Diagnóstico de la brucelosis humana. Influencia del pH en la prueba de seroaglutinación y sobre la actividad aglutinante de los anticuerpos IgM, IgG e IgA

Objetivo

Analizar el efecto del pH en la prueba de seroaglutinación (SAT) y rosa de Bengala (RB) y su influencia sobre la capacidad aglutinante de los anticuerpos IgM, IgG e IgA.

Material y Métodos

La SAT se realizó a pH 7,2 y a 5,0 en placas de microtiter utilizando “Ring test antigen” (RT) y la suspensión de brucelas utilizada en la prueba de Brucellacapt® (BRUCAPT). La presencia de anticuerpos frente al hapteno nativo (HN) se realizó mediante la prueba de inmunodifusión radial (IDR). Además, se estudió la capacidad aglutinante a pH 7,2 y 5,0 de las fracciones IgG, IgA e IgM de 8 sueros obtenidas mediante cromatografía de adsorción.

Resultados

Se han empleado 72 sueros de pacientes con brucelosis, 16 de personas en contacto con animales infectados y 16 de donantes sanos. Los resultados de la SAT a pH 5,0 se correlacionaron con los de la prueba de RB. La SAT de cuatro sueros RB positivos fue negativa a pH 7,2 pero positiva a pH 5,0. Los títulos de la SAT a pH 5,0 con el antígeno BRUCAPT fueron superiores a los obtenidos con el RT (p < 0,001) a pH 7,2 o 5,0, siendo los más elevados los correspondientes a los sueros IDR positivos. De las 8 fracciones IgG, siete aglutinaron a pH 7,2 y en cuatro sus títulos aumentaron significativamente a pH 5,0. Tres fracciones IgA fueron SAT negativas a pH 7,2 pero positivas a pH 5,0 y las otras cinco aglutinaron a pH 7,2 y a 5,0, y además, fueron sensibles al ditiotreitol (DTT). El pH no modificó significativamente la actividad aglutinante de las fracciones IgM.

Conclusiones

La prueba de SAT realizada con el tampón de dilución y la suspensión antigénica incluidas en los equipos Brucellacapt® es de gran utilidad para la demostración de la presencia de anticuerpos aglutinantes y no aglutinantes a pH 7,2.

Objective

To evaluate the role of pH in the seroagglutination test (SAT)and Rose Bengal (RB) test, and to determine the influence of pH on the agglutinating activity of IgM, IgG and IgA antibodies.

Material And Methods

The SAT was performed at pH 7.2 or pH 5.0 in standard microtiter-type polystyrene plates using Ring Test antigen or the Brucella suspension (BRUCAPT) provided in the Brucellacapt® kits. Specific antibodies against native hapten were determined by radial immunodiffusion. Additionally, IgG, IgA and IgM fractions were separated from 8 sera by absorption chromatography and their agglutinating capacity was studied at pH 7.2 and 5.0.

Results

We studied 72 sera from patients with clinical brucellosis taken at the time of hospitalization, 16 from persons in contact with infected animals, and 16 from healthy donors. SAT results at pH 5.0 correlated with those obtained with the Rose Bengal test. Four Rose Bengal-positive sera were found to be SAT-negative at pH 7.2 and SAT-positive at pH 5.0. SAT performed at pH 5.0 with BRUCAPT antigen yielded higher titers than tests performed at pH 7.2 or 5.0 with Ring Test antigen (p < 0.001), with highest titers in IDR-positive sera. Among the 8 IgG fractions, all but one agglutinated at pH 7.2, and in 4, IgG titers showed significant increases at pH 5.0. Three IgA fractions were SAT-negative at pH 7.2 and SAT-positive at pH 5.0; the other 5 agglutinated at both pH conditions and were DTT-sensitive. All IgA fractions but one were positive by Rose Bengal. Agglutinating activity of the IgM fraction was not affected by pH.

Conclusion

The SAT performed with the buffer and antigen suspension included in the Brucellacapt® kit (pH 5.0) is highly useful for detecting agglutinating and non-agglutinating antibodies at pH 7.2.