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A diferencia de lo que sucede en los tumores sólidos, en las hemopatías malignas, sobre todo en los procesos agudos, es más frecuente la detección de una única alteración cromosómica. Se piensa que esta característica se debe a que las manifestaciones clínicas en las leucemias son más tempranas y por ello, en el momento del diagnóstico se observarían fundamentalmente las alteraciones primarias. Por el contrario, en los tumores sólidos es más frecuente encontrar numerosas alteraciones cromosómicas secundarias, asociadas a la transformación del clon ancestral. La identificación de las alteraciones genéticas primarias, presentes en la totalidad de las células neoplásicas es fundamental para conocer el origen de la enfermedad, mientras que la identificación de alteraciones secundarias, presentes en tan solo una parte de las células patológicas, tiene gran interés clínico al estar asociadas a la progresión de la misma. En este sentido, es fundamental conocer la organización y composición del genoma humano en individuos sanos, así como en la célula neoplásica, para poder conocer las alteraciones genéticas responsables de la enfermedad, lo que nos permitirá realizar un diagnóstico mucho más preciso<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0045"><span class="elsevierStyleSup">2</span></a>.</p><p id="par0010" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Las alteraciones genéticas han sido estudiadas empleando desde técnicas clásicas de bandeo, las cuales permiten detectar alteraciones groseras que afectan a regiones cromosómicas ≥<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>10<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>Mb, hasta las técnicas más avanzadas de ultra-secuenciación actuales, que permiten detectar alteraciones que afectan a un solo nucleótido (mutaciones puntuales). Por su parte, la citogenética clásica (<span class="elsevierStyleSmallCaps">CC</span>) ha sido una técnica tremendamente útil para el estudio de anomalías cromosómicas. Así, en 1960 Nowell y Hungerford observaron la aparición de un pequeño cromosoma, al que denominaron Philadelphia (Ph), en pacientes con LMC, que hoy sabemos es el responsable de esta enfermedad<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0040"><span class="elsevierStyleSup">1</span></a>. Sin embargo, esta técnica presenta ciertos inconvenientes asociados a su metodología debido a la necesidad de obtener metafases de las células neoplásicas tras su cultivo <span class="elsevierStyleItalic">in vitro</span>, lo que en ocasiones puede producir una selección clonal al favorecer el crecimiento de células normales o bien de determinados clones neoplásicos. Además, la CC presenta un componente subjetivo en la interpretación de los resultados, ya que, con relativa frecuencia los cromosomas presentan bandas poco definidas. Otra limitación de esta metodología es que solo obtenemos la información proporcionada por los núcleos en metafase, que representan una pequeña proporción de la celularidad global del tumor (<<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>1%), poniendo de manifiesto la baja sensibilidad de la técnica<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0045"><span class="elsevierStyleSup">2</span></a>. Por el contrario, la hibridación <span class="elsevierStyleItalic">in situ</span> fluorescente (FISH), aunque no permite obtener una información global del genoma, es aplicable tanto en metafases como en núcleos interfásicos de forma rápida, sensible y objetiva. De hecho, la FISH se ha convertido en la técnica de referencia para la detección de alteraciones numéricas y estructurales en neoplasias hematológicas en el momento del diagnóstico. Además, es frecuente que el patrón cromosómico identificado por FISH en el momento del diagnóstico añada tanto valor pronóstico como terapéutico a diferentes entidades hematológicas (leucemia linfoblástica aguda B, síndrome mielodisplásico, leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide crónica, y mieloma múltiple, entre otras entidades)<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0050"><span class="elsevierStyleSup">3–5</span></a>. Sin embargo, su limitada sensibilidad (5%) hace que no sea la técnica más adecuada para estudios de enfermedad mínima residual (EMR). No obstante, para determinadas neoplasias hematológicas como el mieloma múltiple, cabe la posibilidad de separar las células tumorales bien mediante inmunofluorescencia directa, por el fenotipo de la población clonal mediante técnicas de citometría de flujo (CMF) o bien a través de separación inmunomagnética. De este modo podríamos hacer el seguimiento de la enfermedad mediante técnicas de FISH, ya que estaríamos analizando una población de células clonales puras (pureza ≥<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>98%)<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0055"><span class="elsevierStyleSup">4</span></a>. Gracias a la separación celular, en numerosos trabajos caracterizan el clon neoplásico de la leucemia presente en <<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>1% de la celularidad total de la médula ósea (MO) mediante técnicas de FISH<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0050"><span class="elsevierStyleSup">3–5</span></a>. A pesar de esto, las técnicas basadas en la amplificación mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), ya sea cualitativa o cuantitativa, han demostrado una gran utilidad para detectar y hacer un seguimiento más preciso de la EMR. La PCR cuantitativa en tiempo real (qPCR), que emplea primeros (cebadores) y sondas específicas que hibridan sobre la región diana, permite alcanzar niveles de sensibilidad de hasta 10<span class="elsevierStyleSup">-5</span>. Su probada especificidad, sensibilidad y reproducibilidad hacen que hoy día sea considerada la técnica de referencia para los estudios de EMR en numerosas neoplasias hematológicas. No obstante, esta técnica presenta ciertos inconvenientes como el riesgo de contaminación, no permite la discriminación de los diferentes clones neoplásicos en la muestra, y solo es aplicable para el estudio de reordenamientos conocidos. Es por ello, que las nuevas técnicas moleculares tratan de dar respuesta a estos problemas/limitaciones, como es el caso de la secuenciación masiva (SM). Esta técnica se basa en la generación en paralelo y de forma simultánea de millones de fragmentos o lecturas de ADN. Sus aplicaciones a partir del ADN son numerosas, permitiendo el abordaje del estudio del genoma completo, del exoma o regiones codificantes, o de determinados genes o regiones de interés. Por otra parte, esta técnica también permite estudios sobre ARN para determinar el perfil de expresión génica. Su principal atractivo en este campo es la detección de variaciones estructurales no conocidas y la determinación exacta de nuevos puntos de rotura. No obstante, la SM también presenta ciertos inconvenientes como un complejo análisis bioinformático de los datos, la dificultad en la interpretación clínica de los resultados obtenidos y, a día de hoy, la necesidad de llevar a cabo una validación en términos de sensibilidad y especificidad mediante las técnicas convencionales. Por el contrario, desde el punto de vista de la determinación del estado mutacional, las técnicas de SM tienen la gran ventaja de que, partiendo de menor cantidad de ADN y con un coste más bajo, el rendimiento es mucho mayor. Además, las plataformas para SM son muy flexibles en cuanto al diseño, y el usuario puede decidir la cobertura y la profundidad de lectura y así alcanzar una gran sensibilidad frente a otras técnicas<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0065"><span class="elsevierStyleSup">6,7</span></a>.</p><p id="par0015" class="elsevierStylePara elsevierViewall">En la actualidad, el análisis de translocaciones y reordenamientos, así como las ganancias y pérdidas cromosómicas conocidas en una muestra en el momento del diagnóstico, continua llevándose a cabo mediante técnicas clásicas de FISH. Si bien, cuando el porcentaje de células tumorales es bajo (<<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>5%), es necesario recurrir a técnicas de alta sensibilidad como la qPCR o a la separación del clon neoplásico. La utilización de las nuevas estrategias de secuenciación masiva abre un abanico de posibilidades para la caracterización molecular de la célula tumoral, así como para su seguimiento, a pesar de que esta aproximación aún se encuentre en fase de implementación dentro de los laboratorios de referencia.</p><span id="sec0005" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0005">Financiación</span><p id="par0020" class="elsevierStylePara elsevierViewall">ME Sarasquete está financiada a través de un contrato Miguel Servet (CP13/00080) del Instituto de Salud Carlos <span class="elsevierStyleSmallCaps">III</span>, Ministerio de Ciencia e Innovación, Madrid, España.</p></span><span id="sec0010" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0010">Conflicto de intereses</span><p id="par0025" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Los autores declaran no tener ningún conflicto de intereses.</p></span></span>" "textoCompletoSecciones" => array:1 [ "secciones" => array:3 [ 0 => array:2 [ "identificador" => "sec0005" "titulo" => "Financiación" ] 1 => array:2 [ "identificador" => "sec0010" "titulo" => "Conflicto de intereses" ] 2 => array:1 [ "titulo" => "Bibliografía" ] ] ] "pdfFichero" => "main.pdf" "tienePdf" => true "fechaRecibido" => "2017-06-20" "fechaAceptado" => "2017-10-11" "bibliografia" => array:2 [ "titulo" => "Bibliografía" "seccion" => array:1 [ 0 => array:2 [ "identificador" => "bibs0015" "bibliografiaReferencia" => array:7 [ 0 => array:3 [ "identificador" => "bib0040" "etiqueta" => "1" "referencia" => array:1 [ 0 => array:2 [ "contribucion" => array:1 [ 0 => array:2 [ "titulo" => "A minute chromosome in human chronic granulocytic leukemia" "autores" => array:1 [ 0 => array:2 [ "etal" => false "autores" => array:2 [ 0 => "P.C. 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