol&#243;gico en el 18&#44;2&#37;&#46; Los microorganismos potencialmente patol&#243;gicos aislados fueron&#58; <span class="elsevierStyleItalic">Ureaplasma urealyticum</span>&#44; <span class="elsevierStyleItalic">Streptococcus viridans</span>&#44; <span class="elsevierStyleItalic">Enterobacter aerogenes</span>&#44; <span class="elsevierStyleItalic"> Morganella morganii</span> y <span class="elsevierStyleItalic">Klebsiella oxytoca</span> &#40;tabla 1&#41;&#46;</p><p class="elsevierStylePara"><img src="262v5n3-13110289tab01.gif"></img></p><p class="elsevierStylePara">El an&#225;lisis de contingencia para los resultados del estudio microbiol&#243;gico no mostr&#243; diferencias estad&#237;sticamente significativas entre el grupo con leucospermia y el grupo control &#40;p &#61; 0&#44;58&#41;&#46;</p><p class="elsevierStylePara">El estudio inmunol&#243;gico se realiz&#243; con 24 muestras&#44; y se descartaron las que ten&#237;an c&#233;lulas no viables o en las que el n&#250;mero de linfocitos fue insuficiente para realizar el estudio diferencial&#46; Los resultados del estudio revelaron la siguiente composici&#243;n diferencial media de los leucocitos&#58; 66&#44;9&#37; de neutr&#243;filos&#44; 21&#44;45&#37; de monocitos y 3&#44;06&#37; de linfocitos&#44; de los cuales el 92&#44;07&#37; eran CD3&#43;&#44; el 61&#44;46&#37; CD3&#43;CD4&#43; y el 32&#44;38&#37; CD3&#43;CD8&#43;&#44; con un cociente CD4&#47;CD8 de 2&#44;88&#44; el 2&#44;07&#37; CD19&#43; y el 3&#44;07&#37; CD3-CD16&#43;CD56&#43; &#40;NK&#41;&#46;</p><p class="elsevierStylePara">El estudio de la presencia de anticuerpos antiespermatozoides realizado a 23 pacientes que presentaban una leucospermia significativa mostr&#243; 1 paciente positivo &#40;4&#44;3&#37;&#41; de las 23 muestras estudiadas&#46;</p><p class="elsevierStylePara">El an&#225;lisis de contingencia no mostr&#243; relaci&#243;n estad&#237;sticamente significativa entre la presencia de leucospermia y el lugar donde se realiz&#243; la t&#233;cnica quir&#250;rgica &#40;p &#61; 0&#44;77&#41;&#44; ni tampoco con la fecha de realizaci&#243;n de la intervenci&#243;n &#40;p &#61; 0&#44;10&#41;&#46;</p><p class="elsevierStylePara"> DISCUSI&#211;N</p><p class="elsevierStylePara">Se constata el alto porcentaje de muestras que presentan leucospermia &#40;24&#37;&#41; como consecuencia de la vasectom&#237;a&#46;</p><p class="elsevierStylePara">Los resultados obtenidos en el estudio microbiol&#243;gico no permiten establecer una hip&#243;tesis infecciosa como origen de la leucospermia&#44; ya que aunque se encontraron colonias potencialmente pat&#243;genas en algunas muestras&#44; &#233;stas no fueron estad&#237;sticamente significativas&#46; En el estudio inmunol&#243;gico se observa un predominio de polinucleares &#40;el 66&#44;9&#37; de los leucocitos del semen&#41; y un predominio de c&#233;lulas T&#44; con un cociente CD4&#47;CD8 de 2&#44;8 en los linfocitos&#46;</p><p class="elsevierStylePara">Descartado el origen infeccioso de la leucospermia&#44; se presentan otras posibles explicaciones de su presencia en el semen de varones posvasectomizados&#46; Es frecuente que los pacientes vasectomizados desarrollen anticuerpos antiespermatozoide&#46; De hecho&#44; la vasectom&#237;a constituye una agresi&#243;n que genera una respuesta inflamatoria que estimula a los leucocitos dentro de los vasos deferentes y a la inmunidad humoral&#46; As&#237;&#44; despu&#233;s de realizar una vasectom&#237;a se produce un aumento de los inmunocomplejos circulantes&#44; seguido de un descenso progresivo hasta su desaparici&#243;n hacia el tercer mes posvasectom&#237;a<span class="elsevierStyleSup">11&#44;14</span>&#46; Los estudios complementarios de anticuerpos antiespermatozoides realizados muestran que s&#243;lo 1 paciente de los 23 estudiados &#40;4&#44;3&#37;&#41; present&#243; anticuerpos positivos&#44; por lo que parece irrelevante la presencia de los anticuerpos antiespermatozoides en la etiopatogenia de la leucospermia&#46;</p><p class="elsevierStylePara"> CONCLUSIONES</p><p class="elsevierStylePara">El an&#225;lisis de los resultados obtenidos refleja que la etiopatogenia de la leucospermia ser&#237;a compatible con un componente inmunol&#243;gico inflamatorio&#44; cuya duraci&#243;n est&#225; por determinar y que cursar&#237;a de una manera subcl&#237;nica&#46; Como se ha comprobado&#44; en algunos pacientes persiste la leucospermia a los 6-7 meses de la vasectom&#237;a&#44; por lo que con la experiencia de este trabajo se propone el estudio de estas leucospermias hasta el a&#241;o despu&#233;s de la vasectom&#237;a en los pacientes que sea posible&#44; para dilucidar si al a&#241;o de la intervenci&#243;n todav&#237;a persiste la leucospermia o el componente inflamatorio de la vasectom&#237;a ha remitido con la desaparici&#243;n de los leucocitos&#46;</p><hr></hr><p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold"> Correspondencia&#58;</span> Dr&#46; C&#46; Aulesa&#46;<br></br> Unidad de Seminolog&#237;a&#46; Hospital Infantil&#46;<br></br> Ciudad Sanitaria Valle de Hebr&#243;n&#46;<br></br> Paseo Valle de Hebr&#243;n&#44; 119-129&#46;<br></br> 08035 Barcelona&#46; Espa&#241;a<br></br> Correo electr&#243;nico&#58; <a href="mailto&#58;caulesa&#64;vhebron&#46;net" class="elsevierStyleCrossRefs"> caulesa&#64;vhebron&#46;net</a></p>"
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Información del artículo
ISSN: 1698031X
Idioma original: Español
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