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Original
Efecto del alprostadil en los cultivos de músculo esquelético isquémico. Estudio proteómico comparativo frente a músculo sano
The effect of alprostadil on ischemic skeletal muscle cultures. Comparative proteomic study with healthy muscle
M. Guerra Requenaa,
Autor para correspondencia
merguerra24@gmail.com

Autor para correspondencia.
, C. Morata Barradoa, J. Modrego Martínb, P. Rodríguez Sierrab, A. López Farréb, J. Serrano Hernandoc, G. Moñux Ducajúc
a Servicio de Angiología, Cirugía Vascular y Endovascular, Hospital Universitario de Guadalajara, Guadalajara, España
b Unidad de Investigación Cardiovascular, Hospital Clínico San Carlos, Madrid, España
c Servicio de Angiología y Cirugía Vascular, Hospital Clínico Universitario San Carlos, Madrid, España
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    "textoCompleto" => "<span class="elsevierStyleSections"><span id="sec0005" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0075">Introducci&#243;n</span><p id="par0005" class="elsevierStylePara elsevierViewall">El alprostadil &#40;prostaglandina E1&#41; es una prostaglandina natural presente en las ves&#237;culas seminales y tejidos del cuerpo cavernoso de los varones y en la placenta y el <span class="elsevierStyleItalic">ductus arteriosus</span> del feto&#46; Tiene un efecto reconocido como vasodilatador y antiagregante&#44; por lo que es utilizado actualmente en el tratamiento de los pacientes con isquemia cr&#237;tica &#40;estadios<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span><span class="elsevierStyleSmallCaps">iii</span> y <span class="elsevierStyleSmallCaps">iv</span> de Fontaine&#41; no revascularizable&#44; y en los pacientes con isquemia cr&#237;tica que son revascularizados como terapia adyuvante para mejorar la perfusi&#243;n tisular perif&#233;rica<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0005"><span class="elsevierStyleSup">1-4</span></a>&#46;</p><p id="par0010" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Se conoce bien el efecto que realiza este f&#225;rmaco a nivel del endotelio&#44; pero no se conoce con exactitud si produce alg&#250;n efecto sobre el m&#250;sculo esquel&#233;tico&#44; y si tiene diferentes acciones en el m&#250;sculo esquel&#233;tico isqu&#233;mico frente al m&#250;sculo esquel&#233;tico sano&#46;</p></span><span id="sec0010" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0080">Objetivo</span><p id="par0015" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Determinar el efecto del alprostadil sobre el proteoma &#40;expresi&#243;n proteica&#41; del m&#250;sculo esquel&#233;tico isqu&#233;mico a nivel de las enzimas metab&#243;licas&#44; comparando con la expresi&#243;n proteica del m&#250;sculo esquel&#233;tico sano&#46;</p></span><span id="sec0015" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0085">Material y m&#233;todo</span><span id="sec0020" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0090">Muestras</span><p id="par0020" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Entre febrero y noviembre de 2011 se obtuvieron muestras de 10<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>pacientes sometidos a amputaci&#243;n supracond&#237;lea de extremidad inferior&#46; Los criterios de inclusi&#243;n fueron isquemia cr&#243;nica avanzada de la extremidad &#40;estadios<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span><span class="elsevierStyleSmallCaps">iii</span> y <span class="elsevierStyleSmallCaps">iv</span> de la clasificaci&#243;n de Fontaine&#41;&#44; no revascularizable&#44; con oclusi&#243;n femoropopl&#237;tea en la exploraci&#243;n f&#237;sica&#44; y buenos registros de volumen del pulso &#40;PVR&#41; a nivel del muslo distal en el estudio hemodin&#225;mico&#46; Se excluyeron los enfermos con infecci&#243;n activa severa en el pie o que hubieran recibido tratamiento anteriormente con alprostadil&#46; En los casos en que el paciente estuviera tomando estatinas y antiagregantes previamente&#44; se realiz&#243; un periodo de lavado de los mismos de al menos 10<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>d&#237;as&#46; La selecci&#243;n se realiz&#243; de forma consecutiva&#46;</p><p id="par0025" class="elsevierStylePara elsevierViewall">En todos los pacientes se obtuvo consentimiento informado para su participaci&#243;n y el estudio fue aprobado por el Comit&#233; &#201;tico del centro donde se llev&#243; a cabo la obtenci&#243;n y el procesamiento de muestras&#46;</p><p id="par0030" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Se recogieron las siguientes caracter&#237;sticas de los pacientes&#58; edad&#59; sexo&#59; factores de riesgo cardiovascular&#58; hipertensi&#243;n arterial &#40;presi&#243;n arterial sist&#243;lica &#62;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>140<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mmHg o con tratamiento antihipertensivo&#41;&#44; diabetes mellitus &#40;glucemia basal &#62;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>110<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mg&#47;dl o HbA1c<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#62;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>7&#37;&#44; o tratamiento con antidiab&#233;ticos orales o insulina&#41;&#44; dislipidemia &#40;cifras de colesterol total &#62;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>240<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mg&#47;dl&#44; triglic&#233;ridos &#62;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>150<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mg&#47;dl o ratio HDL&#47;LDL<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#60;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>0&#44;3&#44; o con tratamiento hipolipemiante&#41;&#44; fumador &#40;habitual o exfumador de menos de un a&#241;o&#41;&#59; enfermedad coronaria &#40;historia de angina de pecho&#44; infarto agudo de miocardio o revascularizaci&#243;n mioc&#225;rdica quir&#250;rgica o percut&#225;nea&#41;&#59; insuficiencia renal &#40;valores de creatinina &#62;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>1&#44;5<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mg&#47;dl&#41; y enfermedad cerebrovascular &#40;antecedente de ictus&#44; ataque isqu&#233;mico transitorio o revascularizaci&#243;n carot&#237;dea previa&#41;&#46;</p><p id="par0035" class="elsevierStylePara elsevierViewall">En cada paciente se obtuvieron espec&#237;menes de 2<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>localizaciones&#58; muestras de m&#250;sculo isqu&#233;mico &#40;extra&#237;do del m&#250;sculo extensor corto de los dedos a nivel del pie&#41; o grupo<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>I&#44; y muestras de m&#250;sculo sano del borde de amputaci&#243;n &#40;m&#250;sculo cu&#225;driceps&#41; o grupo<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>S&#46;</p><p id="par0040" class="elsevierStylePara elsevierViewall">El material obtenido se conserv&#243; en medio est&#225;ndar RPMI <span class="elsevierStyleItalic">&#40;Roswell Park Memorial Institute&#41;</span> blanco en condiciones est&#233;riles y se cultiv&#243; de forma inmediata&#46;</p></span><span id="sec0025" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0095">Cultivo</span><p id="par0045" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Las piezas quir&#250;rgicas se cortaron en piezas de 10<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mm de di&#225;metro y se cultivaron en placas de cultivo con medio SG-2 &#40;Humedia-SG2&#44; Kurabou Enterprises&#44; Osaka&#44; Jap&#243;n&#41; en una atm&#243;sfera de 95&#37;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>O<span class="elsevierStyleInf">2</span> 5&#37;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>CO<span class="elsevierStyleInf">2</span> a 37<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#176;C durante 48<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>h y bajo condiciones est&#233;riles&#46; De cada grupo de muestras &#40;I y S&#41; se realizaron 2<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>cultivos&#44; uno basal&#44; sin f&#225;rmaco&#44; y otro con alprostadil&#44; a una concentraci&#243;n de 5<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>ng&#47;ml&#46; La concentraci&#243;n se bas&#243; en estudios similares realizados en c&#233;lulas endoteliales<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0020"><span class="elsevierStyleSup">4&#44;5</span></a>&#46; El medio se cambi&#243; cada 12<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>h&#46; Por tanto&#44; de cada paciente se obtuvieron 4<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>cultivos &#40;grupo<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>I basal&#44; grupo<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>I con alprostadil&#44; grupo<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>S basal&#44; grupo<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>S con alprostadil&#41;&#46;</p><p id="par0050" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Las muestras de m&#250;sculo fueron homogeneizadas con un Ultra-Turrax T8 IKA-Werke en un tamp&#243;n conteniendo 8<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mol&#47;l de urea&#44; CHAPS 2&#37; p&#47;v&#44; 40<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mmol&#47;l de ditiotreitol&#44; anfolito Bio-LyteTH 0&#44;2&#37; &#40;Bio-Rad&#41; y 0&#44;01&#37; p&#47;v de azul bromofenol&#46; Los tejidos homogeneizados fueron centrifugados a 10&#46;000<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>g durante 10<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>min y el sobrenadante se conserv&#243; a &#8211;80<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#176;C para su posterior an&#225;lisis&#46;</p></span><span id="sec0030" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0100">An&#225;lisis prote&#243;mico</span><p id="par0055" class="elsevierStylePara elsevierViewall">El mapa de expresi&#243;n proteica del m&#250;sculo se realiz&#243; mediante una doble electroforesis&#44; seg&#250;n la t&#233;cnica descrita en publicaciones previas<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0030"><span class="elsevierStyleSup">6</span></a>&#44; la primera en un gradiente de pH inmovilizado &#40;IPG-strips&#44; BioRad&#41; y la segunda sobre geles de SDS-PAGE <span class="elsevierStyleItalic">&#40;sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis&#41;</span> al 10&#37;&#46;</p><p id="par0060" class="elsevierStylePara elsevierViewall">La cuantificaci&#243;n de prote&#237;na se realiz&#243; utilizando la reacci&#243;n del &#225;cido bicincon&#237;nico &#40;Pierce&#41;&#46;</p><p id="par0065" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Para la primera dimensi&#243;n de la doble electroforesis se cargaron muestras de 250<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#956;g de prote&#237;na total en tiras de geles de gradiente de pH inmovilizado &#40;IPG&#41; con un pH de 3 a 10&#46; El foco isoel&#233;ctrico se realiz&#243; con el sistema <span class="elsevierStyleItalic">Protean IEF cell system</span> &#40;Bio-Rad Labs&#41; a 50<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>V durante 60<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>h seguido de r&#225;pidas subidas lineales de tensi&#243;n y voltaje limitados por una corriente m&#225;xima de 50<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#956;A por gel&#46;</p><p id="par0070" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Tras la electroforesis por isoelectroenfoque se realiz&#243; la segunda dimensi&#243;n con las prote&#237;nas de las tiras&#44; que fueron disueltas en geles de electroforesis de SDS-PAGE al 10&#37; mediante el sistema Protean<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>II<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>XL &#40;Bio-Rad Labs&#41;&#46;</p><p id="par0075" class="elsevierStylePara elsevierViewall">A continuaci&#243;n&#44; los geles fueron fijados y te&#241;idos con plata con el kit Silver Stain Plus &#40;Bio-Rad Labs&#41;&#44; siguiendo las instrucciones del fabricante&#44; y despu&#233;s escaneados &#40;esc&#225;ner UMAX POWERLOOK<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>III&#41;&#44; mediante el software Magic Scan V<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>4&#46;5&#46; El an&#225;lisis de imagen se llev&#243; a cabo con el programa Quantity One 4&#46;2&#46;3 &#40;Bio-Rad Labs&#41;&#46;</p><p id="par0080" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Para la espectrometr&#237;a de masas &#40;EM&#41;&#44; las manchas de inter&#233;s &#40;las prote&#237;nas a estudio&#41; se recortaron de los geles te&#241;idos con plata y fueron digeridas con tripsina modificada &#40;Promega&#44; Madison&#44; WI&#44; EE&#46;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>UU&#46;&#41;&#46; Las muestras se analizaron utilizando un Analizador Prote&#243;mico 4700 &#40;Applied Biosystem&#41;&#44; funcionando en modo reflector positivo&#46; Los datos generados del espectro permitieron identificar las prote&#237;nas mediante la huella pept&#237;dica&#44; usando el programa MASCOT y comparando con la base de datos Mascot 1&#46;9 &#40;<a id="intr0005" class="elsevierStyleInterRef" href="http://www.matrixscience.com/">http&#58;&#47;&#47;www&#46;matrixscience&#46;com</a>&#41;&#46; Las identificaciones obtenidas por la EM se aceptaron bas&#225;ndose en una evaluaci&#243;n triple que tiene en cuenta datos de peso molecular&#44; anotaci&#243;n del espectro y migraci&#243;n esperada versus observada en los geles de doble electroforesis&#46;</p><p id="par0085" class="elsevierStylePara elsevierViewall">El an&#225;lisis prote&#243;mico que realizamos se centr&#243; en las principales prote&#237;nas implicadas en las distintas v&#237;as metab&#243;licas de la c&#233;lula muscular&#58; triosa-fosfato-isomerasa &#40;TPI&#41;&#44; malato deshidrogenasa &#40;MDH&#41;&#44; lactato deshidrogenasa &#40;LDH&#41; y piruvato carboxilasa &#40;PC&#41;&#46;</p></span><span id="sec0035" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0105">Determinaci&#243;n de lactato y piruvato</span><p id="par0090" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Para la determinaci&#243;n del piruvato y del lactato&#44; productos de las v&#237;as metab&#243;licas analizadas&#44; se emplearon&#44; respectivamente&#44; los kits de ensayo K609-100 y K607-100 &#40;BioVision Research Products&#44; CA&#44; EE&#46;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>UU&#46;&#41;&#44; seg&#250;n las instrucciones del fabricante&#46;</p></span><span id="sec0040" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0110">Estad&#237;stica</span><p id="par0095" class="elsevierStylePara elsevierViewall">El an&#225;lisis estad&#237;stico se realiz&#243; mediante tests no param&#233;tricos &#40;U de Mann-Whitney&#44; Wilcoxon&#41;&#46; Se exigi&#243; un valor de p<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#60;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>0&#44;05 para considerar diferencias estad&#237;sticamente significativas&#46; El an&#225;lisis de los datos obtenidos se realiz&#243; mediante el programa SPSS para Windows&#46;</p></span></span><span id="sec0045" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0115">Resultados</span><p id="par0100" class="elsevierStylePara elsevierViewall">En la <a class="elsevierStyleCrossRef" href="#tbl0005">tabla 1</a> se resumen las caracter&#237;sticas cl&#237;nicas de los pacientes&#46; Los resultados del an&#225;lisis prote&#243;mico de las enzimas estudiadas y la determinaci&#243;n de lactato y piruvato se representan en la <a class="elsevierStyleCrossRef" href="#tbl0010">tabla 2</a> y en las <a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#fig0005">figuras 1 y 2</a>&#46;</p><elsevierMultimedia ident="tbl0005"></elsevierMultimedia><elsevierMultimedia ident="tbl0010"></elsevierMultimedia><elsevierMultimedia ident="fig0005"></elsevierMultimedia><elsevierMultimedia ident="fig0010"></elsevierMultimedia><p id="par0105" class="elsevierStylePara elsevierViewall">En cuanto a los cultivos basales&#44; se observ&#243; una disminuci&#243;n significativa de la MDH en el m&#250;sculo isqu&#233;mico respecto al m&#250;sculo sano&#46; En los cultivos con alprostadil no se observaron diferencias en la MDH entre ambos grupos&#44; pero s&#237; el aumento de la PC en el m&#250;sculo isqu&#233;mico respecto al sano&#46;</p><p id="par0110" class="elsevierStylePara elsevierViewall">La TPI&#44; una de las enzimas claves en la regulaci&#243;n de la v&#237;a glucol&#237;tica&#44; no mostr&#243; diferencias en el m&#250;sculo isqu&#233;mico frente al sano en las muestras basales&#44; ni tampoco al incubarlo con alprostadil&#46; No se obtuvieron tampoco diferencias significativas en la LDH &#40;gluc&#243;lisis anaerobia&#41; en las muestras basales entre ambos grupos&#44; aumentando de forma no significativa al incubar con alprostadil tanto en el grupo<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>I como en el S&#46;</p><p id="par0115" class="elsevierStylePara elsevierViewall">No se observaron diferencias significativas en los niveles de lactato ni piruvato en las muestras basales ni en las incubadas con f&#225;rmaco en ninguno de los 2<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>grupos&#46;</p></span><span id="sec0050" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0120">Discusi&#243;n</span><p id="par0120" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Las prote&#237;nas est&#225;n implicadas en todas las funciones celulares&#44; controlan cualquier mecanismo que ocurre en el interior celular y son modificadas en diferentes enfermedades&#46; El proteoma de una c&#233;lula es el conjunto de prote&#237;nas que se expresan en una c&#233;lula&#46; Por lo tanto&#44; el proteoma dicta el fenotipo de la c&#233;lula y su funcionalidad&#44; as&#237; como la funcionalidad del tejido en el cual la c&#233;lula est&#225; contenida&#46; El fenotipo puede variar en condiciones normales&#44; &#250;nicamente por el estado de crecimiento de la c&#233;lula o la edad&#44; adem&#225;s de evidentemente variar por la intervenci&#243;n en respuesta a los est&#237;mulos que aparecen durante enfermedades cr&#243;nicas o agudas&#46; Las prote&#237;nas pueden experimentar modificaciones postransduccionales debido a situaciones patol&#243;gicas o incluso a tratamientos farmacol&#243;gicos&#46; El proteoma&#44; por lo tanto&#44; es un elemento din&#225;mico de la c&#233;lula&#44; a diferencia del genoma&#44; que es un elemento est&#225;tico&#46; La prote&#243;mica es el estudio del proteoma&#44; o lo que es lo mismo&#44; de las prote&#237;nas de una c&#233;lula que se expresan en un momento dado&#44; pero no solo las que aparecen en la c&#233;lula mediante la expresi&#243;n de un gen&#44; sino tambi&#233;n todas las modificaciones proteicas debidas a transcriptos alternativos o modificados en el proceso postranslacional&#44; as&#237; como la combinaci&#243;n de estos dos&#46;</p><p id="par0125" class="elsevierStylePara elsevierViewall">En resumen&#44; y en t&#233;rminos sencillos&#44; la prote&#243;mica nos va a permitir comparar la expresi&#243;n proteica general de las c&#233;lulas&#44; sometidas a diferentes maniobras experimentales&#46; Hasta el momento actual la prote&#243;mica en investigaci&#243;n cardiovascular se ha realizado mayoritariamente en miocardiopat&#237;as<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0035"><span class="elsevierStyleSup">7&#44;8</span></a>&#46;</p><p id="par0130" class="elsevierStylePara elsevierViewall">La gluc&#243;lisis es una de las v&#237;as metab&#243;licas principales de obtenci&#243;n de la energ&#237;a&#46; Los 10<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>pasos enzim&#225;ticos de conversi&#243;n de la glucosa en piruvato se contin&#250;an en condiciones aer&#243;bicas con la reacci&#243;n del ciclo del &#225;cido c&#237;trico o ciclo de Krebs y la fosforilaci&#243;n oxidativa&#46;</p><p id="par0135" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Sin embargo&#44; bajo condiciones anaer&#243;bicas el piruvato es convertido en lactato en los tejidos musculares &#40;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#fig0015">fig&#46; 3</a>&#41;&#46;</p><elsevierMultimedia ident="fig0015"></elsevierMultimedia><p id="par0140" class="elsevierStylePara elsevierViewall">En los &#250;ltimos a&#241;os se han realizado m&#250;ltiples estudios de prote&#243;mica en el m&#250;sculo esquel&#233;tico<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0045"><span class="elsevierStyleSup">9</span></a>&#46; Los niveles de expresi&#243;n y las modificaciones postransduccionales de las enzimas glucol&#237;ticas est&#225;n claramente alterados durante el desarrollo&#44; o distintos procesos adaptativos fisiol&#243;gicos como la actividad neuromuscular aumentada o la atrofia por desuso&#46; La v&#237;a glucol&#237;tica tambi&#233;n se modifica en muchas enfermedades neuromusculares&#44; incluyendo la debilidad en la contracci&#243;n muscular relacionada con la diabetes&#44; la distrofia muscular o la sarcopenia de la vejez&#46;</p><p id="par0145" class="elsevierStylePara elsevierViewall">La isquemia cr&#243;nica de miembros inferiores supone una situaci&#243;n patol&#243;gica a nivel del m&#250;sculo&#44; con una disminuci&#243;n del aporte sangu&#237;neo&#44; y con ello de ox&#237;geno y otras sustancias&#44; ante el que se establecen respuestas a nivel molecular&#46; En este estudio hemos analizado la prote&#243;mica de las c&#233;lulas musculares en pacientes con isquemia de la extremidad&#44; a nivel de las principales enzimas metab&#243;licas y sus productos&#44; y su relaci&#243;n con el m&#250;sculo sano&#46; Asimismo&#44; se estudia por primera vez el efecto del alprostadil sobre ambos&#46;</p><p id="par0150" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Hemos encontrado en el m&#250;sculo isqu&#233;mico una disminuci&#243;n de la malato deshidrogenasa&#44; no encontr&#225;ndose diferencias en la gluc&#243;lisis &#40;TPI&#41; ni en la v&#237;a anaer&#243;bica &#40;LDH&#44; lactato&#41;&#46; El alprostadil produjo un aumento de la piruvato carboxilasa &#40;ciclo de Krebs&#41; tanto en el m&#250;sculo sano como en el isqu&#233;mico&#46;</p><p id="par0155" class="elsevierStylePara elsevierViewall">La reducci&#243;n de malato deshidrogenasa en el m&#250;sculo isqu&#233;mico sugiere una reducci&#243;n del ciclo de Krebs&#44; en relaci&#243;n con un menor aporte de ox&#237;geno en el m&#250;sculo isqu&#233;mico&#46; En estudios de realizados en m&#250;sculo esquel&#233;tico de pacientes ancianos se ha observado una disminuci&#243;n de la extracci&#243;n de ox&#237;geno y&#44; mediante prote&#243;mica&#44; una disminuci&#243;n de las enzimas mitocondriales o enzimas del ciclo de Krebs<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0050"><span class="elsevierStyleSup">10-13</span></a>&#46;</p><p id="par0160" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Seg&#250;n los resultados obtenidos&#44; el alprostadil no modifica esta v&#237;a directamente pero estimula la expresi&#243;n de piruvato carboxilasa&#44; induciendo as&#237; la formaci&#243;n de oxalacetato&#44; que se introduce en el ciclo de Krebs&#46; Esto permite funcionar parcialmente el ciclo de Krebs en el musculo isqu&#233;mico &#40;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#fig0015">fig&#46; 3</a>&#41;&#44; mejorando as&#237; la obtenci&#243;n de energ&#237;a&#46;</p><p id="par0165" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Una de las limitaciones del estudio es que se ha realizado con cultivos de tejidos&#46; Hay que contar con la limitaci&#243;n intr&#237;nseca que supone un estudio in vitro&#44; que no refleja las distintas interacciones que tendr&#225;n lugar en el conjunto del organismo&#46; Asimismo&#44; la identificaci&#243;n de las prote&#237;nas mediante la doble electroforesis no es exacta&#44; y puede subestimar la presencia de elementos poco abundantes&#44; las prote&#237;nas integradas en la membrana o componentes con peso molecular muy elevado<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0070"><span class="elsevierStyleSup">14-17</span></a>&#46; Adem&#225;s&#44; las prote&#237;nas con valores de punto isoel&#233;ctrico &#40;pI&#41; extremos no suelen ser bien detectadas en sistemas con un amplio rango de pI&#46; Otra cuesti&#243;n importante es la distorsi&#243;n de los puntos de prote&#237;nas debido a la presencia de distintas especies o isoformas con extensas modificaciones postranslacionales&#46; El an&#225;lisis mediante EM en ese sentido resuelve la mayor&#237;a de estos problemas&#46;</p><p id="par0170" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Se ha considerado en este estudio como sano el m&#250;sculo cu&#225;driceps del borde de amputaci&#243;n&#44; en pacientes que presentaban pulso femoral y buenos PVR en muslo&#44; aunque en sentido estricto los pacientes con isquemia irreversible de la extremidad que precisan una amputaci&#243;n mayor no son pacientes &#171;sanos&#187;&#46; No se han usado en este caso muestras control&#44; como por ejemplo de pacientes amputados por causa traum&#225;tica&#44; en los que no existieran antecedentes de enfermedad cardiovascular conocida&#46; Asimismo hay que tener en cuenta que eran pacientes de edad avanzada&#44; en los que de por s&#237;&#44; como ya se ha comentado&#44; se han observado cambios en las enzimas mitocondriales asociados a la vejez&#46; Otras caracter&#237;sticas de los pacientes que podr&#237;an haber influido en los resultados son la presencia de diabetes mellitus o el uso de f&#225;rmacos perioperatorios que pudieran haber modificado el metabolismo del m&#250;sculo&#44; aunque&#44; como ya se ha comentado&#44; se realiz&#243; un periodo de lavado de al menos 10<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>d&#237;as en pacientes que previamente estuvieran tomando estatinas y antiagregantes&#46;</p><p id="par0175" class="elsevierStylePara elsevierViewall">En conclusi&#243;n&#44; es la primera vez que se estudia el efecto del alprostadil sobre m&#250;sculo sano e isqu&#233;mico en humanos&#46; La reducci&#243;n de malato deshidrogenasa en el m&#250;sculo isqu&#233;mico sugiere una reducci&#243;n del ciclo de Krebs&#46; El alprostadil no modifica esta v&#237;a pero estimula la expresi&#243;n de piruvato carboxilasa&#44; induciendo la formaci&#243;n de oxalacetato&#44; que se introduce en el ciclo de Krebs&#46; De este modo&#44; el aprostadil permite funcionar parcialmente el ciclo de Krebs del m&#250;sculo isqu&#233;mico&#44; mejorando la obtenci&#243;n de energ&#237;a&#46;</p></span><span id="sec0055" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0125">Responsabilidades &#233;ticas</span><span id="sec0060" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0130">Protecci&#243;n de personas y animales</span><p id="par0180" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Los autores declaran que los procedimientos seguidos se conformaron a las normas &#233;ticas del comit&#233; de experimentaci&#243;n humana responsable y de acuerdo con la Asociaci&#243;n M&#233;dica Mundial y la Declaraci&#243;n de Helsinki&#46;</p></span><span id="sec0065" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0135">Confidencialidad de los datos</span><p id="par0185" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Los autores declaran que han seguido los protocolos de su centro de trabajo sobre la publicaci&#243;n de datos de pacientes y que todos los pacientes incluidos en el estudio han recibido informaci&#243;n suficiente y han dado su consentimiento informado por escrito para participar en dicho estudio&#46;</p></span><span id="sec0070" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0140">Derecho a la privacidad y consentimiento informado</span><p id="par0190" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Los autores han obtenido el consentimiento informado de los pacientes y&#47;o sujetos referidos en el art&#237;culo&#46; Este documento obra en poder del autor de correspondencia&#46;</p></span></span><span id="sec0075" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0145">Financiaci&#243;n</span><p id="par0195" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Este proyecto recibi&#243; una Beca de Investigaci&#243;n de la Fundaci&#243;n SEACV&#44; as&#237; como una Beca de Laboratorios Esteve&#46;</p></span><span id="sec0080" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0150">Conflicto de intereses</span><p id="par0200" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Los autores declaran no tener ning&#250;n conflicto de intereses&#46;</p></span></span>"
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                  \t\t\t\t">Edad &#40;a&#241;os&#41;&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t">8&#47;10&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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                  \t\t\t\t">Hipertensi&#243;n arterial&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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                  \t\t\t\t">7&#47;10&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t">7&#47;10&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t">Dislipidemia&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t">5&#47;10&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t">Fumador&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t">4&#47;10&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t">Enfermedad coronaria&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t">5&#47;10&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t">3&#47;10&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t">Enfermedad cerebrovascular&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t">3&#47;10&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t" style="border-bottom: 2px solid black">Grupo S</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t  " colspan="2" align="center" valign="\n
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                  \t\t\t\t" style="border-bottom: 2px solid black">Grupo I</td></tr><tr title="table-row"><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t" style="border-bottom: 2px solid black">&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
                  \t\t\t\t\ttable-head\n
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                  \t\t\t\t" style="border-bottom: 2px solid black">Basal&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t" style="border-bottom: 2px solid black">Alprostadil&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t" style="border-bottom: 2px solid black">Basal&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t" style="border-bottom: 2px solid black">Alprostadil&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td></tr></thead><tbody title="tbody"><tr title="table-row"><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t">TPI &#40;UAD&#41;&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t">73<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>15&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t">50<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>17&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t">100<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>39&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t">55<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>34&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t">53&#44;15<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>7&#44;72&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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                  \t\t\t\t">Piruvato &#40;&#956;mol&#47;l&#41;&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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Información del artículo
ISSN: 00033170
Idioma original: Español
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