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Carta científica
Estabilidad del ARN viral en muestras clínicas para el diagnóstico viral
Stability of viral RNA in clinical specimens for viral diagnosis
Xana García Fernández
Autor para correspondencia
xanagarcia2009@hotmail.com

Autor para correspondencia.
, Marta E. Álvarez-Argüelles, Susana Rojo, María de-Oña
Servicio de Microbiología, Hospital Universitario Central de Asturias, Oviedo, Asturias, España
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el ARN de las mismas es especialmente vulnerable a la degradaci&#243;n<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0050"><span class="elsevierStyleSup">3&#44;4</span></a>&#44; lo que podr&#237;a influir en el diagn&#243;stico viral al disminuir la sensibilidad de las t&#233;cnicas de amplificaci&#243;n&#46;</p><p id="par0015" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Diversos estudios han demostrado que los inhibidores de ribonucleasas presentan un amplio espectro de actividades inhibitorias contra las ARNasas&#44; protegiendo eficazmente el ARN durante los procedimientos de laboratorio lo que permite una gran flexibilidad en el dise&#241;o experimental&#46; Su utilizaci&#243;n puede ser una soluci&#243;n para minimizar estos problemas de degradaci&#243;n<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0060"><span class="elsevierStyleSup">5&#8211;7</span></a>&#46;</p><p id="par0020" class="elsevierStylePara elsevierViewall">El objetivo de este trabajo fue evaluar la integridad del ARN viral de muestras cl&#237;nicas tras su almacenaje a 4<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span><span class="elsevierStyleSup">o</span>C&#44; despu&#233;s de un periodo de tiempo de trabajo est&#225;ndar &#40;10 d&#237;as&#41;&#44; que se considera suficiente para realizar todos los procesos rutinarios que implica el diagn&#243;stico viral de una muestra&#44; y analizar la eficacia y el rendimiento de un inhibidor de ARNasas para evitar su degradaci&#243;n&#46;</p><p id="par0025" class="elsevierStylePara elsevierViewall">De las muestras procesadas en la Unidad de Virolog&#237;a del Hospital Central de Asturias durante 2 meses&#44; se estudiaron 67 exudados &#40;42 nasofar&#237;ngeos y 25 far&#237;ngeos&#41; recogidos en un medio de transporte de virus&#46; Se llev&#243; a cabo una extracci&#243;n y purificaci&#243;n del material gen&#243;mico con el Reactivo MagNA Pure LC Total Nucleic Acid Isolation Kit&#44; en el sistema autom&#225;tico MagNA Pure LC 2&#46;0 &#40;Roche Diagnostics&#44; Suiza&#41;&#46; Se obtuvieron 100<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#956;l para una posterior amplificaci&#243;n de fragmentos de genoma viral y se aplicaron protocolos de diagn&#243;stico sindr&#243;mico del laboratorio&#46; En todos ellos se evaluaba la cantidad y la calidad de la muestra&#44; y con la amplificaci&#243;n del gen de la &#946;-globina humana se informaba la carga viral normalizada &#40;por n&#250;mero de c&#233;lulas&#41;&#46; Del extracto nucleico total se separaron 2 al&#237;cuotas de 10<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#956;l y en una se a&#241;adi&#243; 1<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#956;l RNase&#174; Inhibitor &#40;Applied Biosystems&#44; EE&#46; UU&#46;&#41;<span class="elsevierStyleItalic">&#44;</span> ambas se almacenaron a 4<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span><span class="elsevierStyleSup">o</span>C&#46;</p><p id="par0030" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Las 67 muestras incluidas fueron sometidas al proceso diagn&#243;stico habitual en el laboratorio para enterovirus &#40;n&#58; 53&#41;&#44; parainfluenzavirus &#40;n&#58; 11&#41; e influenzavirus A &#40;n&#58; 3&#41;&#46; A los 10 d&#237;as&#44; a las 2 al&#237;cuotas almacenadas se les volvi&#243; a realizar la misma PCR y se compararon los ciclos de amplificaci&#243;n &#40;Ct&#41; con y sin inhibidor&#46; Tambi&#233;n se dividieron en 3 grupos seg&#250;n su Ct &#40;&#60;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>20&#44; 20-25 y 25-35 ciclos&#41; y el tipo de virus&#46;</p><p id="par0035" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Todos los c&#225;lculos estad&#237;sticos se realizaron con el programa para ordenador&#44; GraphPad InStat v2&#46;04a &#40;GraphPad Software&#44; EE&#46; UU&#46;&#41; seg&#250;n los requerimientos espec&#237;ficos&#46;</p><p id="par0040" class="elsevierStylePara elsevierViewall">En la <a class="elsevierStyleCrossRef" href="#tbl0005">tabla 1</a> observamos que en todas las muestras estudiadas se evidencia la presencia de ARN viral&#44; y en ning&#250;n grupo se encontraron diferencias estad&#237;sticamente significativas a los 10 d&#237;as independientemente de a&#241;adir o no inhibidor&#46; Adem&#225;s&#44; la media de los Ct no var&#237;a de manera significativa en ning&#250;n virus&#46;</p><elsevierMultimedia ident="tbl0005"></elsevierMultimedia><p id="par0045" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Las muestras repitieron el rango de amplificaci&#243;n en 59 &#40;88&#44;1&#37;&#41; de las ocasiones despu&#233;s de 10 d&#237;as&#44; y en 58 &#40;86&#44;6&#37;&#41; de los casos&#44; cuando a la muestra extra&#237;da se la a&#241;adi&#243; RNasin&#174;&#46;</p><p id="par0050" class="elsevierStylePara elsevierViewall">El presente estudio demuestra que&#44; aunque el uso de RNasin&#174; suele estar recomendado en los protocolos de manejo de virus ARN&#44; no parece imprescindible&#44; al menos en los virus estudiados&#46; En alg&#250;n caso disminuy&#243; ligeramente el rendimiento en las muestras con y sin inhibidor&#44; y es importante se&#241;alar que ninguna muestra result&#243; indetectable despu&#233;s de 10 d&#237;as&#46;</p><p id="par0055" class="elsevierStylePara elsevierViewall">As&#237; pues&#44; mantenemos que para estudios virales que se realicen en un periodo de 10 d&#237;as conservados a 4<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span><span class="elsevierStyleSup">o</span>C no disminuye la capacidad diagn&#243;stica y no ser&#237;a necesario a&#241;adir reactivos preservantes lo que disminuir&#237;a la manipulaci&#243;n de las muestras y adem&#225;s no supondr&#237;a un aumento en el coste de las pruebas diagn&#243;sticas&#46; Ser&#237;a &#250;til realizar estudios en periodos de tiempo m&#225;s largos para establecer a partir de qu&#233; tiempo la posible degradaci&#243;n del ARN podr&#237;a ser minimizada al utilizar un inhibidor enzim&#225;tico&#46;</p><span id="sec0005" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0005">Financiaci&#243;n</span><p id="par0060" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Los autores declaran no haber recibido financiaci&#243;n para la realizaci&#243;n de este trabajo&#46;</p></span></span>"
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                  \t\t\t\t" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Con &#40;sin&#41; inhibidor</th><th class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t\t\t</th><th class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Ct&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t\t\t</th><th class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">&#60;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>20&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t\t\t</th><th class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">20-25&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t\t\t</th><th class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">25-35&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t\t\t</th><th class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Valor de p&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t\t\t</th></tr></thead><tbody title="tbody"><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="\n
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                  \t\t\t\t">&#60;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>20&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t">16 &#40;16&#41;&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t">2 &#40;2&#41;&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t">0 &#40;0&#41;&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t">Ns&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t">&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t">n<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#61;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>18&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t">&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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                  \t\t\t\t">20-25&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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                  \t\t\t\t">4 &#40;1&#41;&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
                  \t\t\t\t\ttable-entry\n
                  \t\t\t\t  " align="left" valign="\n
                  \t\t\t\t\ttop\n
                  \t\t\t\t">20 &#40;24&#41;&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
                  \t\t\t\t\ttable-entry\n
                  \t\t\t\t  " align="left" valign="\n
                  \t\t\t\t\ttop\n
                  \t\t\t\t">7 &#40;6&#41;&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
                  \t\t\t\t\ttable-entry\n
                  \t\t\t\t  " align="left" valign="\n
                  \t\t\t\t\ttop\n
                  \t\t\t\t">Ns&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td" title="\n
                  \t\t\t\t\ttable-entry\n
                  \t\t\t\t  " align="" valign="\n
                  \t\t\t\t\ttop\n
                  \t\t\t\t">&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
                  \t\t\t\t\ttable-entry\n
                  \t\t\t\t  " align="left" valign="\n
                  \t\t\t\t\ttop\n
                  \t\t\t\t">n<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#61;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>31&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
                  \t\t\t\t\ttable-entry\n
                  \t\t\t\t  " align="" valign="\n
                  \t\t\t\t\ttop\n
                  \t\t\t\t">&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
                  \t\t\t\t\ttable-entry\n
                  \t\t\t\t  " align="" valign="\n
                  \t\t\t\t\ttop\n
                  \t\t\t\t">&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
                  \t\t\t\t\ttable-entry\n
                  \t\t\t\t  " align="" valign="\n
                  \t\t\t\t\ttop\n
                  \t\t\t\t">&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
                  \t\t\t\t\ttable-entry\n
                  \t\t\t\t  " align="" valign="\n
                  \t\t\t\t\ttop\n
                  \t\t\t\t">&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t  " align="" valign="\n
                  \t\t\t\t\ttop\n
                  \t\t\t\t">&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
                  \t\t\t\t\ttable-entry\n
                  \t\t\t\t  " align="left" valign="\n
                  \t\t\t\t\ttop\n
                  \t\t\t\t">25-35&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
                  \t\t\t\t\ttable-entry\n
                  \t\t\t\t  " align="left" valign="\n
                  \t\t\t\t\ttop\n
                  \t\t\t\t">0 &#40;0&#41;&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
                  \t\t\t\t\ttable-entry\n
                  \t\t\t\t  " align="left" valign="\n
                  \t\t\t\t\ttop\n
                  \t\t\t\t">3 &#40;3&#41;&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
                  \t\t\t\t\ttable-entry\n
                  \t\t\t\t  " align="left" valign="\n
                  \t\t\t\t\ttop\n
                  \t\t\t\t">15 &#40;15&#41;&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
                  \t\t\t\t\ttable-entry\n
                  \t\t\t\t  " align="left" valign="\n
                  \t\t\t\t\ttop\n
                  \t\t\t\t">Ns&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td" title="\n
                  \t\t\t\t\ttable-entry\n
                  \t\t\t\t  " align="" valign="\n
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                  \t\t\t\t">&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t  " align="left" valign="\n
                  \t\t\t\t\ttop\n
                  \t\t\t\t">n<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#61;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>18&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
                  \t\t\t\t\ttable-entry\n
                  \t\t\t\t  " align="" valign="\n
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                  \t\t\t\t">&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t">&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t">&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t">&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td></tr></tbody></table>
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                  \t\t\t\t" scope="col">&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t\t\t</th><th class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t" scope="col">&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t\t\t</th><th class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t\ttop\n
                  \t\t\t\t" scope="col">Est&#225;ndar&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t\t\t</th><th class="td" title="\n
                  \t\t\t\t\ttable-head\n
                  \t\t\t\t  " align="left" valign="\n
                  \t\t\t\t\ttop\n
                  \t\t\t\t" scope="col">Con inhibidor&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t\t\t</th><th class="td" title="\n
                  \t\t\t\t\ttable-head\n
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                  \t\t\t\t\ttop\n
                  \t\t\t\t" scope="col">Sin inhibidor&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t\t\t</th><th class="td" title="\n
                  \t\t\t\t\ttable-head\n
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                  \t\t\t\t" scope="col">&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t\t\t</th></tr><tr title="table-row"><th class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t" scope="col">&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t\t\t</th><th class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t" scope="col">&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t\t\t</th><th class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t" scope="col">24&#44;78<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>3&#44;44&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t\t\t</th><th class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t" scope="col">25&#44;07<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>2&#44;37&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t\t\t</th><th class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t" scope="col">25&#44;28<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>2&#44;44&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t\t\t</th><th class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t" scope="col">&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t\t\t</th></tr><tr title="table-row"><th class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t\t\t</th><th class="td" title="\n
                  \t\t\t\t\ttable-head\n
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                  \t\t\t\t\ttop\n
                  \t\t\t\t" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Total&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t\t\t</th><th class="td" title="\n
                  \t\t\t\t\ttable-head\n
                  \t\t\t\t  " align="left" valign="\n
                  \t\t\t\t\ttop\n
                  \t\t\t\t" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">&#40;21-28&#41;&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t\t\t</th><th class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t  " align="left" valign="\n
                  \t\t\t\t\ttop\n
                  \t\t\t\t" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">&#40;22-27&#41;&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t\t\t</th><th class="td" title="\n
                  \t\t\t\t\ttable-head\n
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                  \t\t\t\t" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">&#40;22-27&#41;&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t\t\t</th><th class="td" title="\n
                  \t\t\t\t\ttable-head\n
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                  \t\t\t\t\ttop\n
                  \t\t\t\t" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t\t\t</th></tr></thead><tbody title="tbody"><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="\n
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                  \t\t\t\t">Virus&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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                  \t\t\t\t">24&#44;09<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>5&#44;75&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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                  \t\t\t\t">24&#44;18<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>5&#44;87&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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Información del artículo
ISSN: 0213005X
Idioma original: Español
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