metricas
covid
Buscar en
Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica
Toda la web
Inicio Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica Nuevos métodos de identificación de micobacterias
Información de la revista

Estadísticas

Siga este enlace para acceder al texto completo del artículo

Nuevos métodos de identificación de micobacterias
New methods for mycobacteria identification
Fernando Alcaide Fernández de Vegaa
a Servicio de Microbiología. IDIBELL-Hospital Universitari de Bellvitge. Departamento de Patología y Terapéutica Experimental. Universitat de Barcelona. L'Hospitalet de Llobregat. Barcelona. España.
Leído
100959
Veces
se ha leído el artículo
5051
Total PDF
95908
Total HTML
Compartir estadísticas
 array:19 [
  "pii" => "13094279"
  "issn" => "0213005X"
  "doi" => "10.1016/S0210-5705(09)71003-9"
  "estado" => "S300"
  "fechaPublicacion" => "2006-10-02"
  "documento" => "article"
  "crossmark" => 0
  "subdocumento" => "fla"
  "cita" => "Enferm Infecc Microbiol Clin. 2006;24 Supl 1:53-7"
  "abierto" => array:3 [
    "ES" => false
    "ES2" => false
    "LATM" => false
  ]
  "gratuito" => false
  "lecturas" => array:2 [
    "total" => 90845
    "formatos" => array:3 [
      "EPUB" => 12
      "HTML" => 86625
      "PDF" => 4208
    ]
  ]
  "itemAnterior" => array:16 [
    "pii" => "13094278"
    "issn" => "0213005X"
    "doi" => "10.1016/S0210-5705(09)71003-9"
    "estado" => "S300"
    "fechaPublicacion" => "2006-10-02"
    "documento" => "article"
    "crossmark" => 0
    "subdocumento" => "fla"
    "cita" => "Enferm Infecc Microbiol Clin. 2006;24 Supl 1:46-52"
    "abierto" => array:3 [
      "ES" => false
      "ES2" => false
      "LATM" => false
    ]
    "gratuito" => false
    "lecturas" => array:2 [
      "total" => 99527
      "formatos" => array:3 [
        "EPUB" => 14
        "HTML" => 93814
        "PDF" => 5699
      ]
    ]
    "es" => array:11 [
      "idiomaDefecto" => true
      "titulo" => "Queratitis por <span class="elsevierStyleItalic">Acanthamoeba</span>"
      "tienePdf" => "es"
      "tieneTextoCompleto" => "es"
      "tieneResumen" => array:2 [
        0 => "es"
        1 => "en"
      ]
      "paginas" => array:1 [
        0 => array:2 [
          "paginaInicial" => "46"
          "paginaFinal" => "52"
        ]
      ]
      "titulosAlternativos" => array:1 [
        "en" => array:1 [
          "titulo" => "Keratitis due to <span class="elsevierStyleItalic">Acanthamoeba</span>"
        ]
      ]
      "contieneResumen" => array:2 [
        "es" => true
        "en" => true
      ]
      "contieneTextoCompleto" => array:1 [
        "es" => true
      ]
      "contienePdf" => array:1 [
        "es" => true
      ]
      "autores" => array:1 [
        0 => array:2 [
          "autoresLista" => "Julio P&#233;rez-Irez&#225;bal, In&#233;s Mart&#237;nez, Patricia Isasa, Jorge Barr&#243;n"
          "autores" => array:4 [
            0 => array:2 [
              "nombre" => "Julio"
              "apellidos" => "P&#233;rez-Irez&#225;bal"
            ]
            1 => array:2 [
              "nombre" => "In&#233;s"
              "apellidos" => "Mart&#237;nez"
            ]
            2 => array:2 [
              "nombre" => "Patricia"
              "apellidos" => "Isasa"
            ]
            3 => array:2 [
              "nombre" => "Jorge"
              "apellidos" => "Barr&#243;n"
            ]
          ]
        ]
      ]
    ]
    "idiomaDefecto" => "es"
    "EPUB" => "https://multimedia.elsevier.es/PublicationsMultimediaV1/item/epub/13094278?idApp=UINPBA00004N"
    "url" => "/0213005X/00000024000000S1/v0_201307121507/13094278/v0_201307121508/es/main.assets"
  ]
  "es" => array:13 [
    "idiomaDefecto" => true
    "titulo" => "Nuevos m&#233;todos de identificaci&#243;n de micobacterias"
    "tieneTextoCompleto" => true
    "paginas" => array:1 [
      0 => array:2 [
        "paginaInicial" => "53"
        "paginaFinal" => "57"
      ]
    ]
    "autores" => array:1 [
      0 => array:3 [
        "autoresLista" => "Fernando Alcaide Fern&#225;ndez de Vega"
        "autores" => array:1 [
          0 => array:3 [
            "nombre" => "Fernando"
            "apellidos" => "Alcaide Fern&#225;ndez de Vega"
            "referencia" => array:1 [
              0 => array:2 [
                "etiqueta" => "<span class="elsevierStyleSup">a</span>"
                "identificador" => "affa"
              ]
            ]
          ]
        ]
        "afiliaciones" => array:1 [
          0 => array:3 [
            "entidad" => "Servicio de Microbiología. IDIBELL-Hospital Universitari de Bellvitge. Departamento de Patología y Terapéutica Experimental. Universitat de Barcelona. L'Hospitalet de Llobregat. Barcelona. España."
            "etiqueta" => "<span class="elsevierStyleSup">a</span>"
            "identificador" => "affa"
          ]
        ]
      ]
    ]
    "titulosAlternativos" => array:1 [
      "en" => array:1 [
        "titulo" => "New methods for mycobacteria identification"
      ]
    ]
    "textoCompleto" => "<p class="elsevierStylePara">Introducci&#243;n</p><p class="elsevierStylePara">En los &#250;ltimos a&#241;os&#44; en los pa&#237;ses desarrollados se ha asistido a un aumento del aislamiento de numerosas especies micobacterianas&#44; tanto conocidas como de nueva descripci&#243;n&#46; As&#237;&#44; dentro del g&#233;nero Mycobacterium se incluyen m&#225;s de 100 especies&#44; muchas de ellas con gran repercusi&#243;n cl&#237;nica&#44; ya que son los agentes causales de infecciones humanas con una importante morbilidad y mortalidad&#44; como la tuberculosis y la lepra&#44; entre otras&#46; No obstante&#44; aunque Mycobacterium tuberculosis es&#44; con mucho&#44; la micobacteria m&#225;s importante y aislada con m&#225;s frecuencia&#44; las micobacterias no tuberculosas &#40;MNT&#41; representan&#44; en la actualidad&#44; entre el 10 y el 30&#37; del total de las aisladas en la mayor&#237;a de los laboratorios de microbiolog&#237;a cl&#237;nica&#46; Adem&#225;s&#44; un gran n&#250;mero de ellas son pat&#243;genas para el hombre &#40;micobacteriosis&#41;&#44; por lo que requieren un tratamiento espec&#237;fico para cada caso&#46; Por ello&#44; ante cualquier aislamiento micobacteriano cl&#237;nico&#44; se recomienda llevar a cabo una identificaci&#243;n precisa de especie&#44; incluso dentro del complejo M&#46; tuberculosis&#46; Para la identificaci&#243;n del g&#233;nero Mycobacterium existen diversos tipos de abordaje metodol&#243;gico&#58; convencional o fenot&#237;pico&#44; cromatogr&#225;fico y los nuevos m&#233;todos&#44; como el fagot&#237;pico y el genot&#237;pico o molecular <span class="elsevierStyleSup"> 1</span>&#46;</p><p class="elsevierStylePara">Los m&#233;todos tradicionales se basan en una identificaci&#243;n preliminar mediante el tiempo de crecimiento &#40;lento o r&#225;pido&#41;&#44; los aspectos morfol&#243;gicos y de cromogenicidad o producci&#243;n de pigmento de las colonias &#40;fotocrom&#243;genas&#44; escotocrom&#243;genas y no crom&#243;genas&#41;&#46; Posteriormente&#44; se llevan a cabo diferentes pruebas bioqu&#237;micas para llegar a una identificaci&#243;n espec&#237;fica&#46; Sin embargo&#44; la laboriosidad de los m&#233;todos fenot&#237;picos y el crecimiento lento de estas bacterias demoran la identificaci&#243;n definitiva varias semanas&#44; y en muchos casos es imposible identificar la especie&#46;</p><p class="elsevierStylePara">En el presente art&#237;culo se revisan las nuevas alternativas para la r&#225;pida y precisa identificaci&#243;n de las especies micobacterianas&#46; Aunque es posible realizar algunas de ellas directamente sobre las muestras cl&#237;nicas&#44; esta revisi&#243;n hace hincapi&#233; en la aplicaci&#243;n en los aislamientos obtenidos por cultivo&#46;</p><p class="elsevierStylePara">Identificaci&#243;n cromatogr&#225;fica</p><p class="elsevierStylePara">Una alternativa a la identificaci&#243;n tradicional es el an&#225;lisis cualitativo de la composici&#243;n lip&#237;dica de la pared celular de estos microorganismos &#40;hasta el 40&#37; de su peso seco&#41;&#44; mediante diversos estudios cromatogr&#225;ficos&#58; cromatograf&#237;a en capa fina &#40;TLC&#41;&#44; cromatograf&#237;a de gases &#40;GLC&#41; y cromatograf&#237;a l&#237;quida de alta presi&#243;n &#40;HPLC&#41;&#46; Estas t&#233;cnicas se basan en las diferentes solubilidades de los componentes entre 2 fases miscibles&#58; hay una fase estacionaria &#40;l&#237;quida o s&#243;lida&#41; y una m&#243;vil &#40;gaseosa o l&#237;quida&#41;&#44; que var&#237;an de constituci&#243;n seg&#250;n el m&#233;todo cromatogr&#225;fico utilizado&#46; De todos ellos&#44; el estudio de los &#225;cidos mic&#243;licos mediante HPLC ha demostrado ser r&#225;pido&#44; reproducible&#44; bastante espec&#237;fico de especie y de aplicaci&#243;n universal en la identificaci&#243;n micobacteriana <span class="elsevierStyleSup">2</span>&#46; Adem&#225;s&#44; en la actualidad&#44; se dispone de sistemas de identificaci&#243;n informatizados con bases de datos que contienen m&#250;ltiples perfiles de &#225;cidos grasos de especies micobacterianas correctamente caracterizadas <span class="elsevierStyleSup">3&#44;4</span>&#46; No obstante&#44; la HPLC&#44; al igual que el resto de las t&#233;cnicas cromatogr&#225;ficas &#40;salvo la GLC&#41;&#44; no deja de ser un m&#233;todo complejo&#44; que requiere una infraestructura costosa y un gran entrenamiento&#44; por lo que es una alternativa &#250;til de identificaci&#243;n a partir de cultivos s&#243;lo en los centros con la dotaci&#243;n y la experiencia suficientes&#46;</p><p class="elsevierStylePara">Por otro lado&#44; la identificaci&#243;n micobacteriana directamente en muestras cl&#237;nicas se ha intentado mediante la detecci&#243;n de un componente estructural de la pared micobacteriana&#44; el &#225;cido tuberculoeste&#225;rico &#40;ATBS&#41;&#44; mediante la cromatograf&#237;a de gases&#47;espectrometr&#237;a de masas&#46; Aunque la t&#233;cnica demostr&#243; ser r&#225;pida y tener una sensibilidad considerable&#44; el ATBS no es espec&#237;fico de especie y su detecci&#243;n implica una diagn&#243;stico diferencial entre el g&#233;nero Mycobacterium y las especies de Nocardia&#44; as&#237; como otros bacilos grampositivos&#44; que tambi&#233;n contienen dicho componente <span class="elsevierStyleSup">5</span>&#46;</p><p class="elsevierStylePara">Identificaci&#243;n mediante fagos espec&#237;ficos</p><p class="elsevierStylePara">Entre los nuevos m&#233;todos de identificaci&#243;n&#44; recientemente ha aparecido la utilizaci&#243;n de bacteri&#243;fagos con afinidad espec&#237;fica por las micobacterias&#46; Desde 1947&#44; se han descrito m&#225;s de 250 micobacteri&#243;fagos&#46; Sin embargo&#44; en la actualidad s&#243;lo 2 m&#233;todos&#44; el LRP &#40;luciferase reporter phage assay&#41; y el PhaB &#40;phage amplified biollogically assay&#41; o MAB &#40;mycobacteriophage-based assay&#41; se han desarrollado con cierta utilidad cl&#237;nica&#46; La diferencia m&#225;s importante entre estos m&#233;todos radica en la detecci&#243;n de las c&#233;lulas micobacterianas infectadas por el fago&#46; En el LRP se utiliza la emisi&#243;n de luz&#44; codificada por el gen de la luciferasa&#44; incorporado en el genoma del fago&#46; Esta enzima es un indicador de la presencia de c&#233;lulas micobacterianas viables&#46; En el PhaB o MAB&#44; la detecci&#243;n se basa tan s&#243;lo en la presencia de m&#250;ltiples c&#233;lulas micobacterianas infectadas viables&#44; tras una amplificaci&#243;n f&#225;gica &#40;mycobacteriofago D29&#41; en Mycobacterium smegmatis&#46;</p><p class="elsevierStylePara">El LRP ha demostrado ser &#250;til en la diferenciaci&#243;n entre M&#46; tuberculosis y las MNT&#44; a partir de cultivo y en las pruebas de sensibilidad a la isoniazida y la rifampicina <span class="elsevierStyleSup">6&#44;7</span>&#46; El PhaB o MAB se ha comercializado &#40;FASTPlaqueTB o PhageTeK MB&#41;&#44; para el diagn&#243;stico de la tuberculosis en muestras respiratorias&#44; aunque tambi&#233;n se ha estudiado para la realizaci&#243;n de pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos en M&#46; tuberculosis <span class="elsevierStyleSup">8-11</span>&#46; En general&#44; son t&#233;cnicas sencillas y r&#225;pidas &#40;48 h&#41;&#44; que requieren poco entrenamiento y equipamiento t&#233;cnico&#44; y son relativamente econ&#243;micas&#46; No obstante&#44; aunque han demostrado una buena especificidad&#44; se han detectado diversos problemas de sensibilidad en la mayor&#237;a de los estudios realizados <span class="elsevierStyleSup"> 8&#44;11&#44;12</span>&#46; Por ello&#44; su aplicaci&#243;n en la pr&#225;ctica diaria ha quedado un tanto postergada&#44; y tal vez podr&#237;an tener una cierta utilidad en laboratorios con recursos limitados&#44; especialmente en pa&#237;ses en desarrollo&#44; y reservarse para las muestras de pacientes con baciloscopia negativa y con una elevada sospecha cl&#237;nica de presentar tuberculosis&#46;</p><p class="elsevierStylePara">Identificaci&#243;n genot&#237;pica</p><p class="elsevierStylePara">En la actualidad&#44; la identificaci&#243;n genot&#237;pica parece ser la mejor alternativa para una identificaci&#243;n precisa y r&#225;pida de las especies micobacterianas&#46; Sus principales ventajas son&#58; una aplicaci&#243;n universal en todos los aislamientos&#44; la posible detecci&#243;n r&#225;pida &#40;directamente de las muestras o de cultivos recientes&#41;&#44; la identificaci&#243;n de microorganismos de dif&#237;cil cultivo&#44; el reconocimiento preliminar de nuevos taxones micobacterianos&#44; la reducci&#243;n del riesgo biol&#243;gico derivado de la manipulaci&#243;n de los cultivos y una adecuada relaci&#243;n coste-beneficio en los laboratorios cl&#237;nicos de nivel III o de referencia&#46; Por el contrario&#44; aparte de las contaminaciones potenciales y las limitaciones de su empleo directo en muestras cl&#237;nicas&#44; estas t&#233;cnicas actualmente no pueden sustituir completamente a la metodolog&#237;a tradicional&#46; Por otro lado&#44; su comercializaci&#243;n est&#225; relativamente poco desarrollada&#44; y algunas de estas t&#233;cnicas&#44; como la secuenciaci&#243;n&#44; requieren una inversi&#243;n inicial elevada&#46; No obstante&#44; la gran variedad de t&#233;cnicas actualmente disponibles y en constante renovaci&#243;n&#44; as&#237; como diferentes &#225;mbitos de aplicaci&#243;n&#44; ha llevado consigo la instauraci&#243;n progresiva de esta metodolog&#237;a en los laboratorios diagn&#243;sticos&#44; lo que ha supuesto un desembolso inicial asumible&#44; un escaso mantenimiento y un rendimiento &#243;ptimo&#46;</p><p class="elsevierStylePara">Sondas de &#225;cidos nucleicos</p><p class="elsevierStylePara">La gran revoluci&#243;n en la identificaci&#243;n molecular surgi&#243; hace 3 lustros&#44; mediante la introducci&#243;n de sondas comerciales de ADN &#40;AccuProbe&#41;&#44; no radiactivas&#44; que permiten identificar por hibridaci&#243;n con el ARN ribos&#243;mico micobacteriano&#44; de forma r&#225;pida &#40;2 h&#41; y espec&#237;fica&#44; el complejo M&#46; tuberculosis&#44; el grupo M&#46; avium-intracellulare&#44; M&#46; avium&#44; M&#46; intracellulare&#44; M&#46; kansasii y M&#46; gordonae&#46; Estas sondas se pueden aplicar en los cultivos obtenidos en medios tanto s&#243;lidos como l&#237;quidos&#46; Asimismo&#44; ofrecen la posibilidad de utilizarlos en medios l&#237;quidos con contenido hem&#225;tico&#44; siendo necesaria una peque&#241;a preparaci&#243;n previa mediante concentraci&#243;n y lavado con una soluci&#243;n detergente &#40;dodecil sulfato s&#243;dico y EDTA&#41;&#46;</p><p class="elsevierStylePara">Las sondas comerciales han sufrido&#44; a lo largo de los a&#241;os&#44; diferentes reformulaciones&#44; debido a diversos problemas de sensibilidad y especificidad&#44; pero han supuesto uno de los modelos de referencia en la detecci&#243;n e identificaci&#243;n micobacteriana en la pr&#225;ctica cl&#237;nica&#44; en combinaci&#243;n con los nuevos sistemas de cultivo automatizados <span class="elsevierStyleSup">13</span>&#46; Sin embargo&#44; su aplicaci&#243;n queda limitada a un grupo de micobacterias que&#44; si bien es el m&#225;s importante desde el punto de vista cl&#237;nico&#44; no deja de ser reducido&#46; Adem&#225;s&#44; requiere una orientaci&#243;n presuntiva para la elecci&#243;n de la sonda correspondiente&#44; al poder tan s&#243;lo realizar una identificaci&#243;n por prueba&#46; Esta selecci&#243;n puede realizarse de una forma sencilla&#44; aunque no exenta de errores&#44; mediante las caracter&#237;sticas fenot&#237;picas del cultivo &#40;morfolog&#237;a colonial&#44; cromogenicidad&#44; turbidez del medio l&#237;quido&#44; etc&#46;&#41; y una tinci&#243;n &#225;cido alcohol-resistente que pueda mostrar las caracter&#237;sticas bacilares individuales y asociativas como ser&#237;a&#44; por ejemplo&#44; la formaci&#243;n de cuerdas o coronas de espinas en M&#46; tuberculosis&#46; Tambi&#233;n es importante no olvidar la posibilidad de encontrarnos ante cultivos micobacterianos mixtos &#40;especialmente en los pacientes inmunodeprimidos&#41; que la sonda no es capaz de detectar&#44; lo que obliga a realizar un subcultivo&#44; a pesar de una identificaci&#243;n positiva&#44; principalmente con la sonda de ADN para el grupo M&#46; avium-intracellulare o M&#46; tuberculosis&#46;</p><p class="elsevierStylePara">Amplificaci&#243;n de secuencias de ADN espec&#237;ficas</p><p class="elsevierStylePara">Este grupo de t&#233;cnicas son en la actualidad las que presentan un mayor inter&#233;s y capacidad de desarrollo&#46; Todas ellas requieren de una amplificaci&#243;n&#44; mediante la reacci&#243;n en cadena de la polimerasa &#40;PCR&#41; u otro sistema&#44; de una zona de ADN concreta &#40;diana&#41; y la observaci&#243;n directa de los fragmentos obtenidos o de un posterior an&#225;lisis postamplificaci&#243;n m&#225;s completo mediante restricci&#243;n&#44; hibridaci&#243;n o secuenciaci&#243;n&#46; Como en toda t&#233;cnica de amplificaci&#243;n gen&#243;mica&#44; hay diversos factores que influyen en su rendimiento final y que deber&#225;n tenerse en cuenta en el proceso de interpretaci&#243;n de los resultados obtenidos&#46;</p><p class="elsevierStylePara">Elecci&#243;n de la secuencia diana que se va a amplificar</p><p class="elsevierStylePara">En las micobacterias existen regiones bien conservadas del ADN espec&#237;ficas de g&#233;nero&#44; que flanquean regiones hipervariables espec&#237;ficas de especie&#46; En la actualidad&#44; las dianas mejor estudiadas son el gen hsp65&#44; que codifica la prote&#237;na micobacteriana de 65 KDa &#40;heat shock&#41; y regiones gen&#243;micas de la subunidad ribos&#243;mica 16S&#46; No obstante&#44; existen m&#225;s zonas &#250;tiles&#44; como la regi&#243;n intergen&#233;tica 16S-23S ribosomal y los elementos de inserci&#243;n&#44; entre otras muchas&#46;</p><p class="elsevierStylePara">Preparaci&#243;n de la muestra</p><p class="elsevierStylePara">Aunque existe la interesante posibilidad de extraer el ADN directamente de la muestra cl&#237;nica&#44; lo cierto es que las t&#233;cnicas de amplificaci&#243;n han demostrado funcionar mejor a partir de cultivos&#44; s&#243;lidos o l&#237;quidos&#46; En esta situaci&#243;n&#44; la cantidad de ADN disponible es elevada y f&#225;cil de obtener&#44; y no requiere una extracci&#243;n cuidada y laboriosa&#44; como en el caso del procedimiento de fenol-cloroformo&#59; tan s&#243;lo es suficiente una lisis&#44; en sus diferentes variedades&#44; y se pueden incorporar en cualquier laboratorio diagn&#243;stico&#46; Dos m&#233;todos sencillos y pr&#225;cticos son hervir una suspensi&#243;n de las colonias micobacterianas durante 20 min&#44; o bien llevar a cabo una rotura mec&#225;nica de las c&#233;lulas mediante ultrasonidos &#40;sonicaci&#243;n&#41;&#46;</p><p class="elsevierStylePara">Amplificaci&#243;n</p><p class="elsevierStylePara">En la actualidad&#44; esta fase no supone ning&#250;n problema&#46; Un gran n&#250;mero de laboratorios cl&#237;nicos posee una m&#237;nima infraestructura para la realizaci&#243;n de t&#233;cnicas de amplificaci&#243;n de &#225;cido nucleicos y est&#225;n familiarizados con este tipo de t&#233;cnicas&#46; Las nuevas generaciones de termocicladores&#44; que utilizan tubos de reacci&#243;n de pared fina&#44; consiguen amplificar en menos de 2 h&#46; Tambi&#233;n es importante destacar que la realizaci&#243;n de la PCR a partir de cultivos conlleva la obtenci&#243;n de una gran cantidad de ADN diana que impide&#44; en gran medida&#44; la contaminaci&#243;n potencial por los amplicones&#44; a diferencia de la amplificaci&#243;n diagn&#243;stica directa en muestras cl&#237;nicas con un n&#250;mero bajo de microorganismos&#46;</p><p class="elsevierStylePara">An&#225;lisis postamplificaci&#243;n</p><p class="elsevierStylePara">Existen diversas posibilidades&#44; como se describe a continuaci&#243;n&#58;</p><p class="elsevierStylePara">&#173; Observaci&#243;n directa de los fragmentos de amplificaci&#243;n&#46; Se trata de la forma m&#225;s sencilla de constatar la presencia o la ausencia de una regi&#243;n gen&#243;mica concreta&#44; mediante la detecci&#243;n visual de un determinado fragmento de amplificaci&#243;n en un gel de agarosa&#44; tras una electroforesis convencional&#46; Esto ha demostrado ser muy &#250;til para la diferenciaci&#243;n de las especies que componen el complejo M&#46; tuberculosis y que no puede llevarse a cabo mediante otros m&#233;todos moleculares&#46; De esta forma&#44; se han dise&#241;ado algoritmos de identificaci&#243;n basados en la presencia o no de una regiones del genoma denominadas &#34;regiones de diferencia&#34; &#40;RD&#41;&#46; Aunque se han descrito 16 regiones&#44; con la amplificaci&#243;n de RD1&#44; RD9&#44; RD10 y&#44; en ocasiones&#44; a&#241;adiendo RD3&#44; RD5 y RD11&#44; m&#225;s la sensibilidad a la pirazinamida&#44; se consigue la identificaci&#243;n de M&#46; tuberculosis&#44; M&#46; bovis&#44; M&#46; bovis-BCG&#44; Mycobacterium africanum tipos I y II&#44; y M&#46; microti <span class="elsevierStyleSup">14</span>&#46; En los casos que fuera necesario diferenciar entre M&#46; bovis y M&#46; caprae&#44; se deber&#237;an seguir otras estrategias algo m&#225;s laboriosas&#44; que incluyen m&#225;s regiones gen&#243;micas &#40;p&#46; ej&#46;&#44; N-RD&#41; <span class="elsevierStyleSup">15</span> o bien sistemas comerciales que implican una hibridaci&#243;n postamplificaci&#243;n &#40;GenoType MTBC&#41; <span class="elsevierStyleSup">16</span>&#46;</p><p class="elsevierStylePara">&#173; PCR-RFLP &#40;hsp65&#41;&#46; Esta t&#233;cnica&#44; basada en la amplificaci&#243;n por PCR del gen hsp65 y su posterior an&#225;lisis del polimorfismo de los fragmentos de restricci&#243;n &#40;RFLP&#41;&#44; mediante 2 enzimas de restriccci&#243;n &#40;BstEII y HaeIII&#41;&#44; consigue una identificaci&#243;n r&#225;pida &#40;en una jornada laboral&#41;&#44; precisa y econ&#243;mica de m&#250;ltiples cepas micobacterianas en los laboratorios cl&#237;nicos <span class="elsevierStyleSup">17</span>&#46; Aunque existen otras t&#233;cnicas similares &#40;p&#46; ej&#46;&#44; PCR-RFLP del 16S-23S&#41;&#44; &#233;sta es&#44; actualmente&#44; la m&#225;s desarrollada&#44; con una aplicaci&#243;n pr&#225;ctica de indudable valor&#46; Adem&#225;s&#44; la experiencia acumulada en numerosos centros <span class="elsevierStyleSup">18-20</span>&#44; con una amplia relaci&#243;n de los polimorfismos encontrados en las distintas cepas analizadas&#44; se expone en una p&#225;gina web &#40;http&#58;&#47;&#47;app&#46;chuv&#46;ch&#47;prasite&#47;index&#46;html&#41;&#44; donde se pueden consultar los diferentes patrones obtenidos y las identificaciones correspondientes&#46; Gracias a todo ello&#44; se conoce que la t&#233;cnica es lo suficientemente discriminativa como para diferenciar las especies y las subespecies de los diversos complejos micobacterianos&#44; e incluso entre las especies consideradas cl&#225;sicamente homog&#233;neas&#44; como es el caso de M&#46; kansasii <span class="elsevierStyleSup">21</span>&#46; Sin embargo&#44; en los &#250;ltimos a&#241;os se han descrito m&#250;ltiples especies nuevas y numerosos patrones de restricci&#243;n sin una clara correlaci&#243;n identificativa&#44; que deber&#237;an revaluarse y actualizarse&#46;</p><p class="elsevierStylePara">&#173; Secuenciaci&#243;n &#40;ADN&#41; de la subunidad ribosomal 16S&#46; La secuenciaci&#243;n autom&#225;tica con iniciadores marcados con fluoresce&#237;na representa un avance sustancial&#44; que soluciona la identificaci&#243;n de muchos microorganismos que&#44; por m&#233;todos convencionales&#44; es imposible&#46; Esta t&#233;cnica representa el patr&#243;n de referencia de las identificaciones genot&#237;picas&#44; y cuenta con diversas bases de datos de f&#225;cil y libre acceso&#58; GenBank&#47;Entrez &#40;http&#58;&#47;www3&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47; entrez&#47;&#41; y Ridom 16S rDNA &#40;http&#58;&#47;www&#46;ridom&#46;de&#47;rdna&#47;&#41; <span class="elsevierStyleSup">22</span>&#46; Aunque existen diversos trabajos que propugnan su aplicaci&#243;n en la pr&#225;ctica diaria <span class="elsevierStyleSup">23-25</span>&#44; contin&#250;a siendo un m&#233;todo caro y laborioso&#44; que queda limitado a los laboratorios de referencia con el equipamiento y la experiencia necesarios&#46; No obstante&#44; los avances tecnol&#243;gicos son constantes y la mayor automatizaci&#243;n con los nuevos secuenciadores capilares o la aparici&#243;n de microchips de secuenciaci&#243;n del ADN podr&#237;an suponer una alternativa potencial en el futuro pr&#243;ximo&#46;</p><p class="elsevierStylePara">&#173; Hibridaci&#243;n en fase s&#243;lida&#46; Se trata de una tecnolog&#237;a en pleno auge&#44; basada en sondas cortas de ADN espec&#237;ficas de especie y presentadas en formatos m&#225;s o menos convencionales &#40;placas con micropocillos&#44; tiras de nitrocelulosa&#44; etc&#46;&#41;&#44; y otros de muy pr&#243;xima aplicaci&#243;n sistem&#225;tica&#44; como los chips o arrays de ADN&#46; En una sola prueba&#44; se aplicar&#237;a el producto de amplificaci&#243;n en diversas sondas de los microorganismos aislados con m&#225;s frecuencia y con significaci&#243;n cl&#237;nica&#46;</p><p class="elsevierStylePara">En la actualidad&#44; se dispone de 2 productos comerciales con tiras de nitrocelulosa&#58; INNO-LiPA y GenoType&#46; Ambos sistemas se basan en la amplificaci&#243;n de una zona gen&#233;tica concreta &#40;espacio intergen&#233;tico 16S-23S para el INNO-LiPA y el 23S rDNA para el GenoType&#41;&#46; Posteriormente&#44; se realiza la hibridaci&#243;n del producto de amplificaci&#243;n en las diferentes sondas dispuestas en una tira de nitrocelulosa&#44; que son de f&#225;cil lectura e interpretaci&#243;n&#46; En los estudios realizados se ha observado que ambos sistemas son muy similares&#44; con una sensibilidad y una especificidad buenas&#44; a partir de cultivos l&#237;quidos y s&#243;lidos&#44; y los resultados se obtienen en 5-6 h <span class="elsevierStyleSup">26-29</span>&#46; Adem&#225;s de la variedad de especies que pueden identificarse en una sola prueba&#44; otra ventaja de estos m&#233;todos es la detecci&#243;n de posibles coinfecciones por diversas especies en una misma muestra&#46; Ambos m&#233;todos identifican numerosas especies&#44; con algunas diferencias&#46;</p><p class="elsevierStylePara">En la tira del INNO-LiPA existen 16 sondas que permiten la detecci&#243;n del complejo M&#46; tuberculosis&#44; M&#46; kansasii &#40;subtipos I&#44; II y III&#44; para el resto m&#225;s M&#46; gastri&#41;&#44; M&#46; xenopi&#44; M&#46; gordonae&#44; M&#46; genavense&#44; M&#46; simiae&#44; M&#46; marinum&#47;ulcerans&#44; M&#46; celatum&#44; complejo M&#46; avium&#44; M&#46; avium&#44; M&#46; intracellulare &#40;grupo 1 y 2&#41;&#44; M&#46; scrofulaceum&#44; M&#46; malmoense&#44; M&#46; haemophilum&#44; complejo M&#46; chelonae &#40;grupo 1 y 2&#41;&#44; complejo M&#46; fortuitum y M&#46; smegmatis&#46;</p><p class="elsevierStylePara">El sistema GenoType incluye diversas tiras con diferentes niveles de identificaci&#243;n&#46; Una primera para 14 especies&#58; complejo M&#46; tuberculosis&#44; M&#46; avium&#44; M&#46; intracellulare&#44; M&#46; kansasii&#44; M&#46; fortuitum&#44; M&#46; chelonae&#44; M&#46; abscessus&#44; M&#46; peregrinum&#44; M&#46; xenopi&#44; M&#46; gordonae&#44; M&#46; scrofulaceum&#44; M&#46; malmoense&#44; Mycobaterium interjectum y M&#46; marinum&#47;ulcerans&#46; Si el aislamiento no fuese identificado&#44; existe una segunda tira para 16 identificaciones&#44; que aparte de repetir M&#46; kansasii incluye&#58; M&#46; simiae&#44; M&#46; mucogenicum&#44; M&#46; goodii&#44; M&#46; celatum&#44; M&#46; smegmatis&#44; M&#46; genavense&#44; M&#46; lentiflavum&#44; M&#46; heckeshornense&#44; M&#46; szulgai&#44; M&#46; phlei&#44; M&#46; haemophilum&#44; M&#46; ulcerans&#44; M&#46; gastri&#44; M&#46; asiaticum&#44; y M&#46; shimoidei&#46; Adem&#225;s existe una tercera tira de GenoType para identificar las diferentes especies del complejo M&#46; tuberculosis&#46; En general&#44; los principales inconvenientes de estos sistemas comerciales son su laboriosidad y su coste&#44; aunque inicialmente el GenoType es algo m&#225;s econ&#243;mico y vers&#225;til&#46;</p><p class="elsevierStylePara">Por otro lado&#44; los chips &#40;arrays&#41; de ADN son los formatos de hibridaci&#243;n en fase s&#243;lida con m&#225;s futuro&#44; por su gran disponibilidad y flexibilidad&#44; tanto para la identificaci&#243;n de especies micobacterianas como para la sensibilidad a los antimicrobianos&#44; analizando diversos mecanismos de resistencia&#46; En la actualidad&#44; existen disponibles modelos comercializados o que pueden dise&#241;arse de forma aut&#243;noma o con asesoramiento t&#233;cnico y que&#44; de forma sencilla y r&#225;pida&#44; permiten la realizaci&#243;n de numerosas hibridaciones de forma simult&#225;nea <span class="elsevierStyleSup"> 30-33</span>&#46;</p><p class="elsevierStylePara">&#173; Amplificaci&#243;n y detecci&#243;n en tiempo real&#46; En los &#250;ltimos a&#241;os&#44; se ha comenzado a utilizar&#44; con fines diagn&#243;sticos&#44; la tecnolog&#237;a de PCR en tiempo real&#46; Estos m&#233;todos se basan en la realizaci&#243;n simult&#225;nea de la amplificaci&#243;n de una zona diana concreta y su reconocimiento mediante hibridaci&#243;n que&#44; a su vez&#44; es detectada y cuantificada mediante el uso de diversos marcadores fluorog&#233;nicos&#46; Las mayores ventajas residen en su rapidez &#40;3 h&#41; y las posibilidades futuras de aplicaci&#243;n para un amplio abanico de especies&#44; as&#237; como la detecci&#243;n y la identificaci&#243;n directas a partir de muestras&#46; En la actualidad&#44; existen 2 grandes grupos en dependencia de que la fluorescencia sea inespec&#237;fica o espec&#237;fica&#46; Por otra parte&#44; se puede utilizar la PCR u otros m&#233;todos de amplificaci&#243;n&#44; como el SDA &#40;strand displacement amplification&#41;&#44; basado en la amplificaci&#243;n por desplazamiento de cadenas de ADN y su posterior detecci&#243;n mediante la transferencia de energ&#237;a fluorescente &#40;ET&#41;&#46; Entre los m&#233;todos m&#225;s conocidos est&#225;n el sistema BDProbeTec ET &#40;el primer sistema comercial&#41;&#44; las sondas LightCycler&#44; Molecular Beacons y Taqman&#44; y los cebadores Sunrise y Scorpion&#44; entre otros&#46; En general&#44; tanto el BDProbeTec ET como los dem&#225;s m&#233;todos se han focalizado&#44; desde un principio&#44; en el complejo M&#46; tuberculosis&#44; y a posteriori se ha producido un cierto desarrollo en la identificaci&#243;n de otras especies con importancia cl&#237;nica <span class="elsevierStyleSup">34-37</span>&#46; Por ello&#44; a&#250;n existe poca experiencia&#44; aunque los datos obtenidos hasta ahora son prometedores&#59; en un futuro puede suponer una alternativa real en la identificaci&#243;n micobacteriana&#46;</p><hr></hr><p class="elsevierStylePara">Correspondencia&#58; Dr&#46; F&#46; Alcaide Fern&#225;ndez de Vega&#46;<br></br> Servicio de Microbiolog&#237;a&#44; IDIBELL-Hospital Universitari de Bellvitge&#46; Departamento de Patolog&#237;a y Terap&#233;utica Experimental&#46;<br></br> Universitat de Barcelona&#46;<br></br> Feixa Llarga&#44; s&#47;n&#46; 08907 L&#39;Hospitalet de Llobregat&#46; Barcelona&#46; Espa&#241;a&#46;</p>"
    "pdfFichero" => "28v24nSupl.1a13094279pdf001.pdf"
    "tienePdf" => true
    "PalabrasClave" => array:2 [
      "es" => array:1 [
        0 => array:4 [
          "clase" => "keyword"
          "titulo" => "Palabras clave"
          "identificador" => "xpalclavsec205529"
          "palabras" => array:3 [
            0 => "Mycobacterium"
            1 => "Identificaci&#243;n"
            2 => "Nuevos m&#233;todos"
          ]
        ]
      ]
      "en" => array:1 [
        0 => array:4 [
          "clase" => "keyword"
          "titulo" => "Keywords"
          "identificador" => "xpalclavsec205530"
          "palabras" => array:3 [
            0 => "Mycobacterium"
            1 => "Identification"
            2 => "New methods"
          ]
        ]
      ]
    ]
    "tieneResumen" => true
    "resumen" => array:2 [
      "es" => array:1 [
        "resumen" => "En la actualidad&#44; se han descrito m&#225;s de 100 especies diferentes incluidas en el g&#233;nero Mycobacterium&#44; muchas de ellas con gran repercusi&#243;n cl&#237;nica&#44; ya que son los agentes causales de infecciones humanas con una elevada morbilidad y mortalidad&#46; La identificaci&#243;n de las micobacterias mediante m&#233;todos convencionales &#40;velocidad y temperatura &#243;ptima de crecimiento&#44; fotocromogenicidad&#44; morfolog&#237;a colonial y pruebas bioqu&#237;micas&#41; ha sido el est&#225;ndar en la mayor&#237;a de los laboratorios de microbiolog&#237;a cl&#237;nica&#46; Sin embargo&#44; esta identificaci&#243;n fenot&#237;pica tiene notables limitaciones&#44; ya que numerosas especies no pueden diferenciarse y el crecimiento lento de estos microorganismos hace que los resultados se demoren 2-4 semanas tras el aislamiento inicial&#46; Por ello&#44; uno de los mayores retos de los laboratorios de micobacteriolog&#237;a consiste en lograr una identificaci&#243;n r&#225;pida y precisa de todas las especies micobacterianas&#46; El objetivo de esta revisi&#243;n es realizar una breve descripci&#243;n de las nuevas alternativas en la identificaci&#243;n micobacteriana&#46; Aunque el an&#225;lisis de los l&#237;pidos de la pared celular &#40;&#225;cidos mic&#243;licos&#41; mediante cromatograf&#237;a l&#237;quida de alta presi&#243;n es una opci&#243;n buena y bien conocida&#44; los m&#233;todos de mayor inter&#233;s y desarrollo se basan en la identificaci&#243;n molecular&#44; como las sondas de &#225;cidos nucleicos y&#44; sobre todo&#44; las t&#233;cnicas de amplificaci&#243;n gen&#243;mica&#46; "
      ]
      "en" => array:1 [
        "resumen" => "Currently&#44; the genus Mycobacterium comprises more than 100 different species&#44; many of which cause significant clinical infections with high morbidity and mortality&#46; Mycobacteria identification by conventional methods &#40;rate and optimal temperature of growth&#44; pigment production&#44; colony morphology&#44; and biochemical characteristics&#41; has been the standard in most clinical microbiology laboratories&#46; However&#44; this phenotypic approach has considerable limitations&#44; since numerous species cannot be differentiated&#46; Moreover&#44; because of the slow growth of these microorganisms&#44; the results may not be available until 2-4 weeks after the initial isolation&#46; Therefore&#44; one of the most important challenges for clinical mycobacteriology laboratories is rapid and accurate identification of this variety of microorganism&#46; This review aims to briefly describe several alternative procedures for mycobacterial identification&#46; Although analysis of cell wall lipids &#40;mycolic acids&#41; by high-performance liquid chromatography is an interesting and well-known option&#44; the most promising innovation for mycobacteria identification is the use of rapid molecular methods such as nucleic acid probes and&#44; especially&#44; genomic amplification methods&#46; "
      ]
    ]
    "bibliografia" => array:2 [
      "titulo" => "Bibliograf&#237;a"
      "seccion" => array:1 [
        0 => array:1 [
          "bibliografiaReferencia" => array:37 [
            0 => array:3 [
              "identificador" => "bib1"
              "etiqueta" => "1"
              "referencia" => array:1 [
                0 => array:2 [
                  "referenciaCompleta" => "Micobacterias. En: Cercenado E, Cantón R editores. Procedimientos en microbiología clínica. Recomendaciones de la Sociedad de Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica. 9.ª ed. Madrid: SEIMC; 2005."
                  "contribucion" => array:1 [
                    0 => array:3 [
                      "titulo" => "Micobacterias&#46; En&#58; Cercenado E&#44; Cant&#243;n R editores&#46; Procedimientos en microbiolog&#237;a cl&#237;nica&#46; Recomendaciones de la Sociedad de Enfermedades Infecciosas y Microbiolog&#237;a Cl&#237;nica&#46; 9&#46;&#170; ed&#46; Madrid&#58; SEIMC&#59; 2005&#46;"
                      "idioma" => "es"
                      "autores" => array:1 [
                        0 => array:2 [
                          "etal" => false
                          "autores" => array:4 [
                            0 => "Alcaide F"
                            1 => "Esteban J"
                            2 => "Gonz&#225;lez J"
                            3 => "Palacios JJ&#46;"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                ]
              ]
            ]
            1 => array:3 [
              "identificador" => "bib2"
              "etiqueta" => "2"
              "referencia" => array:1 [
                0 => array:2 [
                  "contribucion" => array:1 [
                    0 => array:3 [
                      "titulo" => "Mycolic acid analysis by high-performance liquid chromatography for identification of Mycobacterium species&#46;"
                      "idioma" => "en"
                      "autores" => array:1 [
                        0 => array:2 [
                          "etal" => false
                          "autores" => array:2 [
                            0 => "Butler WR"
                            1 => "Guthertz LS&#46;"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                  "host" => array:1 [
                    0 => array:2 [
                      "doi" => "10.1128/CMR.14.4.704-726.2001"
                      "Revista" => array:6 [
                        "tituloSerie" => "Clin Microbiol Rev"
                        "fecha" => "2001"
                        "volumen" => "14"
                        "paginaInicial" => "704"
                        "paginaFinal" => "26"
                        "link" => array:1 [
                          0 => array:2 [
                            "url" => "https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11585782"
                            "web" => "Medline"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                ]
              ]
            ]
            2 => array:3 [
              "identificador" => "bib3"
              "etiqueta" => "3"
              "referencia" => array:1 [
                0 => array:2 [
                  "contribucion" => array:1 [
                    0 => array:3 [
                      "titulo" => "Rapid identification of mycolic acid patterns of mycobacteria by high-performance liquid chromatography using pattern recognition software and a Mycobacterium library&#46;"
                      "idioma" => "en"
                      "autores" => array:1 [
                        0 => array:2 [
                          "etal" => false
                          "autores" => array:4 [
                            0 => "Glickman SE"
                            1 => "Kilburn JO"
                            2 => "Butler WR"
                            3 => "Ramos LS&#46;"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                  "host" => array:1 [
                    0 => array:1 [
                      "Revista" => array:6 [
                        "tituloSerie" => "J Clin Microbiol"
                        "fecha" => "1994"
                        "volumen" => "32"
                        "paginaInicial" => "740"
                        "paginaFinal" => "5"
                        "link" => array:1 [
                          0 => array:2 [
                            "url" => "https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/8195387"
                            "web" => "Medline"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                ]
              ]
            ]
            3 => array:3 [
              "identificador" => "bib4"
              "etiqueta" => "4"
              "referencia" => array:1 [
                0 => array:2 [
                  "contribucion" => array:1 [
                    0 => array:3 [
                      "titulo" => "Application of the Sherlock Mycobacteria Identification System using high-performance liquid chromatography in a clinical laboratory&#46;"
                      "idioma" => "en"
                      "autores" => array:1 [
                        0 => array:2 [
                          "etal" => false
                          "autores" => array:6 [
                            0 => "Kellogg JA"
                            1 => "Bankert DA"
                            2 => "Withers GS"
                            3 => "Sweimler W"
                            4 => "Kiehn TE"
                            5 => "Pfyffer GE&#46;"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                  "host" => array:1 [
                    0 => array:2 [
                      "doi" => "10.1128/JCM.39.3.964-970.2001"
                      "Revista" => array:6 [
                        "tituloSerie" => "J Clin Microbiol"
                        "fecha" => "2001"
                        "volumen" => "39"
                        "paginaInicial" => "964"
                        "paginaFinal" => "70"
                        "link" => array:1 [
                          0 => array:2 [
                            "url" => "https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11230412"
                            "web" => "Medline"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                ]
              ]
            ]
            4 => array:3 [
              "identificador" => "bib5"
              "etiqueta" => "5"
              "referencia" => array:1 [
                0 => array:2 [
                  "contribucion" => array:1 [
                    0 => array:3 [
                      "titulo" => "The new diagnostic mycobacteriology laboratory&#46;"
                      "idioma" => "en"
                      "autores" => array:1 [
                        0 => array:2 [
                          "etal" => false
                          "autores" => array:2 [
                            0 => "Salfinger M"
                            1 => "Pfyffer GE&#46;"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                  "host" => array:1 [
                    0 => array:1 [
                      "Revista" => array:6 [
                        "tituloSerie" => "Eur J Clin Microbiol Infect Dis"
                        "fecha" => "1994"
                        "volumen" => "13"
                        "paginaInicial" => "961"
                        "paginaFinal" => "79"
                        "link" => array:1 [
                          0 => array:2 [
                            "url" => "https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/7698123"
                            "web" => "Medline"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                ]
              ]
            ]
            5 => array:3 [
              "identificador" => "bib6"
              "etiqueta" => "6"
              "referencia" => array:1 [
                0 => array:2 [
                  "contribucion" => array:1 [
                    0 => array:3 [
                      "titulo" => "Conditionally replicating luciferase reporter phages&#58; improved sensitivity for rapid detection and assessment of drug susceptibility of Mycobacterium tuberculosis&#46;"
                      "idioma" => "en"
                      "autores" => array:1 [
                        0 => array:2 [
                          "etal" => false
                          "autores" => array:7 [
                            0 => "Carriere C"
                            1 => "Riska PF"
                            2 => "Zimhony O"
                            3 => "Kriakov J"
                            4 => "Bardarov S"
                            5 => "Burns J"
                            6 => "et al&#46;"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                  "host" => array:1 [
                    0 => array:1 [
                      "Revista" => array:6 [
                        "tituloSerie" => "J Clin Microbiol"
                        "fecha" => "1997"
                        "volumen" => "35"
                        "paginaInicial" => "3232"
                        "paginaFinal" => "9"
                        "link" => array:1 [
                          0 => array:2 [
                            "url" => "https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/9399525"
                            "web" => "Medline"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                ]
              ]
            ]
            6 => array:3 [
              "identificador" => "bib7"
              "etiqueta" => "7"
              "referencia" => array:1 [
                0 => array:2 [
                  "contribucion" => array:1 [
                    0 => array:3 [
                      "titulo" => "Rapid assessment of drug susceptibilities of Mycobacterium tuberculosis by means of luciferase reporter phages&#46;"
                      "idioma" => "en"
                      "autores" => array:1 [
                        0 => array:2 [
                          "etal" => false
                          "autores" => array:7 [
                            0 => "Jacobs WR&#46;J"
                            1 => "Barletta RG"
                            2 => "Udani R"
                            3 => "Chan J"
                            4 => "Kalkut G"
                            5 => "Sosne G"
                            6 => "et al&#46;"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                  "host" => array:1 [
                    0 => array:1 [
                      "Revista" => array:6 [
                        "tituloSerie" => "Science"
                        "fecha" => "1993"
                        "volumen" => "260"
                        "paginaInicial" => "819"
                        "paginaFinal" => "22"
                        "link" => array:1 [
                          0 => array:2 [
                            "url" => "https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/8484123"
                            "web" => "Medline"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                ]
              ]
            ]
            7 => array:3 [
              "identificador" => "bib8"
              "etiqueta" => "8"
              "referencia" => array:1 [
                0 => array:2 [
                  "contribucion" => array:1 [
                    0 => array:3 [
                      "titulo" => "Usefulness of a new mycobacteriophage-based technique for rapid diagnosis of pulmonary tuberculosis&#46;"
                      "idioma" => "en"
                      "autores" => array:1 [
                        0 => array:2 [
                          "etal" => false
                          "autores" => array:7 [
                            0 => "Alcaide F"
                            1 => "Gali N"
                            2 => "Dom&#237;nguez J"
                            3 => "Berlanga P"
                            4 => "Blanco S"
                            5 => "Orus P"
                            6 => "et al&#46;"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                  "host" => array:1 [
                    0 => array:1 [
                      "Revista" => array:6 [
                        "tituloSerie" => "J Clin Microbiol"
                        "fecha" => "2003"
                        "volumen" => "41"
                        "paginaInicial" => "2867"
                        "paginaFinal" => "71"
                        "link" => array:1 [
                          0 => array:2 [
                            "url" => "https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12843014"
                            "web" => "Medline"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                ]
              ]
            ]
            8 => array:3 [
              "identificador" => "bib9"
              "etiqueta" => "9"
              "referencia" => array:1 [
                0 => array:2 [
                  "contribucion" => array:1 [
                    0 => array:3 [
                      "titulo" => "Evaluation of a bacteriophage-based assay &#40;phage amplified biologically assay&#41; as a rapid screen for resistance to isoniazid&#44; ethambutol&#44; streptomycin&#44; pyrazinamide&#44; and ciprofloxacin among clinical isolates of Mycobacterium tuberculosis&#46;"
                      "idioma" => "en"
                      "autores" => array:1 [
                        0 => array:2 [
                          "etal" => false
                          "autores" => array:3 [
                            0 => "Eltringham IJ"
                            1 => "Wilson SM"
                            2 => "Drobniewski FA&#46;"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                  "host" => array:1 [
                    0 => array:1 [
                      "Revista" => array:6 [
                        "tituloSerie" => "J Clin Microbiol"
                        "fecha" => "1999"
                        "volumen" => "37"
                        "paginaInicial" => "3528"
                        "paginaFinal" => "32"
                        "link" => array:1 [
                          0 => array:2 [
                            "url" => "https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10523547"
                            "web" => "Medline"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                ]
              ]
            ]
            9 => array:3 [
              "identificador" => "bib10"
              "etiqueta" => "10"
              "referencia" => array:1 [
                0 => array:2 [
                  "contribucion" => array:1 [
                    0 => array:3 [
                      "titulo" => "Use of a mycobacteriophage-based assay for rapid assessment of susceptibilities of Mycobacterium tuberculosis isolates to isoniazid and influence of resistance level on assay performance&#46;"
                      "idioma" => "en"
                      "autores" => array:1 [
                        0 => array:2 [
                          "etal" => false
                          "autores" => array:7 [
                            0 => "Gali N"
                            1 => "Dom&#237;nguez J"
                            2 => "Blanco S"
                            3 => "Prat C"
                            4 => "Alcaide F"
                            5 => "Coll P"
                            6 => "et al&#46;"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                  "host" => array:1 [
                    0 => array:2 [
                      "doi" => "10.1128/JCM.44.1.201-205.2006"
                      "Revista" => array:6 [
                        "tituloSerie" => "J Clin Microbiol"
                        "fecha" => "2006"
                        "volumen" => "44"
                        "paginaInicial" => "201"
                        "paginaFinal" => "5"
                        "link" => array:1 [
                          0 => array:2 [
                            "url" => "https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16390970"
                            "web" => "Medline"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                ]
              ]
            ]
            10 => array:3 [
              "identificador" => "bib11"
              "etiqueta" => "11"
              "referencia" => array:1 [
                0 => array:2 [
                  "contribucion" => array:1 [
                    0 => array:3 [
                      "titulo" => "Development of a bacteriophage phage replication assay for diagnosis of pulmonary tuberculosis&#46;"
                      "idioma" => "en"
                      "autores" => array:1 [
                        0 => array:2 [
                          "etal" => false
                          "autores" => array:5 [
                            0 => "McNerney R"
                            1 => "Kambashi BS"
                            2 => "Kinkese J"
                            3 => "Tembwe R"
                            4 => "Godfrey-Faussett P&#46;"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                  "host" => array:1 [
                    0 => array:1 [
                      "Revista" => array:6 [
                        "tituloSerie" => "J Clin Microbiol"
                        "fecha" => "2004"
                        "volumen" => "42"
                        "paginaInicial" => "2115"
                        "paginaFinal" => "20"
                        "link" => array:1 [
                          0 => array:2 [
                            "url" => "https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15131178"
                            "web" => "Medline"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                ]
              ]
            ]
            11 => array:3 [
              "identificador" => "bib12"
              "etiqueta" => "12"
              "referencia" => array:1 [
                0 => array:2 [
                  "contribucion" => array:1 [
                    0 => array:3 [
                      "titulo" => "Bacteriophage- based tests for the detection of Mycobacterium tuberculosis in clinical specimens&#58; a systematic review and meta- analysis&#46;"
                      "idioma" => "en"
                      "autores" => array:1 [
                        0 => array:2 [
                          "etal" => false
                          "autores" => array:5 [
                            0 => "Kalantri S"
                            1 => "Pai M"
                            2 => "Pascopella L"
                            3 => "Riley L"
                            4 => "Reingold A&#46;"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                  "host" => array:1 [
                    0 => array:2 [
                      "doi" => "10.1186/1471-2334-5-59"
                      "Revista" => array:5 [
                        "tituloSerie" => "BMC Infect Dis"
                        "fecha" => "2005"
                        "volumen" => "5"
                        "paginaInicial" => "59"
                        "link" => array:1 [
                          0 => array:2 [
                            "url" => "https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16022735"
                            "web" => "Medline"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                ]
              ]
            ]
            12 => array:3 [
              "identificador" => "bib13"
              "etiqueta" => "13"
              "referencia" => array:1 [
                0 => array:2 [
                  "referenciaCompleta" => "Mycobacterium: Phenotypic and genotypic identification. In: Murray PR, Baron EJ, Jorgensen JH, Pfaller MA, Yolken RH, editors. Manual of clinical microbiology. Washington: ASM Press; 2003. p. 560-84."
                  "contribucion" => array:1 [
                    0 => array:3 [
                      "titulo" => "Mycobacterium&#58; Phenotypic and genotypic identification&#46; In&#58; Murray PR&#44; Baron EJ&#44; Jorgensen JH&#44; Pfaller MA&#44; Yolken RH&#44; editors&#46; Manual of clinical microbiology&#46; Washington&#58; ASM Press&#59; 2003&#46; p&#46; 560-84&#46;"
                      "idioma" => "en"
                      "autores" => array:1 [
                        0 => array:2 [
                          "etal" => false
                          "autores" => array:4 [
                            0 => "Vincent V"
                            1 => "Brown-Elliot BA"
                            2 => "Jost KC Jr"
                            3 => "Wallace RJ Jr&#46;"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                ]
              ]
            ]
            13 => array:3 [
              "identificador" => "bib14"
              "etiqueta" => "14"
              "referencia" => array:1 [
                0 => array:2 [
                  "contribucion" => array:1 [
                    0 => array:3 [
                      "titulo" => "Rapid and simple approach for identification of Mycobacterium tuberculosis complex isolates by PCR-based genomic deletion analysis&#46;"
                      "idioma" => "en"
                      "autores" => array:1 [
                        0 => array:2 [
                          "etal" => false
                          "autores" => array:7 [
                            0 => "Parsons LM"
                            1 => "Brosch R"
                            2 => "Cole ST"
                            3 => "Somoskovi A"
                            4 => "Loder A"
                            5 => "Bretzel G"
                            6 => "et al&#46;"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                  "host" => array:1 [
                    0 => array:1 [
                      "Revista" => array:6 [
                        "tituloSerie" => "J Clin Microbiol"
                        "fecha" => "2002"
                        "volumen" => "40"
                        "paginaInicial" => "2339"
                        "paginaFinal" => "45"
                        "link" => array:1 [
                          0 => array:2 [
                            "url" => "https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12089245"
                            "web" => "Medline"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                ]
              ]
            ]
            14 => array:3 [
              "identificador" => "bib15"
              "etiqueta" => "15"
              "referencia" => array:1 [
                0 => array:2 [
                  "contribucion" => array:1 [
                    0 => array:3 [
                      "titulo" => "Genomic deletions suggest a phylogeny for the Mycobacterium tuberculosis complex&#46;"
                      "idioma" => "en"
                      "autores" => array:1 [
                        0 => array:2 [
                          "etal" => false
                          "autores" => array:5 [
                            0 => "Mostowy S"
                            1 => "Cousins D"
                            2 => "Brinkman J"
                            3 => "Aranaz A"
                            4 => "Behr MA&#46;"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                  "host" => array:1 [
                    0 => array:2 [
                      "doi" => "10.1086/341068"
                      "Revista" => array:6 [
                        "tituloSerie" => "J Infect Dis"
                        "fecha" => "2002"
                        "volumen" => "186"
                        "paginaInicial" => "74"
                        "paginaFinal" => "80"
                        "link" => array:1 [
                          0 => array:2 [
                            "url" => "https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12089664"
                            "web" => "Medline"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                ]
              ]
            ]
            15 => array:3 [
              "identificador" => "bib16"
              "etiqueta" => "16"
              "referencia" => array:1 [
                0 => array:2 [
                  "contribucion" => array:1 [
                    0 => array:3 [
                      "titulo" => "Evaluation of genotype MTBC assay for differentiation of clinical Mycobacterium tuberculosis complex isolates&#46;"
                      "idioma" => "en"
                      "autores" => array:1 [
                        0 => array:2 [
                          "etal" => false
                          "autores" => array:4 [
                            0 => "Richter E"
                            1 => "Weizenegger M"
                            2 => "Rusch-Gerdes S"
                            3 => "Niemann S&#46;"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                  "host" => array:1 [
                    0 => array:1 [
                      "Revista" => array:6 [
                        "tituloSerie" => "J Clin Microbiol"
                        "fecha" => "2003"
                        "volumen" => "41"
                        "paginaInicial" => "2672"
                        "paginaFinal" => "5"
                        "link" => array:1 [
                          0 => array:2 [
                            "url" => "https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12791901"
                            "web" => "Medline"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                ]
              ]
            ]
            16 => array:3 [
              "identificador" => "bib17"
              "etiqueta" => "17"
              "referencia" => array:1 [
                0 => array:2 [
                  "contribucion" => array:1 [
                    0 => array:3 [
                      "titulo" => "Rapid identification of mycobacteria to the species level by polymerase chain reaction and restriction enzyme analysis&#46;"
                      "idioma" => "en"
                      "autores" => array:1 [
                        0 => array:2 [
                          "etal" => false
                          "autores" => array:6 [
                            0 => "Telenti A"
                            1 => "Marchesi F"
                            2 => "Balz M"
                            3 => "Bally F"
                            4 => "Bottger EC"
                            5 => "Bodmer T&#46;"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                  "host" => array:1 [
                    0 => array:1 [
                      "Revista" => array:6 [
                        "tituloSerie" => "J Clin Microbiol"
                        "fecha" => "1993"
                        "volumen" => "31"
                        "paginaInicial" => "175"
                        "paginaFinal" => "8"
                        "link" => array:1 [
                          0 => array:2 [
                            "url" => "https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/8381805"
                            "web" => "Medline"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                ]
              ]
            ]
            17 => array:3 [
              "identificador" => "bib18"
              "etiqueta" => "18"
              "referencia" => array:1 [
                0 => array:2 [
                  "contribucion" => array:1 [
                    0 => array:3 [
                      "titulo" => "Novel allelic variants of Mycobacteria isolated in Brazil as determined by PCR-restriction enzyme analysis of hsp65&#46;"
                      "idioma" => "en"
                      "autores" => array:1 [
                        0 => array:2 [
                          "etal" => false
                          "autores" => array:7 [
                            0 => "Da Silva Rocha A"
                            1 => "Werneck Barreto AM"
                            2 => "As Campos CE"
                            3 => "Villas-Boas da Silva M"
                            4 => "Fonseca L"
                            5 => "Saad MH"
                            6 => "et al&#46;"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                  "host" => array:1 [
                    0 => array:1 [
                      "Revista" => array:6 [
                        "tituloSerie" => "J Clin Microbiol"
                        "fecha" => "2002"
                        "volumen" => "40"
                        "paginaInicial" => "4191"
                        "paginaFinal" => "6"
                        "link" => array:1 [
                          0 => array:2 [
                            "url" => "https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12409396"
                            "web" => "Medline"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                ]
              ]
            ]
            18 => array:3 [
              "identificador" => "bib19"
              "etiqueta" => "19"
              "referencia" => array:1 [
                0 => array:2 [
                  "contribucion" => array:1 [
                    0 => array:3 [
                      "titulo" => "Rapid identification of mycobacteria to species level by PCR-restriction fragment length polymorphism analysis of the hsp65 gene and proposition of an algorithm to differentiate 34 mycobacterial species&#46;"
                      "idioma" => "en"
                      "autores" => array:1 [
                        0 => array:2 [
                          "etal" => false
                          "autores" => array:3 [
                            0 => "Devallois A"
                            1 => "Goh KS"
                            2 => "Rastogi N&#46;"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                  "host" => array:1 [
                    0 => array:1 [
                      "Revista" => array:6 [
                        "tituloSerie" => "J Clin Microbiol"
                        "fecha" => "1997"
                        "volumen" => "35"
                        "paginaInicial" => "2969"
                        "paginaFinal" => "73"
                        "link" => array:1 [
                          0 => array:2 [
                            "url" => "https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/9350770"
                            "web" => "Medline"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                ]
              ]
            ]
            19 => array:3 [
              "identificador" => "bib20"
              "etiqueta" => "20"
              "referencia" => array:1 [
                0 => array:2 [
                  "contribucion" => array:1 [
                    0 => array:3 [
                      "titulo" => "Multicenter evaluation of mycobacteria identification by PCR restriction enzyme analysis in laboratories from Latin America and the Caribbean&#46;"
                      "idioma" => "en"
                      "autores" => array:1 [
                        0 => array:2 [
                          "etal" => false
                          "autores" => array:7 [
                            0 => "Leao SC"
                            1 => "Bernardelli A"
                            2 => "Cataldi A"
                            3 => "Zumarraga M"
                            4 => "Robledo J"
                            5 => "Realpe T"
                            6 => "et al&#46;"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                  "host" => array:1 [
                    0 => array:2 [
                      "doi" => "10.1016/j.mimet.2004.11.015"
                      "Revista" => array:6 [
                        "tituloSerie" => "J Microbiol Methods"
                        "fecha" => "2005"
                        "volumen" => "61"
                        "paginaInicial" => "193"
                        "paginaFinal" => "9"
                        "link" => array:1 [
                          0 => array:2 [
                            "url" => "https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15722145"
                            "web" => "Medline"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                ]
              ]
            ]
            20 => array:3 [
              "identificador" => "bib21"
              "etiqueta" => "21"
              "referencia" => array:1 [
                0 => array:2 [
                  "contribucion" => array:1 [
                    0 => array:3 [
                      "titulo" => "Heterogeneity and clonality among isolates of Mycobacterium kansasii&#58; implications for epidemiological and pathogenicity studies&#46;"
                      "idioma" => "en"
                      "autores" => array:1 [
                        0 => array:2 [
                          "etal" => false
                          "autores" => array:7 [
                            0 => "Alcaide F"
                            1 => "Richter I"
                            2 => "Bernasconi C"
                            3 => "Springer B"
                            4 => "Hagenau C"
                            5 => "Schulze-Robbecke R"
                            6 => "et al&#46;"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                  "host" => array:1 [
                    0 => array:1 [
                      "Revista" => array:6 [
                        "tituloSerie" => "J Clin Microbiol"
                        "fecha" => "1997"
                        "volumen" => "35"
                        "paginaInicial" => "1959"
                        "paginaFinal" => "64"
                        "link" => array:1 [
                          0 => array:2 [
                            "url" => "https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/9230363"
                            "web" => "Medline"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                ]
              ]
            ]
            21 => array:3 [
              "identificador" => "bib22"
              "etiqueta" => "22"
              "referencia" => array:1 [
                0 => array:2 [
                  "contribucion" => array:1 [
                    0 => array:3 [
                      "titulo" => "RIDOM&#58; comprehensive and public sequence database for identification of Mycobacterium species&#46;"
                      "idioma" => "en"
                      "autores" => array:1 [
                        0 => array:2 [
                          "etal" => false
                          "autores" => array:7 [
                            0 => "Harmsen D"
                            1 => "Dostal S"
                            2 => "Roth A"
                            3 => "Niemann S"
                            4 => "Rothganger J"
                            5 => "Sammeth M"
                            6 => "et al&#46;"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                  "host" => array:1 [
                    0 => array:2 [
                      "doi" => "10.1186/1471-2334-3-26"
                      "Revista" => array:5 [
                        "tituloSerie" => "BMC Infect Dis"
                        "fecha" => "2003"
                        "volumen" => "3"
                        "paginaInicial" => "26"
                        "link" => array:1 [
                          0 => array:2 [
                            "url" => "https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/14611664"
                            "web" => "Medline"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                ]
              ]
            ]
            22 => array:3 [
              "identificador" => "bib23"
              "etiqueta" => "23"
              "referencia" => array:1 [
                0 => array:2 [
                  "contribucion" => array:1 [
                    0 => array:3 [
                      "titulo" => "Conventional methods versus 16S ribosomal DNA sequencing for identification of nontuberculous mycobacteria&#58; cost analysis&#46;"
                      "idioma" => "en"
                      "autores" => array:1 [
                        0 => array:2 [
                          "etal" => false
                          "autores" => array:5 [
                            0 => "Cook VJ"
                            1 => "Turenne CY"
                            2 => "Wolfe J"
                            3 => "Pauls R"
                            4 => "Kabani A&#46;"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                  "host" => array:1 [
                    0 => array:1 [
                      "Revista" => array:6 [
                        "tituloSerie" => "J Clin Microbiol"
                        "fecha" => "2003"
                        "volumen" => "41"
                        "paginaInicial" => "1010"
                        "paginaFinal" => "5"
                        "link" => array:1 [
                          0 => array:2 [
                            "url" => "https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12624023"
                            "web" => "Medline"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                ]
              ]
            ]
            23 => array:3 [
              "identificador" => "bib24"
              "etiqueta" => "24"
              "referencia" => array:1 [
                0 => array:2 [
                  "contribucion" => array:1 [
                    0 => array:3 [
                      "titulo" => "Evaluation of the MicroSeq system for identification of mycobacteria by 16S ribosomal DNA sequencing and its integration into a routine clinical mycobacteriology laboratory&#46;"
                      "idioma" => "en"
                      "autores" => array:1 [
                        0 => array:2 [
                          "etal" => false
                          "autores" => array:4 [
                            0 => "Hall L"
                            1 => "Doerr KA"
                            2 => "Wohlfiel SL"
                            3 => "Roberts GD&#46;"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                  "host" => array:1 [
                    0 => array:1 [
                      "Revista" => array:6 [
                        "tituloSerie" => "J Clin Microbiol"
                        "fecha" => "2003"
                        "volumen" => "41"
                        "paginaInicial" => "1447"
                        "paginaFinal" => "53"
                        "link" => array:1 [
                          0 => array:2 [
                            "url" => "https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12682128"
                            "web" => "Medline"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                ]
              ]
            ]
            24 => array:3 [
              "identificador" => "bib25"
              "etiqueta" => "25"
              "referencia" => array:1 [
                0 => array:2 [
                  "contribucion" => array:1 [
                    0 => array:3 [
                      "titulo" => "Genotypic identification of mycobacteria by nucleic acid sequence determination&#58; report of a 2-year experience in a clinical laboratory&#46;"
                      "idioma" => "en"
                      "autores" => array:1 [
                        0 => array:2 [
                          "etal" => false
                          "autores" => array:7 [
                            0 => "Kirschner P"
                            1 => "Springer B"
                            2 => "Vogel U"
                            3 => "Meier A"
                            4 => "Drede A"
                            5 => "Kiekenbeck M"
                            6 => "et al&#46;"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                  "host" => array:1 [
                    0 => array:1 [
                      "Revista" => array:6 [
                        "tituloSerie" => "J Clin Microbiol"
                        "fecha" => "1993"
                        "volumen" => "31"
                        "paginaInicial" => "2882"
                        "paginaFinal" => "9"
                        "link" => array:1 [
                          0 => array:2 [
                            "url" => "https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/7505291"
                            "web" => "Medline"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                ]
              ]
            ]
            25 => array:3 [
              "identificador" => "bib26"
              "etiqueta" => "26"
              "referencia" => array:1 [
                0 => array:2 [
                  "contribucion" => array:1 [
                    0 => array:3 [
                      "titulo" => "Use of INNO-LIPA assay for rapid identification of mycobacteria&#46;"
                      "idioma" => "en"
                      "autores" => array:1 [
                        0 => array:2 [
                          "etal" => false
                          "autores" => array:7 [
                            0 => "Lebrun L"
                            1 => "Gonullu N"
                            2 => "Boutros N"
                            3 => "Davoust A"
                            4 => "Guibert M"
                            5 => "Ingrand D"
                            6 => "et al&#46;"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                  "host" => array:1 [
                    0 => array:1 [
                      "Revista" => array:6 [
                        "tituloSerie" => "Diagn Microbiol Infect Dis"
                        "fecha" => "2003"
                        "volumen" => "46"
                        "paginaInicial" => "151"
                        "paginaFinal" => "3"
                        "link" => array:1 [
                          0 => array:2 [
                            "url" => "https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12812720"
                            "web" => "Medline"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                ]
              ]
            ]
            26 => array:3 [
              "identificador" => "bib27"
              "etiqueta" => "27"
              "referencia" => array:1 [
                0 => array:2 [
                  "contribucion" => array:1 [
                    0 => array:3 [
                      "titulo" => "Comparative evaluation of the new version of the INNO-LiPA Mycobacteria and genotype Mycobacterium assays for identification of Mycobacterium species from MB&#47;BacT liquid cultures artificially inoculated with mycobacterial strains&#46;"
                      "idioma" => "en"
                      "autores" => array:1 [
                        0 => array:2 [
                          "etal" => false
                          "autores" => array:7 [
                            0 => "Padilla E"
                            1 => "Gonz&#225;lez V"
                            2 => "Manterola JM"
                            3 => "Perez A"
                            4 => "Quesada MD"
                            5 => "Gordillo S"
                            6 => "et al&#46;"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                  "host" => array:1 [
                    0 => array:2 [
                      "doi" => "10.1128/JCM.42.7.3083-3088.2004"
                      "Revista" => array:6 [
                        "tituloSerie" => "J Clin Microbiol"
                        "fecha" => "2004"
                        "volumen" => "42"
                        "paginaInicial" => "3083"
                        "paginaFinal" => "8"
                        "link" => array:1 [
                          0 => array:2 [
                            "url" => "https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15243064"
                            "web" => "Medline"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                ]
              ]
            ]
            27 => array:3 [
              "identificador" => "bib28"
              "etiqueta" => "28"
              "referencia" => array:1 [
                0 => array:2 [
                  "contribucion" => array:1 [
                    0 => array:3 [
                      "titulo" => "Evaluation of the GenoType Mycobacterium assay for identification of mycobacterial species from cultures&#46;"
                      "idioma" => "en"
                      "autores" => array:1 [
                        0 => array:2 [
                          "etal" => false
                          "autores" => array:3 [
                            0 => "Richter E"
                            1 => "Rusch-Gerdes S"
                            2 => "Hillemann D&#46;"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                  "host" => array:1 [
                    0 => array:2 [
                      "doi" => "10.1128/JCM.44.5.1769-1775.2006"
                      "Revista" => array:6 [
                        "tituloSerie" => "J Clin Microbiol"
                        "fecha" => "2006"
                        "volumen" => "44"
                        "paginaInicial" => "1769"
                        "paginaFinal" => "75"
                        "link" => array:1 [
                          0 => array:2 [
                            "url" => "https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16672405"
                            "web" => "Medline"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                ]
              ]
            ]
            28 => array:3 [
              "identificador" => "bib29"
              "etiqueta" => "29"
              "referencia" => array:1 [
                0 => array:2 [
                  "contribucion" => array:1 [
                    0 => array:3 [
                      "titulo" => "Rapid identification of Mycobacteria to the species level using INNO-LiPA Mycobacteria&#44; a reverse hybridization assay&#46;"
                      "idioma" => "en"
                      "autores" => array:1 [
                        0 => array:2 [
                          "etal" => false
                          "autores" => array:7 [
                            0 => "Suffys PN"
                            1 => "Da Silva RA"
                            2 => "De Oliveira M"
                            3 => "Campos CE"
                            4 => "Barreto AM"
                            5 => "Portaels F"
                            6 => "et al&#46;"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                  "host" => array:1 [
                    0 => array:2 [
                      "doi" => "10.1128/JCM.39.12.4477-4482.2001"
                      "Revista" => array:6 [
                        "tituloSerie" => "J Clin Microbiol"
                        "fecha" => "2001"
                        "volumen" => "39"
                        "paginaInicial" => "4477"
                        "paginaFinal" => "82"
                        "link" => array:1 [
                          0 => array:2 [
                            "url" => "https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11724865"
                            "web" => "Medline"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                ]
              ]
            ]
            29 => array:3 [
              "identificador" => "bib30"
              "etiqueta" => "30"
              "referencia" => array:1 [
                0 => array:2 [
                  "contribucion" => array:1 [
                    0 => array:3 [
                      "titulo" => "Detection and identification of Mycobacterium species isolates by DNA microarray&#46;"
                      "idioma" => "en"
                      "autores" => array:1 [
                        0 => array:2 [
                          "etal" => false
                          "autores" => array:6 [
                            0 => "Fukushima M"
                            1 => "Kakinuma K"
                            2 => "Hayashi H"
                            3 => "Nagai H"
                            4 => "Ito K"
                            5 => "Kawaguchi R&#46;"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                  "host" => array:1 [
                    0 => array:1 [
                      "Revista" => array:6 [
                        "tituloSerie" => "J Clin Microbiol"
                        "fecha" => "2003"
                        "volumen" => "41"
                        "paginaInicial" => "2605"
                        "paginaFinal" => "15"
                        "link" => array:1 [
                          0 => array:2 [
                            "url" => "https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12791887"
                            "web" => "Medline"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                ]
              ]
            ]
            30 => array:3 [
              "identificador" => "bib31"
              "etiqueta" => "31"
              "referencia" => array:1 [
                0 => array:2 [
                  "contribucion" => array:1 [
                    0 => array:3 [
                      "titulo" => "Simultaneous genotyping and species identification using hybridization pattern recognition analysis of generic Mycobacterium DNA arrays&#46;"
                      "idioma" => "en"
                      "autores" => array:1 [
                        0 => array:2 [
                          "etal" => false
                          "autores" => array:7 [
                            0 => "Gingeras TR"
                            1 => "Ghandour G"
                            2 => "Wang E"
                            3 => "Berno A"
                            4 => "Small PM"
                            5 => "Drobniewski F"
                            6 => "et al&#46;"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                  "host" => array:1 [
                    0 => array:1 [
                      "Revista" => array:6 [
                        "tituloSerie" => "Genome Res"
                        "fecha" => "1998"
                        "volumen" => "8"
                        "paginaInicial" => "435"
                        "paginaFinal" => "48"
                        "link" => array:1 [
                          0 => array:2 [
                            "url" => "https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/9582189"
                            "web" => "Medline"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                ]
              ]
            ]
            31 => array:3 [
              "identificador" => "bib32"
              "etiqueta" => "32"
              "referencia" => array:1 [
                0 => array:2 [
                  "contribucion" => array:1 [
                    0 => array:3 [
                      "titulo" => "Detection and genotyping of Mycobacterium species from clinical isolates and specimens by oligonucleotide array&#46;"
                      "idioma" => "en"
                      "autores" => array:1 [
                        0 => array:2 [
                          "etal" => false
                          "autores" => array:7 [
                            0 => "Park H"
                            1 => "Jang H"
                            2 => "Song E"
                            3 => "Chang CL"
                            4 => "Lee M"
                            5 => "Jeong S"
                            6 => "et al&#46;"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                  "host" => array:1 [
                    0 => array:2 [
                      "doi" => "10.1128/JCM.43.4.1782-1788.2005"
                      "Revista" => array:6 [
                        "tituloSerie" => "J Clin Microbiol"
                        "fecha" => "2005"
                        "volumen" => "43"
                        "paginaInicial" => "1782"
                        "paginaFinal" => "8"
                        "link" => array:1 [
                          0 => array:2 [
                            "url" => "https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15814999"
                            "web" => "Medline"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                ]
              ]
            ]
            32 => array:3 [
              "identificador" => "bib33"
              "etiqueta" => "33"
              "referencia" => array:1 [
                0 => array:2 [
                  "contribucion" => array:1 [
                    0 => array:3 [
                      "titulo" => "Mycobacterium species identification and rifampin resistance testing with high-density DNA probe arrays&#46;"
                      "idioma" => "en"
                      "autores" => array:1 [
                        0 => array:2 [
                          "etal" => false
                          "autores" => array:7 [
                            0 => "Troesch A"
                            1 => "Nguyen H"
                            2 => "Miyada CG"
                            3 => "Desvarenne S"
                            4 => "Gingeras TR"
                            5 => "Kaplan PM"
                            6 => "et al&#46;"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                  "host" => array:1 [
                    0 => array:1 [
                      "Revista" => array:6 [
                        "tituloSerie" => "J Clin Microbiol"
                        "fecha" => "1999"
                        "volumen" => "37"
                        "paginaInicial" => "49"
                        "paginaFinal" => "55"
                        "link" => array:1 [
                          0 => array:2 [
                            "url" => "https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/9854063"
                            "web" => "Medline"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                ]
              ]
            ]
            33 => array:3 [
              "identificador" => "bib34"
              "etiqueta" => "34"
              "referencia" => array:1 [
                0 => array:2 [
                  "contribucion" => array:1 [
                    0 => array:3 [
                      "titulo" => "Detection and quantification of Mycobacterium leprae in tissue samples by real-time PCR&#46;"
                      "idioma" => "en"
                      "autores" => array:1 [
                        0 => array:2 [
                          "etal" => false
                          "autores" => array:5 [
                            0 => "Kramme S"
                            1 => "Bretzel G"
                            2 => "Panning M"
                            3 => "Kawuma J"
                            4 => "Drosten C&#46;"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                  "host" => array:1 [
                    0 => array:1 [
                      "Revista" => array:5 [
                        "tituloSerie" => "Med Microbiol Immunol (Berl)"
                        "fecha" => "2004"
                        "volumen" => "193"
                        "paginaInicial" => "189"
                        "paginaFinal" => "93"
                      ]
                    ]
                  ]
                ]
              ]
            ]
            34 => array:3 [
              "identificador" => "bib35"
              "etiqueta" => "35"
              "referencia" => array:1 [
                0 => array:2 [
                  "contribucion" => array:1 [
                    0 => array:3 [
                      "titulo" => "Development and application of real-time PCR assay for quantification of Mycobacterium ulcerans DNA&#46;"
                      "idioma" => "en"
                      "autores" => array:1 [
                        0 => array:2 [
                          "etal" => false
                          "autores" => array:5 [
                            0 => "Rondini S"
                            1 => "Mensah-Quainoo E"
                            2 => "Troll H"
                            3 => "Bodmer T"
                            4 => "Pluschke G&#46;"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                  "host" => array:1 [
                    0 => array:1 [
                      "Revista" => array:6 [
                        "tituloSerie" => "J Clin Microbiol"
                        "fecha" => "2003"
                        "volumen" => "41"
                        "paginaInicial" => "4231"
                        "paginaFinal" => "7"
                        "link" => array:1 [
                          0 => array:2 [
                            "url" => "https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12958250"
                            "web" => "Medline"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                ]
              ]
            ]
            35 => array:3 [
              "identificador" => "bib36"
              "etiqueta" => "36"
              "referencia" => array:1 [
                0 => array:2 [
                  "contribucion" => array:1 [
                    0 => array:3 [
                      "titulo" => "Clinical evaluation of the semiautomated BDProbeTec ET System for the detection of Mycobacterium tuberculosis in respiratory and nonrespiratory specimens&#46;"
                      "idioma" => "en"
                      "autores" => array:1 [
                        0 => array:2 [
                          "etal" => false
                          "autores" => array:2 [
                            0 => "Rusch-Gerdes S"
                            1 => "Richter E&#46;"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                  "host" => array:1 [
                    0 => array:2 [
                      "doi" => "10.1016/j.diagmicrobio.2003.10.015"
                      "Revista" => array:6 [
                        "tituloSerie" => "Diagn Microbiol Infect Dis"
                        "fecha" => "2004"
                        "volumen" => "48"
                        "paginaInicial" => "265"
                        "paginaFinal" => "70"
                        "link" => array:1 [
                          0 => array:2 [
                            "url" => "https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15062919"
                            "web" => "Medline"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                ]
              ]
            ]
            36 => array:3 [
              "identificador" => "bib37"
              "etiqueta" => "37"
              "referencia" => array:1 [
                0 => array:2 [
                  "contribucion" => array:1 [
                    0 => array:3 [
                      "titulo" => "Rapid detection and species identification of Mycobacterium spp&#46; using real-time PCR and DNA-Microarray&#46;"
                      "idioma" => "en"
                      "autores" => array:1 [
                        0 => array:2 [
                          "etal" => false
                          "autores" => array:5 [
                            0 => "Tobler NE"
                            1 => "Pfunder M"
                            2 => "Herzog K"
                            3 => "Frey JE"
                            4 => "Altwegg M&#46;"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                  "host" => array:1 [
                    0 => array:2 [
                      "doi" => "10.1016/j.mimet.2005.10.016"
                      "Revista" => array:6 [
                        "tituloSerie" => "J Microbiol Methods"
                        "fecha" => "2006"
                        "volumen" => "66"
                        "paginaInicial" => "116"
                        "paginaFinal" => "24"
                        "link" => array:1 [
                          0 => array:2 [
                            "url" => "https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16360893"
                            "web" => "Medline"
                          ]
                        ]
                      ]
                    ]
                  ]
                ]
              ]
            ]
          ]
        ]
      ]
    ]
  ]
  "idiomaDefecto" => "es"
  "url" => "/0213005X/00000024000000S1/v0_201307121507/13094279/v0_201307121508/es/main.assets"
  "Apartado" => array:4 [
    "identificador" => "15283"
    "tipo" => "SECCION"
    "es" => array:2 [
      "titulo" => "Programa de Control Externo de Calidad SEIMC&#46; A&#241;o 2005"
      "idiomaDefecto" => true
    ]
    "idiomaDefecto" => "es"
  ]
  "PDF" => "https://static.elsevier.es/multimedia/0213005X/00000024000000S1/v0_201307121507/13094279/v0_201307121508/es/28v24nSupl.1a13094279pdf001.pdf?idApp=UINPBA00004N&text.app=https://www.elsevier.es/"
  "EPUB" => "https://multimedia.elsevier.es/PublicationsMultimediaV1/item/epub/13094279?idApp=UINPBA00004N"
]
Información del artículo
ISSN: 0213005X
Idioma original: Español
Datos actualizados diariamente
año/Mes Html Pdf Total
2024 Noviembre 28 4 32
2024 Octubre 264 12 276
2024 Septiembre 191 15 206
2024 Agosto 98 10 108
2024 Julio 140 6 146
2024 Junio 185 8 193
2024 Mayo 245 9 254
2024 Abril 211 16 227
2024 Marzo 215 19 234
2024 Febrero 157 9 166
2024 Enero 229 12 241
2023 Diciembre 172 14 186
2023 Noviembre 291 15 306
2023 Octubre 345 8 353
2023 Septiembre 176 8 184
2023 Agosto 121 5 126
2023 Julio 150 12 162
2023 Junio 167 5 172
2023 Mayo 267 9 276
2023 Abril 213 6 219
2023 Marzo 247 18 265
2023 Febrero 148 17 165
2023 Enero 110 10 120
2022 Diciembre 142 25 167
2022 Noviembre 177 34 211
2022 Octubre 157 8 165
2022 Septiembre 107 16 123
2022 Agosto 149 12 161
2022 Julio 130 9 139
2022 Junio 103 19 122
2022 Mayo 147 13 160
2022 Abril 125 20 145
2022 Marzo 162 23 185
2022 Febrero 102 9 111
2022 Enero 120 15 135
2021 Diciembre 220 19 239
2021 Noviembre 234 11 245
2021 Octubre 241 16 257
2021 Septiembre 161 23 184
2021 Agosto 96 13 109
2021 Julio 94 11 105
2021 Junio 142 14 156
2021 Mayo 172 23 195
2021 Abril 218 31 249
2021 Marzo 130 15 145
2021 Febrero 95 29 124
2021 Enero 132 24 156
2020 Diciembre 173 12 185
2020 Noviembre 329 25 354
2020 Octubre 191 19 210
2020 Septiembre 103 23 126
2020 Agosto 101 9 110
2020 Julio 58 15 73
2020 Junio 77 17 94
2020 Mayo 111 12 123
2020 Abril 90 21 111
2020 Marzo 94 10 104
2020 Febrero 79 8 87
2020 Enero 57 10 67
2019 Diciembre 86 14 100
2019 Noviembre 86 15 101
2019 Octubre 86 15 101
2019 Septiembre 102 11 113
2019 Agosto 45 10 55
2019 Julio 101 16 117
2019 Junio 139 29 168
2019 Mayo 300 53 353
2019 Abril 191 20 211
2019 Marzo 80 9 89
2019 Febrero 89 19 108
2019 Enero 65 6 71
2018 Diciembre 37 12 49
2018 Noviembre 56 13 69
2018 Octubre 100 7 107
2018 Septiembre 74 9 83
2018 Agosto 28 16 44
2018 Julio 22 2 24
2018 Junio 38 9 47
2018 Mayo 34 11 45
2018 Abril 32 3 35
2018 Marzo 17 4 21
2018 Febrero 18 2 20
2018 Enero 12 3 15
2017 Diciembre 14 3 17
2017 Noviembre 34 5 39
2017 Octubre 19 0 19
2017 Septiembre 19 8 27
2017 Agosto 26 18 44
2017 Julio 28 14 42
2017 Junio 34 24 58
2017 Mayo 49 11 60
2017 Abril 28 11 39
2017 Marzo 44 14 58
2017 Febrero 22 13 35
2017 Enero 28 2 30
2016 Diciembre 38 9 47
2016 Noviembre 54 6 60
2016 Octubre 50 9 59
2016 Septiembre 40 4 44
2016 Agosto 30 7 37
2016 Julio 495 66 561
2016 Junio 1478 279 1757
2016 Mayo 1717 272 1989
2016 Abril 1635 280 1915
2016 Marzo 1317 240 1557
2016 Febrero 1115 194 1309
2016 Enero 894 186 1080
2015 Diciembre 948 168 1116
2015 Noviembre 1379 182 1561
2015 Octubre 1342 178 1520
2015 Septiembre 1107 120 1227
2015 Agosto 1132 91 1223
2015 Julio 1431 99 1530
2015 Junio 889 77 966
2015 Mayo 1112 84 1196
2015 Abril 668 156 824
2015 Marzo 958 138 1096
2015 Febrero 423 64 487
2015 Enero 799 36 835
2014 Diciembre 1330 86 1416
2014 Noviembre 1465 40 1505
2014 Octubre 1719 32 1751
2014 Septiembre 1225 31 1256
2014 Agosto 1058 26 1084
2014 Julio 1255 45 1300
2014 Junio 1114 32 1146
2014 Mayo 925 31 956
2014 Abril 783 37 820
2014 Marzo 737 41 778
2014 Febrero 653 19 672
2014 Enero 583 41 624
2013 Diciembre 684 29 713
2013 Noviembre 875 45 920
2013 Octubre 771 67 838
2013 Septiembre 528 89 617
2013 Agosto 538 96 634
2013 Julio 314 28 342
2006 Octubre 46728 0 46728
Mostrar todo

Siga este enlace para acceder al texto completo del artículo

es en pt

¿Es usted profesional sanitario apto para prescribir o dispensar medicamentos?

Are you a health professional able to prescribe or dispense drugs?

Você é um profissional de saúde habilitado a prescrever ou dispensar medicamentos