Introducción: La determinación de lactato, piruvato y cuerpos cetónicos es útil en el estudio de alteraciones metabólicas asociadas a la diabetes mellitus. El objetivo del presente estudio fue desarrollar y validar un método para la determinación sensible y específica de lactato, piruvato, β-hdroxibutirato y acetoacetato mediante cromatografía de gases y espectrometría de masas, tecnología gold standard para el análisis de metabolitos.

Métodos: El método incluye la utilización de estándares internos isotópicos y se basa en una precipitación de las proteínas de las muestras, seguida de derivatización con o-fenilendiamina, extracción con acetato de etilo, derivatización con BSTFA:TMCS e inyección en cromatógrafo (Shimadzu GCMS-QP2010). La validación del método se realizó en muestras de sangre (plasma EDTA; 200 μL) y tejido hepático (200 mg). Se evaluó la linealidad, exactitud y precisión del método, y la estabilidad de las muestras una vez procesadas.

Resultados: El método presenta una buena linealidad (r > 0,99) en el rango 10-5.000 ng/ml (lactato) y 1-1.000 ng/ml (piruvato, β-hidroxibutirato y acetoacetato). La exactitud fue 98-105% para lactato, 101-103% para piruvato, 91-101% para β-hidroxibutirato y 84-109% para acetoacetato. La imprecisión obtenida en muestras de sangre y tejido hepático fue < 8% (intraensayo) e < 10% (internesayo). El tiempo de procesamiento de las muestras es de 4-5 horas por serie de muestras (15-20 muestras) y el tiempo de cromatograma de 10 minutos/muestra. Las muestras una vez inyectadas en el cromatógrafo son estables al menos durante 96 horas.

Conclusiones: El método validado permite la determinación simultánea mediante espectrometría masas de lactato, piruvato, β-hidroxibutirato y acetoacetato de forma sensible con buena precisión y exactitud, siendo de utilidad en el estudio de alteraciones metabólicas asociadas a la diabetes mellitus en muestras clínicas y de investigación.