Effect of Müller cells on the survival and neuritogenesis in retinal ganglion cells

Abstract

Objective

Retinal ganglion cells (RGCs) are the first affected cells in neuropathies like glaucoma, for that reason it is very important to explore new methods to neuroprotect these neurons. Müller cells are glial cells that provide the neurons with trophic factors and scaffold. The purpose of this study was to analyze the effect of Müller cells on survival and neurite formation in RGCs.

Method

Rat Müller cells were grown until a confluent culture on which rat RGCs were added, using pure culture of rat RGCs as controls. RGCs were labeled with βIII-tubulin, and Müller cells with glutamine synthetase antibodies. In addition, nuclei were stained with DAPI. The number of RGCs and number and neurite length were measured.

Results

No differences were found in the number of RGCs between control and cells grown on the substrate of Müller cells. The proportion of RGCs with neurites increased when they grew on Müller (RGCs with 1–3 neurites increased from 19% to 43%. The length of neurites also increased in RGCs grown on Müller cells, with the number of RGCs with neurites from 50 to 200 μm increasing from 21% to 41%, and with neurites of more than 200 μm the increase was from 6% to 20%.

Conclusions

Müller cells support the survival of RGCs and induced an increase in the number and length of neurites of RGCs.

Resumen

Objetivo

Las células ganglionares de la retina (RGC) son las células que se afectan primero en neuropatologías como el glaucoma, por eso es importante investigar nuevas estrategias neuroprotectoras. Las células de Müller son células gliales que proporcionan a las neuronas factores tróficos y soporte físico. El propósito del presente estudio fue analizar el efecto de las células de Müller en la supervivencia y la formación de neuritas en las RGC.

Método

Se cultivaron células de Müller de rata hasta obtener un cultivo confluente sobre el que se añadieron RGC. Cultivos puros de RGC fueron usados como control. Se marcaron las RGC con anticuerpos anti-βIII-tubulina y las células de Müller con antiglutamina sintetasa, los núcleos se tiñeron con DAPI. Se cuantificó el número de RGC y número y longitud de las neuritas.

Resultados

No hay diferencias en el número de RGC entre el control y las células crecidas sobre el sustrato de Müller. Aumenta la proporción de neuritas en RGC que crecieron sobre células de Müller, el número RGC con 1-3 neuritas pasa de un 19 a un 43%. También aumenta la longitud de las neuritas, el número de RGC con neuritas de entre 50-200 μm aumenta de un 21 en control a un 41% en cocultivo y con más de 200 μm pasa de un 6 a un 20%.

Conclusiones

Las células de Müller mantienen la supervivencia de las RGC e inducen un aumento tanto del número como de la longitud de las neuritas de las RGC.