Condiciones de desarrollo de un programa de reacción en cadena de la polimerasa-transcriptasa reversa para el estadiaje molecular del cáncer de próstata.

OBJETIVO: Determinar con precisión las condiciones de desarrollo de los ensayos con RT-PCR para PSAen pacientes con cáncer de próstata.
MÉTODO: Amplificación del gen del PSA en cultivos celulares de la línea tumoral prostática humanaLNCaP con RT-PCR en condiciones hot-start, y verificación mediante digestión con enzimas de restriccióndel producto de la PCR. Además se calculó el límite de detección del ensayo de PCR, mediante dilucionesseriadas de células LNCaP en células mononucleares de sangre periférica.
RESULTADOS: Hemos desarrollado un protocolo de RT-PCR de alta especificidad, fácilmente realizabley reproducible. El límite de detección más bajo alcanzado fue de 1 célula sintetizadora de PSA por 106 célulasmononucleares de sangre periférica.
CONCLUSIONES: La RT-PCR es una técnica de un alto grado de sensibilidad, que permite la detecciónde un pequeño número de células productoras de PSA en sangre periférica. Esta experiencia permitió establecercon precisión las condiciones de desarrollo de los ensayos de RT-PCR para PSA.

OBJECTIVE: To determine accurately the conditions for the development of tests using RT-PCR for PSAin patients with prostate cancer.
METHOD: Gen amplification of PSA in cultures of the human prostate tumoral cell line LNCaP with RTPCRunder hot-start conditions, and verification through enzyme restriction digestion of the PCR product.Also, calculation of the PCR test limit of detection through serial dilutions of LNCaP cells in peripheral bloodmononucleate cells.
RESULTS: A highly specific, easy to perform, reproducible RT-PCR protocol has been developed. Thelowest limit of detection reached was 1 PSA synthesising cell per 106 peripheral blood mononucleate cells.
CONCLUSIONS: RT-PCR is a highly sensitive technique that allows detection of small numbers of PSAproducing cells in peripheral blood. This experience allows to establish with precision the conditions for thedevelopment of RT-PCR tests for PSA.