Detección del ADN del virus del papiloma humano por PCR en mujeres de alto riesgo. Validación de un protocolo

Objetivo: Evaluar un protocolo para la detección del virus del papiloma humano (VPH) mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Método: Se estudiaron mediante dos protocolos de PCR en nuestro laboratorio y en otro de referencia células exfoliativas del cuello uterino de 93 mujeres de alto riesgo para la infección por VPH. Cada laboratorio trabajó sin conocer los resultados del otro.
Resultados: La detección del ADN del VPH aumentó del 29,8 al 50,5% tras modificar la cantidad de células para la extracción de ADN. La comparación con el laboratorio de referencia resultó en un porcentaje de acuerdo del 99,0%. La hibridación específica identificó la siguiente distribución de genotipos de VPH: VPH 16, 29,8%; VPH 33, 17%; VPH 11/6, 12,7%; VPH 18, 12,7%; VPH 31, 23,4%; VPH 39, 3,6%; y VPH 51, 4,3%. La comparación con el laboratorio de referencia fue indicativa de que las sondas utilizadas subestiman la prevalencia de VPH 51. El 100% de las mujeres con lesiones displásicas fueron VPH positivas, confirmando la validez del protocolo.
Conclusiones: La sensibilidad de la PCR en la detección de ADN del VPH puede incrementarse con mínimas modificaciones de protocolos estándar. Es por ello importante realizar estudios de validación constante para asegurar y mantener buenos niveles de sensibilidad.

Objective: To validate a protocol for HPV DNA detection using PCR (polimerase chain reaction).
Method: HPV was investigated in cervical exfoliative specimens from 93 women at high risk for HPV infection. Blind comparisons of HPV DNA detection using two PCR protocols were carried out in our laboratory and a widely accepted reference laboratory.
Results: HPV DNA prevalence varied according to the different protocols. A good agreement with the reference protocol was reached when a reduction of the cellular amount for DNA extraction was carried out. The prevalence of HPV DNA in this population was 50.5%. All cases with dysplasia were HPV DNA positive. The HPV type distribution was as follows: 29.8% HPV 16, 17% HPV 33, 12.7% HPV 11/6, 12.7%, HPV 18, 23.4% HPV 31, 3.6% HPV 39 y 4.3% HPV 51. An underestimation of the prevalence of HPV 51 was detected by our procedure in relation to the reference laboratory.
Conclusions.: HPV DNA detection by PCR may increase with simple protocol modifications. Regular validation studies are important to reach good sensitivity levels