Tipificación genética mediante reacción en cadena de la polimerasa de aislamientos de C. albicans obtenidos de una unidad de reanimación

Fundamento: La tipificación mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR) (random polimorphic amplification o arbitrarily primed PCR) consiste en una amplificación al azar mediante el uso de iniciadores de homología desconocida con respecto a la secuencia molde. El interés de nuestro trabajo fue el desarrollo de la tecnología de la amplificación de ácidos nucleicos y su aplicación a la caracterización epidemiológica de C. albicans.
Métodos: Estudiamos 14 cepas aisladas de muestras de hemocultivos, pertenecientes a 8 pacientes. Todas ellas habían sido identificadas a nivel de especie como C.albicans. Para la amplificación se seleccionaron las secuencias AP3 y ERIC2.
Resultados: Con una cepa se obtuvo un patrón de bandas muy diferente al obtenido con el resto de los aislamientos como C. albicans, lo que nos llevó a reidentificarla, comprobando que se trataba de una C.parapsilopsis. Con el resto de las cepas, combinando los resultados obtenidos de la utilización de ambos indicadores obtuvimos 7 genotipos diferentes: 1A, 2B, 3C, 4C, 5D, 6B y 7E.
Conclusiones: El poder discriminativo de los dos iniciadores fue similar, aunque el de AP3 fue mayor, y se obtuvo un genotipo más con dicho iniciador que con ERIC2. Los pacientes con repetidos aislamientos de levaduras en el tiempo, que se pueden considerar el mismo episodio de bacteriemia, presentaban cada uno el mismo patrón de bandas; así, cada uno estaba infectado por un único clon. Confirmamos la utilidad de la tipificación mediante PCR con un único iniciador por reacción, pudiendo mejorarse los resultados con la combinación de los perfiles obtenidos con el uso de varias secuencias en caso de necesitar mayor discriminación. Así mismo, se ha demostrado su uso satisfactorio tanto para la identificación de clones dentro de una especie como para la identificación de especies dentro del género

Background: Typing by PCR (random polymorphic amplification or arbitrarily primed PCR) consists in a random amplification with the use of initiators of unknown homology with respect to the mold sequence. This study is of interest given the development of the technology of the amplification of nucleic acids and its application in the epidemiologic characterization of isolates of C. albicans.
Methods: Fourteen strains isolates in blood cultures of 8patients were studied. All were identified as C. albicans. For amplification the sequence of AP3 and ERIC2 were selected.
Results: With one strain a band pattern very different from that obtained with the remaining isolates identified as C. albicans was achieved leading to reidentification and proving that it was C. parapsilopsis. On combining the results obtained with the use of both initiators 7 different genotypes were obtained with the remaining strains: A1, 2B, 3C, 4C, 5D, 6B and 7E.
Conclusions.: The discriminative power of the two initiators was similar although the AP3 was greater obtaining one more genotype than ERIC2. The patients with repeated yeast isolates over time which may be considered as the same episode of bacteremia, each presented the same band pattern and each was infected by one single clone. We herewith confirm the usefulness of typing by PCR with one initiator by reaction. The results may be improved with the combination of the profiles obtained with the use of several sequences if greater discrimination is required. Likewise, its use has shown to be satisfactory in both the identification of clones within one species and the identification of species within the genus.