Characterization of epithelial primary culture from human conjunctiva

Abstract

Objective

To evaluate primary cultures from human conjunctiva supplemented with fetal bovine serum, autologous serum, and platelet-rich autologous serum, over human amniotic membrane and lens anterior capsules.

Methods

One-hundred and forty-eight human conjunctiva explants were cultured in CnT50^® supplemented with 1, 2.5, 5 and 10% fetal bovine serum, autologous serum and platelet-rich autologous serum. Conjunctival samples were incubated at 37 °C, 5% CO₂ and 95% HR, for 3 weeks.

Results

The typical phenotype corresponding to conjunctival epithelial cells was present in all primary cultures. Conjunctival cultures had MUC5AC-positive secretory cells, K19-positive conjunctival cells, and MUC4-positive non-secretory conjunctival cells, but were not corneal phenotype (cytokeratin K3-negative) and fibroblasts (CD90-negative).

Conclusions

Conjunctiva epithelial progenitor cells were preserved in all cultures; thus, a cell culture in CnT50^® supplemented with 1–5% autologous serum over human amniotic membrane can provide better information of epithelial cell differentiation for the conjunctival surface reconstruction.

Resumen

Objetivo

Evaluar diferentes cultivos primarios de conjuntiva humana enriquecidos con suero fetal bovino, suero autólogo y suero autólogo rico en plaquetas, sobre un soporte de membrana amniótica humana y cápsula anterior del cristalino.

Métodos

Ciento cuarenta y ocho explantes de conjuntiva humana fueron cultivados en CnT50^® enriquecido con 1, 2,5, 5 y 10% en suero fetal bovino, suero autólogo y suero autólogo rico en plaquetas. Las muestras de conjuntivales fueron incubadas a 37 °C, 5% CO₂ y 95% HR, durante 3 semanas.

Resultados

Todos los cultivos primarios tuvieron el fenotipo típico de las células epiteliales de la conjuntiva. Los cultivos mostraron células secretoras MUC5AC-positiva, células conjuntivales CK19-positiva y células conjuntivales no secretoras MUC4-positiva, pero sin fenotipo corneal (CK3-negativa) ni fibroblastos (CD90-negativa).

Conclusiones

Las células epiteliales progenitoras de la conjuntiva se mantuvieron en todos los cultivos, por lo que un cultivo celular en CnT50^® enriquecido con suero autólogo entre el 1 y 5% sobre membrana amniótica humana puede proporcionar la mejor información de la diferenciación de las células epiteliales para la reconstrucción de la superficie conjuntival.