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Fundamento: Evaluar la utilidad de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) aplicada al diagnóstico de la infección por Helicobacter pylori en la población pediátrica mediante un método sencillo de extracción rápida y posterior detección por hibridación colorimétrica del ADN de Helicobacter pylori amplificado.
Pacientes y métodos: Durante el período de estudio de octubre de 1995 a julio de 1996 se procesaron 53 biopsias gástricas obtenidas mediante endoscopia digestiva alta de 53 pacientes con patología gástrica (45 con dolor abdominal recidivante y 8 con hematemesis). Se realizaron pruebas no invasivas: detección de anticuerpos IgG anti-H. pylori (Cobas Core, Roche), prueba del aliento 13C-urea y PCR en placa dental así como pruebas invasivas: estudio histológico, cultivo en medio selectivo (Pylori agar®, bioMérieux) y no selectivo (Columbia agar con un 5% de sangre de carnero, bioMérieux), prueba de la ureasa rápida y PCR en las biopsias gástricas. Para la extracción del ADN se utilizó una solución de resina Chelex 100 al 20% (ADN extracción Reagent®, Perkin Elmer), la amplificación se realizó del gen ureA (Clayton, 1992) y el ADN amplificado se detectó mediante hibridación colorimétrica (PCR ELISA® Boehringer, Mannheim). La duración del proceso de la PCR fue: extracción 25 min, amplificación 2 h y detección 3 h.
Resultados: En las muestras de biopsia gástrica el cultivo y la PCR fueron concordantes en el 84,3% de los casos (27 positivos, 16 negativos y dos no determinados). Dos muestras fueron positivas por cultivo y negativas por PCR, considerándose falsos negativos de la PCR por positividad de al menos tres de las otras pruebas ensayadas. Seis muestras fueron negativas por cultivo y positivas por PCR, considerándose falsos negativos del cultivo por positividad de al menos tres de las otras pruebas ensayadas. La sensibilidad de la PCR y el cultivo fue del 94,2 y 82,8%, respectivamente. La especificidad fue del 100% en las dos pruebas. No se encontró positiva ninguna muestra de placa dental.
Conclusiones: La PCR en biopsia gástrica evidencia una sensibilidad superior al cultivo. Si se decide realizar pruebas invasivas para el diagnóstico microbiológico de H. pylori la PCR ensayada con formato adecuado para la rutina diaria permitiría incrementar la confirmación de la infección
Pacientes y métodos: Durante el período de estudio de octubre de 1995 a julio de 1996 se procesaron 53 biopsias gástricas obtenidas mediante endoscopia digestiva alta de 53 pacientes con patología gástrica (45 con dolor abdominal recidivante y 8 con hematemesis). Se realizaron pruebas no invasivas: detección de anticuerpos IgG anti-H. pylori (Cobas Core, Roche), prueba del aliento 13C-urea y PCR en placa dental así como pruebas invasivas: estudio histológico, cultivo en medio selectivo (Pylori agar®, bioMérieux) y no selectivo (Columbia agar con un 5% de sangre de carnero, bioMérieux), prueba de la ureasa rápida y PCR en las biopsias gástricas. Para la extracción del ADN se utilizó una solución de resina Chelex 100 al 20% (ADN extracción Reagent®, Perkin Elmer), la amplificación se realizó del gen ureA (Clayton, 1992) y el ADN amplificado se detectó mediante hibridación colorimétrica (PCR ELISA® Boehringer, Mannheim). La duración del proceso de la PCR fue: extracción 25 min, amplificación 2 h y detección 3 h.
Resultados: En las muestras de biopsia gástrica el cultivo y la PCR fueron concordantes en el 84,3% de los casos (27 positivos, 16 negativos y dos no determinados). Dos muestras fueron positivas por cultivo y negativas por PCR, considerándose falsos negativos de la PCR por positividad de al menos tres de las otras pruebas ensayadas. Seis muestras fueron negativas por cultivo y positivas por PCR, considerándose falsos negativos del cultivo por positividad de al menos tres de las otras pruebas ensayadas. La sensibilidad de la PCR y el cultivo fue del 94,2 y 82,8%, respectivamente. La especificidad fue del 100% en las dos pruebas. No se encontró positiva ninguna muestra de placa dental.
Conclusiones: La PCR en biopsia gástrica evidencia una sensibilidad superior al cultivo. Si se decide realizar pruebas invasivas para el diagnóstico microbiológico de H. pylori la PCR ensayada con formato adecuado para la rutina diaria permitiría incrementar la confirmación de la infección
Palabras clave:
PCR
Helicobacter pylori
Pediatría
Background: The purpose of this study was to evaluate the use of polymerase chain reaction (PCR) applied to the diagnosis Helicobacter pylori infection in the pediatric population, by means of a rapid and simple method of extraction and posterior detection by a colorimetric hibridation of amplified H. pylori DNA.
Methods: Fifty three gastric biopsies, obtained through upper gastrointestinal endoscopy from 53 patients with gastric pathology (45 recidivant abdominal pain and eight hematemesis), were procesed from october 1995 to july 1996. Three non invassive tests were performed: detection of IgG by (Cobas) Core Anti-H. pylori EIA (Roche®), breath test with 13C-urea and PCR of dental plaque, as well as four invasive ones: histologic study, culture into selective (Pylori® Agar, bioMérieux) and non selective media (Columbia Agar with 5% sheep blood, bioMérieux), test of rapid urease and PCR of gastric biopsies. A 20% solution of Chelex 100 resin (DNA Extraction Reagen®, Perkin Elmer) was used for DNA extraction, amplification was performed from gen ureA (Clayton, 1992) and amplified DNA was detected by colorimetric hibridation (PCR ELISA®, Boehringer, Mannheim). Duration of the PCR process was: extraction 25 min, amplification two hours and detection three hours.
Results: Results of culture and PCR from gastric biopsies agreed in 84.3% of cases (27 positives, 16 negatives and two not determined). Two samples were positive by culture and negative by PCR, and were considered as PCR false negatives due to positivity of three or more other tests. Six samples were negative by culture and positive by PCR, being considered as culture false negatives due to positivity of three or more other tests. Sensitivity of PCR and culture was 94.2 and 82.8%. Specificity was 100% for both tests. None of the dental plaque samples was positive.
Conclusions: When invasive techniques are to be done for microbiologic diagnose of H. pylori, PCR increases the confirmation rate of infection; the present procedure enables daily routine work due to its simplicity and its short turnaround time
Methods: Fifty three gastric biopsies, obtained through upper gastrointestinal endoscopy from 53 patients with gastric pathology (45 recidivant abdominal pain and eight hematemesis), were procesed from october 1995 to july 1996. Three non invassive tests were performed: detection of IgG by (Cobas) Core Anti-H. pylori EIA (Roche®), breath test with 13C-urea and PCR of dental plaque, as well as four invasive ones: histologic study, culture into selective (Pylori® Agar, bioMérieux) and non selective media (Columbia Agar with 5% sheep blood, bioMérieux), test of rapid urease and PCR of gastric biopsies. A 20% solution of Chelex 100 resin (DNA Extraction Reagen®, Perkin Elmer) was used for DNA extraction, amplification was performed from gen ureA (Clayton, 1992) and amplified DNA was detected by colorimetric hibridation (PCR ELISA®, Boehringer, Mannheim). Duration of the PCR process was: extraction 25 min, amplification two hours and detection three hours.
Results: Results of culture and PCR from gastric biopsies agreed in 84.3% of cases (27 positives, 16 negatives and two not determined). Two samples were positive by culture and negative by PCR, and were considered as PCR false negatives due to positivity of three or more other tests. Six samples were negative by culture and positive by PCR, being considered as culture false negatives due to positivity of three or more other tests. Sensitivity of PCR and culture was 94.2 and 82.8%. Specificity was 100% for both tests. None of the dental plaque samples was positive.
Conclusions: When invasive techniques are to be done for microbiologic diagnose of H. pylori, PCR increases the confirmation rate of infection; the present procedure enables daily routine work due to its simplicity and its short turnaround time
Keywords:
PCR
Helicobacter pylori
Pediatric
