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Amplicor HIV-1 Monitor y NucliSens HIV-1 QT: comparación de dos técnicas para la determinación de la carga vírica del virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1
Amplicor HIV-1 Monitor and Nuclisens HIV-1 QT: comparison of two new techniques to determine the viral load of HIV-1
Ma del Carmen Martín-Monteroa, J Ramón Domínguez-Péreza, Isabel García-Bermejoa
a Servicio de Microbiología. Hospital Universitario de Getafe. Madrid.
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Las diferencias existentes entre ellos afectan principalmente a la sensibilidad&#44; capacidad de detectar subtipos diferentes al subtipo B&#44; volumen de muestra utilizado&#44; n&#250;mero de muestras procesadas en un solo ensayo&#44; duraci&#243;n del mismo y la posibilidad de automatizaci&#243;n<span class="elsevierStyleSup">3&#44;4</span>&#46; La elecci&#243;n de la t&#233;cnica m&#225;s adecuada para un determinado laboratorio deber&#225; tener en cuenta&#44; entre otras&#44; las variables anteriormente mencionadas&#46;   <img src="25181425.GIF" width="316" height="137"></img></p><p class="elsevierStylePara"> El objetivo de nuestro trabajo fue ensayar la aplicaci&#243;n de la t&#233;cnica NucliSens HIV-1 QT &#40;Organon Teknika&#44; Durham&#44; NC&#41; basada en tecnolog&#237;a NASBA y compararla con la t&#233;cnica Amplicor HIV-1 Monitor v 1&#46;0 &#40;Roche Diagnostics Systems&#44; Branchburg&#44; NJ&#41; utilizada habitualmente en nuestro laboratorio&#46; Una de las principales diferencias entre ambas t&#233;cnicas se encuentra en el proceso de amplificaci&#243;n&#46; NucliSens amplifica secuencias de ARN mediante una t&#233;cnica isot&#233;rmica llevada a cabo por la actividad combinada de tres enzimas diferentes&#46; Respecto a Amplicor Monitor&#44; la amplificaci&#243;n se efect&#250;a por PCR utilizando una sola enzima&#46; Asimismo&#44; NucliSens incorpora 3 calibradores por muestra&#44; mientras que Amplicor Monitor utiliza s&#243;lo un patr&#243;n de cuantificaci&#243;n e introduce al menos 2 controles externos &#40;negativo&#44; positivo bajo y&#47;o positivo alto&#41; por ensayo&#46; Por tanto&#44; la realizaci&#243;n de Amplicor Monitor requiere la utilizaci&#243;n de un termociclador&#44; mientras que en NucliSens &#233;sta se efect&#250;a en un ba&#241;o mar&#237;a&#46; Es de destacar que dicho ba&#241;o no es sustituible por un termobloque calefactor como ensayamos nosotros en un principio&#44; obteniendo con ello amplificaciones defectuosas al no ser proporcionales entre los 3 calibradores&#44; no pudiendo calcular la recta de regresi&#243;n&#46; </p><p class="elsevierStylePara"> El estudio fue realizado en pacientes adultos infectados por el VIH-1&#44; sometidos a tratamiento con terapia antirretrov&#237;rica y atendidos en nuestro hospital en el per&#237;odo comprendido entre noviembre de 1998 y enero de 1999&#46; </p><p class="elsevierStylePara"> Las muestras se obtuvieron en tubos con EDTA como anticoagulante efectuando la separaci&#243;n del plasma en las 6 h siguientes a la extracci&#243;n del mismo&#46; Se separaron 3 al&#237;cuotas de cada muestra y se conservaron a &#173;70 &#176;C hasta su utilizaci&#243;n&#46; </p><p class="elsevierStylePara"> El volumen de la muestra fue diferente seg&#250;n la t&#233;cnica utilizada&#46; Amplicor Monitor est&#225; dise&#241;ada para 200  &#181; l&#44; obteni&#233;ndose una sensibilidad de 400 copias&#47;ml&#46; NucliSens posee la misma sensibilidad con igual volumen de muestra&#44; pero permite modificar el mismo seg&#250;n la sensibilidad que se pretenda alcanzar&#59; 80 copias&#47;ml en 1 ml y 40 copias&#47;ml en 2 ml&#46; En esta ocasi&#243;n elegimos 1 ml de muestra con objeto de aumentar la sensibilidad&#46; </p><p class="elsevierStylePara"> Se compararon 74 muestras&#44; en 22 de ellas no se detect&#243; ARN v&#237;rico por ninguna de las t&#233;cnicas&#44; 39 se consideraron positivas por ambas y en 13 los resultados fueron discrepantes&#59; siete de ellas detectables &#250;nicamente por Amplicor Monitor y seis por NucliSens&#59; en ambas t&#233;cnicas el intervalo de detecci&#243;n de carga v&#237;rica expresada en logaritmo de n&#250;mero de copias&#47;ml fue de 2-2&#44;6 y 2&#44;2-2&#44;8&#44; respectivamente&#46; </p><p class="elsevierStylePara"> En el estudio comparativo de las muestras con ARN v&#237;rico cuantificable&#44; el coeficiente de correlaci&#243;n de Spearman fue 0&#44;9077 &#40;p &#60; 0&#44;001&#41;&#44; consider&#225;ndose no significativa una diferencia inferior a 0&#44;5 en el log del n&#250;mero de copias&#47;ml&#46; En 3 muestras de las 39 positivas se obtuvo una diferencia estad&#237;sticamente significativa &#40;log del n&#250;mero copias&#47;ml de ARN del VIH-1 &#62; 0&#44;5&#41;&#46; Los par&#225;metros estad&#237;sticos obtenidos fueron&#58; media de la diferencia logar&#237;tmica &#40;n&#250;mero de copias&#47;ml&#41; de 0&#44;31&#44; desviaci&#243;n est&#225;ndar de la media de 0&#44;23 y rango de la diferencia logar&#237;tmica de 0&#44;546-0&#44;074&#46; Los datos de correlaci&#243;n lineal de ambas t&#233;cnicas aparecen en la figura 1&#46; </p><p class="elsevierStylePara"> En nuestra experiencia la correlaci&#243;n entre el m&#233;todo Amplicor Monitor y NucliSens es muy buena&#44; similar a la encontrada en estudios recientemente publicados<span class="elsevierStyleSup">5</span> y superior a la obtenida en otros trabajos revisados<span class="elsevierStyleSup">6&#44;7</span>&#46; </p><p class="elsevierStylePara"> No realizamos la diferenciaci&#243;n de posibles subtipos&#44; aunque en la bibliograf&#237;a consultada ambas t&#233;cnicas detectan satisfactoriamente el subtipo B<span class="elsevierStyleSup">8</span>&#44; existiendo limitaciones en el caso de otros subtipos&#44; principalmente A<span class="elsevierStyleSup">9&#44;10</span>&#44; E y G<span class="elsevierStyleSup">9</span>&#46; </p><p class="elsevierStylePara"> Respecto a la duraci&#243;n del ensayo&#44; es similar en ambas t&#233;cnicas &#40;5 h &#177; 30 min para Amplicor Monitor y 6 h &#177; 30 min para NucliSens&#41;&#46; No obstante&#44; la realizaci&#243;n de la t&#233;cnica NucliSens conlleva mayor manipulaci&#243;n de las muestras&#44; por lo que en laboratorios con jornada laboral de 7-8 h ser&#237;a aconsejable dividir el proceso en dos fases ejecutables en d&#237;as consecutivos&#46; </p><p class="elsevierStylePara"> En la actualidad existe la posibilidad de automatizar ambas t&#233;cnicas en alguna de sus fases&#46; En el caso de NucliSens es el proceso de extracci&#243;n del ARN v&#237;rico&#44; mientras que en Amplicor HIV-Monitor son las fases de amplificaci&#243;n y detecci&#243;n&#46; En el primer caso se utiliza el aparato Xtractor adaptado a 10 muestras por ensayo en un tiempo de 50 min y en el segundo&#44; el aparato Cobas Amplicor realiza la amplificaci&#243;n y detecci&#243;n de 24 muestras al mismo tiempo&#46; </p><p class="elsevierStylePara"> En conclusi&#243;n&#44; para laboratorios con jornada laboral de 7-8 h&#44; carga de trabajo no superior a 10 muestras por ensayo y una sola persona para realizarlo&#44; NucliSens es una alternativa v&#225;lida para cuantificar la carga v&#237;rica del VIH-1&#46; En otros supuestos&#44; ser&#237;a recomendable la utilizaci&#243;n de una tecnolog&#237;a alternativa y&#47;o la introducci&#243;n de instrumentaci&#243;n que permita automatizar alguno o varios de los procesos del ensayo&#46; </p>"
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Información del artículo
ISSN: 0213005X
Idioma original: Español
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