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Reacción en cadena de polimerasa para detectar Mycobacterium leprae en muestras de moco nasal de convivientes de pacientes con lepra
Polymerase chain reaction to detect Mycobacterium leprae in samples of nasal mucus from household contacts of patients with leprosy
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India tiene el mayor número de casos, seguido por Brasil y Birmania. De acuerdo a recientes estadísticas de la OMS, están decreciendo en aproximadamente 107.000 casos desde el año 2003. Los casos registrados de lepra fueron 286.063 y 407.791 nuevos casos en el año 2004. Aunque el número de casos continúa cayendo, hay bolsones de alta prevalencia en ciertas áreas como Brasil, Sudeste Asiático (India, Nepal), partes de África (Tanzania, Madagascar, Mozambique) y el oeste del Pacífico. En Argentina es endémico, en regiones del noreste (Formosa, Chaco, Misiones, Corrientes y Entre Ríos) y el centro del país (Córdoba, Santiago del Estero, Tucumán y Santa Fé) y Buenos Aires. Dentro de esta área endémica existen zonas de más importante estratificación epidemiológica, lugares de alta densidad poblacional y hacinamiento, conformando áreas de gran concentración de casos de lepra. A pesar del descenso mundial de la prevalencia de la lepra no se ha observado un descenso de su incidencia, es decir, que no se ha podido prevenir la transmisión, a pesar de que se ha adoptado la poliquimioterapia en programas con seguimiento estricto<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib3"><span class="elsevierStyleSup">3</span></a>. Por otro lado, si bien son escasos los pacientes con lepra lepromatosa, la mayoría de los habitantes de áreas endémicas presentan signos de exposición a <span class="elsevierStyleItalic">M. leprae</span><a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib3"><span class="elsevierStyleSup">3</span></a>. Esto se debería al largo período de incubación de la enfermedad y a las diferentes presentaciones clínicas, por lo tanto existe una gran proporción de pacientes que se mantienen largo tiempo en la forma subclínica en la que pueden presentar una fase bacilífera de la infección primaria, localizada en la mucosa nasal, que los convierte en un foco transitorio de diseminación de bacilos<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib3"><span class="elsevierStyleSup">3</span></a>. Se desconoce la importancia de la infección subclínica y su relevancia en la transmisión de la enfermedad, la cuantificación de la proporción de casos subclínicos en una población podría aumentar el conocimiento de la diseminación y transmisión de <span class="elsevierStyleItalic">M. leprae</span> y de los factores de riesgo. Las personas que están en contacto permanente con los enfermos son quienes tienen mayor riesgo de contraer tanto la infección como la enfermedad<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib4"><span class="elsevierStyleSup">4</span></a> y por lo tanto, es importante encontrar un método rápido, sensible y específico que permita realizar un diagnóstico precoz de esta infección subclínica entre los contactos intradomiciliarios de los pacientes, con el fin de vigilar y evaluar la importancia de tales casos en la cadena de transmisión de la enfermedad<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib4"><span class="elsevierStyleSup">4</span></a>. En las últimas dos décadas, se han desarrollado como herramientas de diagnóstico confiable y sensible nuevos métodos de biología molecular, como la reacción en cadena de la polimerasa para la detección de patógenos de muchas enfermedades infecciosas, incluida la lepra. Varios investigadores usaron la PCR para amplificar varias secuencias del genoma de <span class="elsevierStyleItalic">M. leprae</span> con el fin de mejorar la detección de bajo número de bacterias<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib5"><span class="elsevierStyleSup">5</span></a>.</p><p id="p0015" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Como blancos se han utilizado diferentes secuencias, como las que codifican las proteínas antigénicas de 15<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>kDa<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib6"><span class="elsevierStyleSup">6</span></a>, 18<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>kDa<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib7"><span class="elsevierStyleSup">7,8</span></a> y 36<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>kDa<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib9"><span class="elsevierStyleSup">9,10</span></a>, la proteína de 65<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>kDa<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib11"><span class="elsevierStyleSup">11,12</span></a>, la secuencia repetitiva RLEP<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib13"><span class="elsevierStyleSup">13,14</span></a>, la subunidad 16S del ARNr<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib15"><span class="elsevierStyleSup">15</span></a> y la enzima superóxido-dismutasa<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib16"><span class="elsevierStyleSup">16</span></a>. Entre sus aplicaciones se encuentra la detección de mutaciones específicas en genes que le puedan conferir al bacilo resistencia a la rifampicina o a las fluoroquinolonas, como las mutaciones de los genes rpob<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib17"><span class="elsevierStyleSup">17</span></a> y gyr A/B<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib18"><span class="elsevierStyleSup">18</span></a>, respectivamente. En este estudio se investigaron muestras de moco nasal de los contactos intradomiciliarios de pacientes con lepra que concurrieron para su atención a un centro dermatológico, de un área de alta prevalencia de la República Argentina, para detectar la presencia de <span class="elsevierStyleItalic">M. leprae</span> usando una n-PCR usando como blanco la secuencia repetitiva RLEP, que codifica proteínas antigénicas del <span class="elsevierStyleItalic">M. leprae</span><a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib19"><span class="elsevierStyleSup">19</span></a>.</p></span><span id="s0010" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle">Materiales y métodos</span><p id="p0020" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Se realizó un estudio prospectivo, transversal y descriptivo, en el Centro Dermatológico de Resistencia, Chaco. Se investigaron los contactos intradomiciliarios; sin signos ni síntomas de enfermedad, que concurrieron durante octubre de 2008 a octubre de 2009. Se registraron en fichas los datos demográficos y clínico-epidemiológicos de interés de todos los contactos intradomiciliarios incluidos en el estudio. Posteriormente los datos se trasladaron a una base de datos Epi info. A partir de los datos consignados, se realizó un análisis de frecuencias de las variables de interés. Se recolectaron muestras de moco nasal de los contactos intradomiciliarios de pacientes con lepra diagnosticados histopatológica y clínicamente por el programa local de control de lepra de la provincia del Chaco, Argentina. Las muestras fueron tomadas en el Centro Dermatológico de Resistencia, Chaco, utilizando hisopos de algodón y realizando movimientos rotatorios sobre el tabique nasal. Los hisopos fueron colocados en tubos de ensayo estériles, de cierre hermético, y en 24 horas fueron enviados y refrigerados, en el Servicio de Histocompatibilidad del Hospital Dr. Julio C. Perrando. A cada tubo de ensayo con el hisopo se le añadieron 1.500<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>ul de buffer TE (Tris-HCL [0,01 M], PH 7,6; EDTA [0,001M] PH 8,3) se agitó fuertemente el hisopo dentro del tampón y la suspensión obtenida se dividió en tres alícuotas de 500<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>ul que fueron congeladas a −70<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>°C hasta su utilización. Como controles positivos se utilizaron bacilos obtenidos a partir de muestras de lepromas de un paciente con lepra lepromatosa diagnosticado recientemente, usando el protocolo recomendado por la OMS para el procesamiento de las biopsias<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib20"><span class="elsevierStyleSup">20</span></a>. La cuantificación de los bacilos ácido-alcohol resistente se realizó en frotis teñidos con la coloración de Ziehl-Nielsen. Como controles negativos se utilizaron muestras de agua ultrapura. El proceso de extracción del ADN cromosómico del <span class="elsevierStyleItalic">M. leprae</span> se realizó usando bromuro de exadecil trimetil amonio (CTAB), se centrifugó la muestra de moco nasal o biopsia a 3.000 revoluciones por minuto (rpm) durante 5<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>min, se descartó el sobrenadante. Al pellet se le agregó 400<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>ul de solución de CTAB (concentración final: CTAB el 2%p/v; 2-mercaptoetanol el 0,2%p/v; Tris-HCL [1M] PH 7,8; 0,1M; Na Cl 5M, 1,4M; EDTA [0,5 M]; PH 8 0,02M). Se incubó toda la noche a 37<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>°C. Se realizó extracción con 400<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>ul de cloroformo: isoamílico (24:1). Se agitó y luego se centrifugó a 10.000<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>rpm durante 5<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>min, se recuperó la fase acusa (superior), se trasvasó a otro tubo, se descartó el resto. Se repitió la extracción una vez más. Se agregó 2 volúmenes de etanol absoluto. Se centrifugó a 13.000<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>rpm 10<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>min. Se descartó el etanol. Se lavó el culote con etanol el 70%. Se agregó 2 volúmenes de etanol el 70%. Se centrifugó a 13.000<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>rpm 10<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>min. Se descartó el etanol y el ADN se secó durante 15<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>min a 50<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>°C, finalmente se resuspendió en 50<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>ul de Buffer Qiagen AE. Se homogeneizó, se centrifugó brevemente, se fraccionó y se guardó a −20<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>°C hasta su uso.</p><p id="p0025" class="elsevierStylePara elsevierViewall">El diagnóstico molecular del <span class="elsevierStyleItalic">M. leprae</span> por PCR se basó en la amplificación de un elemento repetitivo específico de <span class="elsevierStyleItalic">M. leprae</span> (RLEP) que se encuentra repetido 28 veces en su genoma, con una sensibilidad hasta 1.000 veces mayor que otros métodos de amplificación basados en otras secuencias. Los primers fueron diseñados para amplificar fragmentos de pequeño tamaño (alrededor de 100 pares de bases) lo cual hace a este método apropiado para su uso en pacientes tratados, o en muestras que puedan contener ADN degradado. Los oligonucleótidos usados fueron los primers LP1 y LP2 o primers externos que amplificaron una secuencia de de 129<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>pb del elemento RLEP. El segundo set primers LP3 y LP4 hibridó dentro de la secuencia anterior para amplificar un producto final de 99<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>pb (<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#t0005">tabla 1</a>).</p><elsevierMultimedia ident="t0005"></elsevierMultimedia><p id="p0030" class="elsevierStylePara elsevierViewall">La amplificación por n-PCR de la composición final de la mezcla de PCR (50<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span><span class="elsevierStyleItalic">μ</span>l) fue: Buffer verde Promega Go Taq 5X; MgCl2 Promega 1,5<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mmol; Tween 20 0,01%v/v; dNTPS 200<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mmol (c/u); y Go Taq ADN polimerasa Promega 1,25 unidades. Los primers se usaron a una concentración final de 60<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>nM (a partir de la técnica de Donoghue et al se ensayaron las concentraciones de primers enzima, Mg2+ y dNTPS hasta alcanzar el nivel óptimo de la reacción.</p><p id="p0035" class="elsevierStylePara elsevierViewall">En el primer paso de amplificación se emplearon los primers externos LP1 y LP2 y como templado 5<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span><span class="elsevierStyleItalic">μ</span>l de ADN extraído de la muestra. En el segundo paso de amplificación se emplearon los primers internos LP3 y LP4 y como templado (5<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>μl) del producto de amplificación del primer paso. La amplificación se realizó de la siguiente forma; después de un paso de desnaturalización de 4<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>min a 94<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>°C, le siguieron 25 ciclos de amplificación, 94<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>°C por 40 segundo, hibridación de 58<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>°C por 1<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>min y extensión de 72<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>°C por 20 segundos con un incremento de 1 segundo por ciclo. Finalmente una extensión de 1<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>min a 72<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>°C<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib20"><span class="elsevierStyleSup">20</span></a>. Para visualizar los productos de la PCR se emplearon geles de agarosa al 2% en TBE buffer (0,09<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>M tris-borate y 0,002M EDTA), con bromuro de etidio 10<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mg/ml cada 100<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>ml de agarosa. Para el control de calidad de la muestra y presencia de inhibidores se utilizó la amplificación del gen de la B- globina humana.</p></span><span id="s0015" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle">Resultados</span><p id="p0040" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Se obtuvieron muestras de moco nasal de 26 contactos intradomiciliarios de 26 pacientes con lepra diagnosticados clínica e histopatológicamente entre octubre de 2008 a octubre de 2009 por el programa local de control de lepra de la provincia del Chaco; 20 pacientes fueron clasificados como multibacilares (MB) y 6 como paucibacilares (PB), según la clasificación de la OMS (3). Se procesaron 26 muestras de moco nasal de los contactos intradomiciliarios de los pacientes y se detectó ADN de <span class="elsevierStyleItalic">M. leprae</span> en 5 de ellas (19,23%). El ADN de los controles positivos incluidos se amplificó en todos los casos. El agua ultrapura utilizada como controles negativos no se amplificaron en ningún caso. Se obtuvieron resultados iguales en cuanto a la positividad de las muestras y a la ausencia de inhibidores de la reacción. Todos los contactos estudiados, sin signos ni síntomas de enfermedad, provenían de áreas de alta prevalencia de lepra; 12 de ellos (46,15%) eran contactos intradomiciliarios de casos MB, y 14 (53,84%) de casos PB; el 42,31% eran hombres y el 57,69%, mujeres y los antecedentes de vacunación con BCG fueron positivos en el 69,23%, negativos en el 30,77%, de los cuales se detectó positividad para <span class="elsevierStyleItalic">M. leprae</span> en 5 convivientes de pacientes con lepra MB 4 casos y PB 1 caso; siendo de sexo femenino 4 de los 5 casos detectados y no presentaron antecedentes de vacunación con BCG. El 100% de los contactos tenían un parentesco en primer grado con el caso índice. La mayoría de los contactos eran de procedencia urbana. El promedio de convivientes por caso índice fue de 3. El 50% de los convivientes tenían un promedio de 32 años, mientras que el 50% de los casos índice tenían 46 años. Los convivientes habían vivido con el caso índice una media de 15 años. Todos los convivientes procedían de municipios con alta prevalencia.</p></span><span id="s0020" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle">Discusión</span><p id="p0045" class="elsevierStylePara elsevierViewall">En este estudio se detectó <span class="elsevierStyleItalic">M. leprae</span> en el moco nasal utilizando la técnica n-PCR descripta por Donoghue et al, con algunas modificaciones; esta técnica tiene una sensibilidad hasta 1.000 veces mayor que otros métodos de amplificación donde la cantidad y calidad de ADN es baja, según refieren numerosos autores. La aplicación de esta prueba a los contactos intradomiciliarios permitirá detectar nuevos casos antes que la baciloscopía<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib21"><span class="elsevierStyleSup">21</span></a>. En el presente estudio utilizamos muestras de moco nasal teniendo en cuenta que las vías respiratorias altas, y especialmente la mucosa de las fosas nasales, son una de las principales vías de transmisión<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib22"><span class="elsevierStyleSup">22</span></a>. Como han sugerido previamente varios investigadores<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib15"><span class="elsevierStyleSup">15</span></a>, no se puede descartar la posibilidad de encontrar «portadores pasivos», que sin tener infección subclínica, tengan bacilos en sus fosas nasales; sin embargo, esto no invalida la utilidad de la prueba para la monitorización poblacional de comunidades de alto riesgo. Controlando todos los factores inhibidores presentes en la muestra y optimizando todas las condiciones necesarias ya descritas, se obtiene una buena amplificación. El porcentaje de casos positivos detectados en este estudio es del 19,23%; es similar al registrado en estudios anteriores<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib23"><span class="elsevierStyleSup">23</span></a> que también utilizaron la PCR en el moco nasal, lo cual confirma la utilidad de esta prueba en la detección de la infección subclínica. Respecto de la distribución por sexo de los convivientes positivos por PCR se observó predominio femenino, coincidiendo con otros estudios<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib24"><span class="elsevierStyleSup">24</span></a>; la edad media de los convivientes fue de 42 años y la media del tiempo de conviviencia fue de 15 años, estos datos son similares a los reportados en otros estudios<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib24"><span class="elsevierStyleSup">24</span></a>. Los convivientes de primer grado tienen una probabilidad de infección mayor que el resto de los convivientes, debido a que se requiere un contacto cercano y prolongado para una transmisión óptima<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib21"><span class="elsevierStyleSup">21</span></a>. Otra observación llamativa pero que no llegó a ser significativa, posiblemente por el pequeño tamaño de la muestra, fue la mayor procedencia rural de los convivientes infectados con el bacilo, detectados por PCR positiva, esto se explicaría por la mayor posibilidad de supervivencia del bacilo en condiciones subóptimas de la vivienda, como fue descripto por otros autores<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib21"><span class="elsevierStyleSup">21</span></a>. No obstante, al revisar las estadísticas argentinas de los nuevos casos de lepra se observa que son principalmente urbanos, discrepancia que seguramente puede explicarse por la centralización de la atención<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib3"><span class="elsevierStyleSup">3</span></a>. Creemos que la principal utilidad de esta técnica de PCR será la posibilidad de poner en práctica un sistema de vigilancia que permita realizar una monitorización de las poblaciones de alto riesgo para detectar precozmente la enfermedad, mejorar la búsqueda activa de los casos y mantener los logros alcanzados por los programas locales de control de la lepra<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib25"><span class="elsevierStyleSup">25</span></a>, tal como lo sugiere la Organización Panamericana de la Salud<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib26"><span class="elsevierStyleSup">26</span></a>; lo que se propone en este estudio es hacer uso de las nuevas tecnologías que permitan interrumpir la cadena de transmisión de esta enfermedad<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib27"><span class="elsevierStyleSup">27</span></a>.</p></span><span id="s0025" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle">Conclusión</span><p id="p0050" class="elsevierStylePara elsevierViewall">La detección por biología molecular del <span class="elsevierStyleItalic">M. leprae</span> en muestras de moco nasal de contactos intradomiciliarios sanos de pacientes con lepra constituye un valioso método para detectar la presencia de infección subclínica. En el futuro podría ser una herramienta más para ayudar a mejorar el funcionamiento de los programas de control de lepra.</p></span></span>" "textoCompletoSecciones" => array:1 [ "secciones" => array:10 [ 0 => array:2 [ "identificador" => "xres122661" "titulo" => array:6 [ 0 => "Resumen" 1 => "Antecedentes" 2 => "Objetivo" 3 => "Métodos" 4 => "Resultados" 5 => "Conclusiones" ] ] 1 => array:2 [ "identificador" => "xpalclavsec109946" "titulo" => "Palabras clave" ] 2 => array:2 [ "identificador" => "xres122662" "titulo" => array:6 [ 0 => "Abstrat" 1 => "Background" 2 => "Objective" 3 => "Methods" 4 => "Results" 5 => "Conclusions" ] ] 3 => array:2 [ "identificador" => "xpalclavsec109947" "titulo" => "Keywords" ] 4 => array:2 [ "identificador" => "s0005" "titulo" => "Introducción" ] 5 => array:2 [ "identificador" => "s0010" "titulo" => "Materiales y métodos" ] 6 => array:2 [ "identificador" => "s0015" "titulo" => "Resultados" ] 7 => array:2 [ "identificador" => "s0020" "titulo" => "Discusión" ] 8 => array:2 [ "identificador" => "s0025" "titulo" => "Conclusión" ] 9 => array:1 [ "titulo" => "Bibliografía" ] ] ] "pdfFichero" => "main.pdf" "tienePdf" => true "fechaRecibido" => "2010-04-09" "fechaAceptado" => "2010-05-18" "PalabrasClave" => array:2 [ "es" => array:1 [ 0 => array:4 [ "clase" => "keyword" "titulo" => "Palabras clave" "identificador" => "xpalclavsec109946" "palabras" => array:4 [ 0 => "Lepra" 1 => "n-PCR" 2 => "Subclínica" 3 => "Convivientes" ] ] ] "en" => array:1 [ 0 => array:4 [ "clase" => "keyword" "titulo" => "Keywords" "identificador" => "xpalclavsec109947" "palabras" => array:4 [ 0 => "Leprosy" 1 => "n-PCR" 2 => "Subclinical" 3 => "Household contacts" ] ] ] ] "tieneResumen" => true "resumen" => array:2 [ "es" => array:2 [ "titulo" => "Resumen" "resumen" => "<span class="elsevierStyleSectionTitle">Antecedentes</span><p id="sp0010" class="elsevierStyleSimplePara elsevierViewall">El descenso mundial de la prevalencia de la lepra no ha coincidido con un descenso de su incidencia, hecho que podría explicarse por la presencia de infecciones subclínicas bacilíferas en la comunidad.</p> <span class="elsevierStyleSectionTitle">Objetivo</span><p id="sp0015" class="elsevierStyleSimplePara elsevierViewall">El objetivo de este estudio consistió en detectar <span class="elsevierStyleItalic">Mycobacterium leprae</span> en muestras de moco nasal de contactos intradomiciliarios, sin signos ni síntomas, de pacientes con lepra empleando una prueba de reacción en cadena de la polimerasa anidada (n-PCR), con el fin de utilizar dicha técnica en la monitorización de poblaciones de alto riesgo.</p> <span class="elsevierStyleSectionTitle">Métodos</span><p id="sp0020" class="elsevierStyleSimplePara elsevierViewall">Se utilizó la técnica n-PCR utilizando un par de iniciadores LP1 y LP2 externos para amplificar un fragmento de 129 pares de bases (pb) del elemento RLEP3 región o secuencia X17153 de <span class="elsevierStyleItalic">M. leprae</span> y un segundo par de iniciadores LP3 y LP4 que hibridó dentro de la secuencia anterior para amplificar un producto final de 99 pares de bases. La prueba se aplicó a 26 contactos intradomiciliarios de pacientes procedentes de áreas con alta prevalencia de lepra.</p> <span class="elsevierStyleSectionTitle">Resultados</span><p id="sp0025" class="elsevierStyleSimplePara elsevierViewall">Se detectó la presencia del bacilo en muestras de moco nasal de 5 (19,23%) de 26 contactos intradomiciliarios sanos. Todos los contactos intradomiciliarios de casos que resultaron positivos (n=5) procedían de municipios con una prevalencia alta.</p> <span class="elsevierStyleSectionTitle">Conclusiones</span><p id="sp0030" class="elsevierStyleSimplePara elsevierViewall">La técnica n-PCR es una herramienta útil de detección y seguimiento precoz de posibles casos de lepra y se puede utilizar en la monitorización de poblaciones de alto riesgo. La técnica de PCR puede usarse en la detección subclinica de la infección por <span class="elsevierStyleItalic">M. leprae.</span></p>" ] "en" => array:2 [ "titulo" => "Abstrat" "resumen" => "<span class="elsevierStyleSectionTitle">Background</span><p id="sp0035" class="elsevierStyleSimplePara elsevierViewall">While the prevalence of leprosy has declined around the world, there has not been a corresponding decrease in its incidence, which could be explained by the presence of subclinical bacilliferous infections in the community.</p> <span class="elsevierStyleSectionTitle">Objective</span><p id="sp0065" class="elsevierStyleSimplePara elsevierViewall">The objective of this study was to investigate the use of a nested-polymerase chain reaction (n-PCR) test to detect <span class="elsevierStyleItalic">Mycobacterium leprae</span> in samples of nasal mucus from asymptomatic household contacts of patients with leprosy and if can be used to monitor high-risk populations.</p> <span class="elsevierStyleSectionTitle">Methods</span><p id="sp0040" class="elsevierStyleSimplePara elsevierViewall">We standardized and optimized a n-PCR technique using a pair of primers LP1 and LP2 external to amplify a fragment of 129 base pairs (bp) region RLEP3 element or sequence X17153 from <span class="elsevierStyleItalic">M. leprae</span> and a second pair of primers LP3 and LP4 that hybridize within the above sequence to amplify a final product of 99 base pairs. We applied the PCR test to 26 healthy household contacts of leprosy patients from area where there was a high prevalence of the disease.</p> <span class="elsevierStyleSectionTitle">Results</span><p id="sp0045" class="elsevierStyleSimplePara elsevierViewall">Bacillus was detected in the nasal mucus samples of 5 (19,23%) of the 26 household contacts. The PCR positive household contacts of leprosy cases were from municipalities with very high prevalence levels.</p> <span class="elsevierStyleSectionTitle">Conclusions</span><p id="sp0050" class="elsevierStyleSimplePara elsevierViewall">The n-PCR is useful as a tool for detection and early follow-up of possible leprosy cases. It can be used to monitor high-risk populations. Developing and using a PCR test to detect subclinical <span class="elsevierStyleItalic">Mycobacterium leprae</span> infection</p>" ] ] "multimedia" => array:1 [ 0 => array:7 [ "identificador" => "t0005" "etiqueta" => "Tabla 1" "tipo" => "MULTIMEDIATABLA" "mostrarFloat" => true "mostrarDisplay" => false "tabla" => array:1 [ "tablatextoimagen" => array:1 [ 0 => array:2 [ "tabla" => array:1 [ 0 => """ <table border="0" frame="\n \t\t\t\t\tvoid\n \t\t\t\t" class=""><thead title="thead"><tr title="table-row"><td class="td" title="\n \t\t\t\t\ttable-head\n \t\t\t\t " align="center" valign="\n \t\t\t\t\ttop\n \t\t\t\t" style="border-bottom: 2px solid black">Primer \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n \t\t\t\t\ttable-head\n \t\t\t\t " align="center" valign="\n \t\t\t\t\ttop\n \t\t\t\t" style="border-bottom: 2px solid black">Residuo \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n \t\t\t\t\ttable-head\n \t\t\t\t " align="center" valign="\n \t\t\t\t\ttop\n \t\t\t\t" style="border-bottom: 2px solid black">Secuencia (5′ – 3′) \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td></tr></thead><tbody title="tbody"><tr title="table-row"><td class="td" title="\n \t\t\t\t\ttable-entry\n \t\t\t\t " align="center" valign="\n \t\t\t\t\ttop\n \t\t\t\t">LP1 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n \t\t\t\t\ttable-entry\n \t\t\t\t " align="center" valign="\n \t\t\t\t\ttop\n \t\t\t\t">490–509 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n \t\t\t\t\ttable-entry\n \t\t\t\t " align="center" valign="\n \t\t\t\t\ttop\n \t\t\t\t">TGCATGTCATGGCCTTGAGG \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td" title="\n \t\t\t\t\ttable-entry\n \t\t\t\t " align="center" valign="\n \t\t\t\t\ttop\n \t\t\t\t">LP2 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n \t\t\t\t\ttable-entry\n \t\t\t\t " align="center" valign="\n \t\t\t\t\ttop\n \t\t\t\t">618–599 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n \t\t\t\t\ttable-entry\n \t\t\t\t " align="center" valign="\n \t\t\t\t\ttop\n \t\t\t\t">CACCGATACCAGCGGCAGAA \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td" title="\n \t\t\t\t\ttable-entry\n \t\t\t\t " align="center" valign="\n \t\t\t\t\ttop\n \t\t\t\t">LP3 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n \t\t\t\t\ttable-entry\n \t\t\t\t " align="center" valign="\n \t\t\t\t\ttop\n \t\t\t\t">505–522 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n \t\t\t\t\ttable-entry\n \t\t\t\t " align="center" valign="\n \t\t\t\t\ttop\n \t\t\t\t">TGAGGTGTCGGCGTGGTC \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td" title="\n \t\t\t\t\ttable-entry\n \t\t\t\t " align="center" valign="\n \t\t\t\t\ttop\n \t\t\t\t">LP4 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n \t\t\t\t\ttable-entry\n \t\t\t\t " align="center" valign="\n \t\t\t\t\ttop\n \t\t\t\t">603–586 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n \t\t\t\t\ttable-entry\n \t\t\t\t " align="center" valign="\n \t\t\t\t\ttop\n \t\t\t\t">CAGAAATGGTGCAAGGGA \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td></tr></tbody></table> """ ] "imagenFichero" => array:1 [ 0 => "xTab209960.png" ] ] ] ] "descripcion" => array:1 [ "es" => "<p id="sp0005" class="elsevierStyleSimplePara elsevierViewall">Secuencia de oligonucleótidos usados en los primeros para amplificar el elemento repetitivo específico de <span class="elsevierStyleItalic">Mycobacterius leprae</span></p>" ] ] ] "bibliografia" => array:2 [ "titulo" => "Bibliografía" "seccion" => array:1 [ 0 => array:2 [ "identificador" => "bb0005" "bibliografiaReferencia" => array:27 [ 0 => array:3 [ "identificador" => "bib1" "etiqueta" => "1" "referencia" => array:1 [ 0 => array:2 [ "contribucion" => array:1 [ 0 => array:2 [ "titulo" => "The genome of Mycobacterium leprae: a minimal mycobacterial gene set" "autores" => array:1 [ 0 => array:2 [ "etal" => false "autores" => array:2 [ 0 => "V.D. 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| 2024 Octubre | 0 | 11 | 11 |
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