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Ginecología Bancos de semen en la era de la microinyección espermática intracitoplásmática
Sperm banks in the era of intracytoplasmatic sperm injection
R. Núñez Calonge, J. Heredia Caicedo, S. Cortés Gallego, J M. González Casbas, J. Alsina Álvarez, P. Caballero Peregrín
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ha permitido la paternidad a parejas que&#44; de otro modo&#44; hubieran tenido que recurrir a la inseminaci&#243;n artificial con semen de donante &#40;IAD&#41;&#46;</p><p class="elsevierStylePara">Los bancos de semen&#44; sin embargo&#44; al tiempo que han visto reducir su utilizaci&#243;n en el caso de la IAD&#44; han experimentado un auge en cuanto a la crioconservaci&#243;n de espermatozoides de varones que por diversas circunstancias los emplear&#225;n posteriormente en reproducci&#243;n asistida&#46;</p><p class="elsevierStylePara">En este trabajo se eval&#250;an&#44; por una parte&#44; los resultados obtenidos en nuestro banco de semen desde 1993 hasta 1996&#44; y&#44; por otra&#44; su empleo como almacenamiento de gametos previo tratamiento de quimio y&#47;o radioterapia&#46; En las fechas mencionadas se han realizado un total de 781 ciclos de IAD a 257 pacientes&#44; consigui&#233;ndose una tasa de gestaci&#243;n por ciclo del 20&#44;2&#37; y del 61&#44;4&#37; por paciente&#44; siendo la tasa acumulativa al cabo de los seis ciclos del 87&#37;&#46; En cuanto a los eyaculados de pacientes con c&#225;ncer&#44; se han criopreservado muestras de un total de 163 pacientes&#44; de los cuales&#44; la mayor parte &#40;41&#37;&#41; presentaban c&#225;ncer testicular&#46; Solamente el 5&#37; de todos los pacientes fueron azoosp&#233;rmicos&#44; frente a un 32&#37; postratamiento con quimioterapia&#46;</p><p class="elsevierStylePara">Todos estos datos nos llevan a la conclusi&#243;n de que los bancos de semen en la actualidad son de vital importancia no solamente para la criopreservaci&#243;n de semen de donante para IAD&#44; sino para el almacenamiento y posterior utilizaci&#243;n en reproducci&#243;n asistida de eyaculados valiosos&#46;</p><p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold">PALABRAS CLAVE</span></p><p class="elsevierStylePara">Bancos de semen&#59; Espermatozoides&#59; Criopreservaci&#243;n&#59; Inseminaci&#243;n artificial de donante&#59; Quimioterapia&#46;</p><p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold"><span class="elsevierStyleItalic">ABSTRACT</span></span></p><p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleItalic">The recent development of certain assisted reproduction techniques&#44; as the intracitoplasmatic sperm injection &#40;ICSI&#41; has permitted the paternity of couples that otherwise would have been obliged to utilize donor sperm insemination&#46; Sperm banks have seen their use reduced in donor insemination cases&#44; however they have simultaneously experimented a boom in the criopreservation of male&#39;&#39;s sperm that for different reasons will be employed later in assisted reproduction&#46;</span></p><p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleItalic">In this paper we present the results obtained in our sperm bank since 1993 until today as well as its use for gamete storing before chemo or radiotherapy&#46; In the time period mentioned a total of 781 cycles have been performed to 257 patiens&#44; with a pregnancy per cycle rate of 20&#46;2&#37; and a pregnancy per patient rate of 61&#46;4&#37; and a six months cumulative rate of 87&#37;&#46; As far as the ejaculates of patiens with cancer are concerned samples from 163 patiens&#44; the majority of whom suffered testicular cancer&#44; were criopreserved&#46; Of these patiens only 5&#37; were azoospermic&#44; but this percentage increased to 32&#37; after chemotherapy&#46;</span></p><p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleItalic">All these data make us conclude that sperm banks nowadays are critical&#44; not only for the criopreservation of donor semen but also for storing and subsequent use of valuable ejaculates in assisted reproduction&#46;</span></p><p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold"><span class="elsevierStyleItalic">KEY WORDS</span></span></p><p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleItalic">Sperm banks&#59; Spermatozoa&#59; Cryopreservation&#59; Artificial inseminatio donor sperm&#59; Chemotherapy&#46;</span></p><hr></hr><p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold">INTRODUCCI&#211;N</span></p><p class="elsevierStylePara">La inseminaci&#243;n artificial con semen de donante &#40;IAD&#41;&#44; ha experimentado un notable descenso durante los &#250;ltimos a&#241;os como consecuencia sobre todo&#44; de la aparici&#243;n de la microinyecci&#243;n esperm&#225;tica &#40;ICSI&#41; <span class="elsevierStyleSup">&#40;1&#44;2&#41;</span>&#46; La azoospermia ha sido hasta ahora la indicaci&#243;n m&#225;s frecuente para el empleo de la IAD&#44; pero la posibilidad de obtener embarazos&#44; no solamente en casos de azoospermias obstructivas <span class="elsevierStyleSup">&#40;3&#41;</span> sino incluso con rangos de FSH elevados <span class="elsevierStyleSup">&#40;4&#41;</span>&#44; ha desviado a muchas parejas que pod&#237;an haber sido candidatas al banco de semen en otro tiempo&#46;</p><p class="elsevierStylePara">Las indicaciones de IAD&#44; por lo tanto&#44; han quedado reducidas a&#58; posibilidad de transmisi&#243;n de enfermedades hereditarias a la descendencia&#44; incapacidad absoluta de los espermatozoides para fecundar &#40;fallo de ICSI por causa masculina&#41;&#44; ausencia completa de espermatog&#233;nesis o&#44; desde el punto de vista social&#44; para mujeres solas&#46;</p><p class="elsevierStylePara">Sin embargo&#44; la utilizaci&#243;n de los bancos de semen no se encuentra en absoluto en declive&#46; El empleo de t&#233;cnicas de reproducci&#243;n asistida como la mencionada anteriormente &#40;ICSI&#41;&#44; cada vez con m&#225;s frecuencia&#44; convierte en valiosos los espermatozoides obtenidos a trav&#233;s de biopsia de test&#237;culo o previamente a tratamientos causantes de esterilidad &#40;radio&#47;quimioterapia&#44; por ejemplo&#41;&#46;</p><p class="elsevierStylePara">En este trabajo evaluamos&#44; por una parte&#44; los resultados obtenidos en nuestro banco de semen&#44; analizando la utilizaci&#243;n de la IAD en estos &#250;ltimos a&#241;os&#44; y&#44; por otra&#44; su empleo como medio de almacenamiento de gametos que se utilizar&#225;n posteriormente en reproducci&#243;n asistida&#46;</p><p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold">MATERIAL Y M&#201;TODOS</span></p><p class="elsevierStylePara">1&#46; <span class="elsevierStyleBold">Inseminaci&#243;n artificial con semen de donante</span></p><p class="elsevierStylePara">a&#41;<span class="elsevierStyleBold"><span class="elsevierStyleItalic">Diagn&#243;stico y tratamiento de las pacientes</span></span></p><p class="elsevierStylePara">Los distintos diagn&#243;sticos incluidos en las parejas de este estudio vienen reflejados en la tabla 1&#46;</p><table><tr><td colspan="5" width="400"><span class="elsevierStyleBold">Tabla 1 Clasificaci&#243;n pacientes &#40;n &#61; 257&#41; de IAD&#44; seg&#250;n los distintos diagn&#243;sticos</span></td></tr><tr><td width="400" colspan="5"><hr></hr></td></tr><tr align="CENTER"><td colspan="2" width="128"><span class="elsevierStyleItalic">Factor femenino</span></td><td width="90"><span class="elsevierStyleItalic">N&#250;mero de pacientes</span></td><td width="91"><span class="elsevierStyleItalic">Factor masculino</span></td><td width="91"><span class="elsevierStyleItalic">N&#250;mero de pacientes</span></td></tr><tr><td width="400" colspan="5"><hr></hr></td></tr><tr><td width="109">Tub&#225;rico</td><td width="19"></td><td width="90">12</td><td width="91"> Azoospernia</td><td width="91">152</td></tr><tr><td width="109">Uterino</td><td width="19"></td><td width="90">4</td><td width="91"> Criptozoospermia</td><td width="91">78</td></tr><tr><td width="109">Endometrial</td><td width="19"></td><td width="90">10</td><td width="91">Causas gen&#233;ticas</td><td width="91">22</td></tr><tr><td width="109">Ovulatorio</td><td width="19"></td><td width="90">25</td><td width="91">Otros</td><td width="91">25</td></tr><tr><td colspan="2" width="128">Varios factores asociados</td><td width="90">18</td></tr><tr><td width="109">TOTAL</td><td width="19"></td><td width="90">69</td><td width="91">TOTAL</td><td width="91">257</td></tr><tr><td width="400" colspan="5"><hr></hr></td></tr></table><p class="elsevierStylePara">Todas las parejas incluidas en este estudio fueron sometidas al mismo protocolo de estudio y diagn&#243;stico&#44; seg&#250;n normativa de la OMS <span class="elsevierStyleSup"> &#40;6&#41;</span>&#46; Las mujeres normoovuladoras realizaron tres ciclos de IAD espont&#225;neos&#44; determin&#225;ndose pico de LH por medio de anticuerpos monoclonales &#40;Conceive&#44; InmunoHospitalar S&#46; L&#46;&#44; Madrid&#41;&#46; Transcurridos tres ciclos de IAD sin gestaci&#243;n se inicia inducci&#243;n de ovulaci&#243;n con gonadotropinas&#46; Igualmente&#44; las mujeres con disfunciones ovulatorias comienzan la inducci&#243;n desde el primer ciclo&#46;</p><p class="elsevierStylePara">La inducci&#243;n de la ovulaci&#243;n se realiza seg&#250;n pauta cl&#225;sica&#44; comenzando con dos ampollas de FSH &#40;Neofertinorm&#44; Serono&#41; desde el tercer d&#237;a del ciclo&#44; hasta el d&#237;a s&#233;ptimo en que se realiza control ecogr&#225;fico y determinaci&#243;n de 17 &#223;-estradiol&#46; A partir de aqu&#237;&#44; la administraci&#243;n de FSH se realizar&#225; a demanda&#44; hasta que aparezca uno o m&#225;s fol&#237;culos mayores de 17 mm y E2 &#62; 300 pg&#47;ml&#46; En este momento se realiza la administraci&#243;n de 10&#46;000 UI de hCG &#40;Profasi&#44; Serono&#41;&#44; realiz&#225;ndose dos inseminaciones a las 12 y 24 horas&#46;</p><p class="elsevierStylePara">La fase l&#250;tea se suplementa con 200 mg&#47;d&#237;a de progesterona vaginal &#40;Progeffik&#44; Effik&#41;&#46;</p><p class="elsevierStylePara">En el caso de realizarse IAD con ciclo espont&#225;neo&#44; la inseminaci&#243;n &#40;12-24 horas postpico de LH&#41; se realiza intracervical&#44; empleando el semen tras la descongelaci&#243;n durante cinco minutos a 37 &#176;C al ba&#241;o Mar&#237;a&#46; Si el ciclo es inducido&#44; se realiza inseminaci&#243;n intrauterina&#44; procesando el semen descongelado por swim-up <span class="elsevierStyleSup">&#40;7&#41;</span>&#44; y empleando un m&#237;nimo de dos millones de espermatozoides m&#243;viles por ml <span class="elsevierStyleSup">&#40;8&#41;</span>&#46; El swim-up se realiza con el medio de cultivo sperm &#40;Medi-cult&#41; en una diluci&#243;n 1&#58;1 y centrifugando a 300 g durante diez minutos&#46; Se a&#241;aden de 0&#44;3 a 0&#44;5 de medio y se deja en estufa de CO<span class="elsevierStyleInf">2</span> a 37 &#176;C&#46; El sobrenadante se separa del sedimento despu&#233;s de transcurrir una hora de incubaci&#243;n&#46;</p><p class="elsevierStylePara">b&#41;<span class="elsevierStyleBold"><span class="elsevierStyleItalic">Congelaci&#243;n y descongelaci&#243;n del eyaculado</span></span></p><p class="elsevierStylePara">Los donantes admitidos en el banco de semen cumpl&#237;an todos los requisitos b&#225;sicos necesarios seg&#250;n normas de la Sociedad Americana de Fertilidad <span class="elsevierStyleSup"> &#40;9&#41;</span> y la Ley de Reproducci&#243;n Asistida &#40;Ley 35&#47;1988&#44; de 22 de noviembre&#41; <span class="elsevierStyleSup">&#40;10&#41;</span>&#46; Los eyaculados criopreservados presentaban&#44; en todos los casos&#44; m&#225;s de 40 millones de espermatozoides m&#243;viles por eyaculado&#44; con morfolog&#237;a normal en m&#225;s del 50&#37; de las c&#233;lulas&#46;</p><p class="elsevierStylePara">&#218;nicamente se emplearon para realizar la inseminaci&#243;n artificial&#44; tanto si se procesaba la muestra para inseminaci&#243;n intrauterina como si se utilizaba anteportio&#44; las dosis con m&#225;s de 20 millones de espermatozoides m&#243;viles por ml postdescongelaci&#243;n&#46;</p><p class="elsevierStylePara">La criopreservaci&#243;n de semen se realiz&#243; utilizando el sistema de p&#237;ldoras y se almacen&#243; en criotubos en nitr&#243;geno l&#237;quido a &#173;196 &#176;C <span class="elsevierStyleSup">&#40;11&#44;12&#41;&#46;</span> Este sistema de congelaci&#243;n se caracteriza por la bajada lenta de temperatura&#44; de manera gradual&#44; desde 25 &#40;temperatura ambiente&#41;&#44; hasta &#173;80 &#176;C en nieve carb&#243;nica&#44; y posteriormente &#173;196 &#176;C en nitr&#243;geno l&#237;quido&#46; La descongelaci&#243;n de una sola p&#237;ldora previa a la utilizaci&#243;n de la dosis completa&#44; nos permite poder desechar o elegir esa dosis&#44; as&#237; como obtener informaci&#243;n del estado del eyaculado postdescongelaci&#243;n sin tener que desperdiciar la dosis completa&#44; como ocurrir&#237;a si emple&#225;ramos pajuelas como m&#233;todo de congelaci&#243;n&#46;</p><p class="elsevierStylePara">Cada criotubo o dosis cuenta con un total de 10 p&#237;ldoras&#44; que suponen un volumen de 1 ml&#44; una vez descongelado&#46; En cada inseminaci&#243;n se utiliza una dosis &#40;tanto si se emplea simplemente descongelado como lavado&#41;&#46;</p><p class="elsevierStylePara">El diluyente utilizado fue el Criosperm II formado por la combinaci&#243;n de los tampones TES y Tris &#40;TEST&#41; <span class="elsevierStyleSup">&#40;13&#41;</span>&#44; a una concentraci&#243;n 1&#58;1 con el eyaculado&#46;</p><p class="elsevierStylePara">La descongelaci&#243;n se realiz&#243; a 37 &#176;C al ba&#241;o mar&#237;a&#44; ya que es el m&#233;todo que ofrece mejores tasas de conservaci&#243;n de movilidad esperm&#225;tica&#44; tanto para eyaculados normales como patol&#243;gicos <span class="elsevierStyleSup">&#40;14&#41;</span>&#46;</p><p class="elsevierStylePara">2&#46; <span class="elsevierStyleBold">Criopreservaci&#243;n de eyaculados prequimio y radioterapia</span></p><p class="elsevierStylePara">Durante el mismo per&#237;odo de tiempo mencionado anteriormente &#40;1993 a 1996&#41;&#44; se ha congelado semen de 163 pacientes prequimio-radioterapia&#44; con diversas patolog&#237;as incluidas en la tabla 2 El 41&#37; de los pacientes congelaron semen por padecer seminoma testicular&#44; y el resto se reparti&#243; entre enfermedad de Hodking &#40;19&#37;&#41;&#44; leucemia &#40;18&#37;&#41;&#44; linfoma no Hodking &#40;7&#37;&#41; y otros &#40;14&#37;&#41;</p><table><tr><td colspan="2"><span class="elsevierStyleBold">Tabla 2 Principales patolog&#237;as de los pacientes que congelan semen previa quimio&#47;radioterapia</span></td></tr><tr><td width="400" colspan="2"><hr></hr></td></tr><tr><td><span class="elsevierStyleItalic">Patolog&#237;a</span></td><td><span class="elsevierStyleItalic">N&#250;mero de pacientes &#40;&#37;&#41;</span></td></tr><tr><td width="400" colspan="2"><hr></hr></td></tr><tr><td>C&#225;ncer test&#237;culo</td><td>67 &#40;41&#41;</td></tr><tr><td>Hodgkin</td><td>31 &#40;19&#41;</td></tr><tr><td>Leuciemia</td><td>30 &#40;18&#41;</td></tr><tr><td>Linfoma</td><td>12 &#40;7&#41;</td></tr><tr><td>Otros</td><td>23 &#40;14&#41;</td></tr><tr><td>TOTAL</td><td>163</td></tr><tr><td width="400" colspan="2"><hr></hr></td></tr></table><p class="elsevierStylePara">Los eyaculados se criopreservaron en dos bancos de semen&#44; ambos bajo la direcci&#243;n del doctor Caballero Peregr&#237;n&#46; Acudieron 109 pacientes al banco del Hospital Ram&#243;n y Cajal de Madrid&#44; y 54 al banco del Doctor Caballero Peregr&#237;n S&#46; L&#46; En ambos casos se emple&#243; el mismo m&#233;todo de criopreservaci&#243;n mencionado anteriormente para la inseminaci&#243;n con semen de donante&#44; la misma geometr&#237;a de envase &#40;p&#237;ldoras en criotubos&#41;&#44; e id&#233;ntico crioprotector &#40;Criosperm II&#41; <span class="elsevierStyleSup"> &#40;13&#41;</span>&#46;</p><p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold"><span class="elsevierStyleItalic">Estudio estad&#237;stico</span></span></p><p class="elsevierStylePara">El estudio estad&#237;stico fue realizado utilizando el test de Kolmogorof-Smirnov&#44; la  &#42;<span class="elsevierStyleSup">2</span>&#44; con los programas Sigma &#40;Chorus line&#41; y Bansem <span class="elsevierStyleSup">&#40;8&#41;</span>&#46;</p><p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold">RESULTADOS</span></p><p class="elsevierStylePara">1&#46; <span class="elsevierStyleBold">Inseminaci&#243;n artificial con semen de donante</span></p><p class="elsevierStylePara">Desde 1993 hasta 1996 se han realizado un total de 781 ciclos en 257 pacientes&#44; lo que representa un promedio de 3&#44;12 inseminaciones por paciente&#46; La edad media de las pacientes fue de 32 a&#241;os&#44; con una esterilidad media de tres a&#241;os de evoluci&#243;n&#46; En este per&#237;odo se han obtenido 158 embarazos&#44; 14 de ellos m&#250;ltiples &#40;8&#44;8&#37;&#41;&#44; y 24 abortos &#40;15&#37;&#41;&#46; La tasa de gestaci&#243;n por ciclo es del 20&#44;2&#37; y del 61&#44;4&#37; por paciente &#40;tabla 3&#41;&#46;</p><table><tr><td colspan="3"><span class="elsevierStyleBold">Tabla 3 N&#250;mero de pacientes&#44; ciclos y tasas de gestaci&#243;n desde 1993 hasta 1996 en Inseminaci&#243;n Artificial con semen de donante</span></td></tr><tr><td width="400" colspan="3"><hr></hr></td></tr><tr><td colspan="2">N&#46;&#186; de pacientes</td><td>257</td></tr><tr><td>N&#46;&#186; ciclos</td><td></td><td>781</td></tr><tr><td colspan="2">N&#46;&#186; ciclos&#47;paciente</td><td>3&#44;0</td></tr><tr><td>Gestaciones</td><td></td><td>158</td></tr><tr><td>M&#250;ltiples</td><td></td><td>14 &#40;8&#44;85&#41;</td></tr><tr><td>Abortos</td><td></td><td>24 &#40;15&#37;&#41;</td></tr><tr><td>Gestaci&#243;n&#47;ciclo</td><td></td><td>20&#44;2&#37;</td></tr><tr><td colspan="2"> Gestaci&#243;n&#47;paciente</td><td>61&#44;4&#37;</td></tr><tr><td width="400" colspan="3"><hr></hr></td></tr></table><p class="elsevierStylePara">Durante este per&#237;odo de tiempo 42 pacientes han pasado de realizar IAD a ICSI&#44; lo cual ofrece una tasa de gestaci&#243;n por paciente del 73&#44;5&#37;&#46;</p><p class="elsevierStylePara">La tabla 4 muestra el porcentaje de gestaciones obtenido dependiendo del n&#250;mero de ciclo de inseminaci&#243;n&#44; as&#237; como la tasa acumulativa&#44; que alcanza&#44; cuando se realizan m&#225;s de seis ciclos de inseminaci&#243;n&#44; el 87&#37;&#46;</p><table><tr><td colspan="5" width="400"><span class="elsevierStyleBold">Tabla 4 Tasa acumulativa tras seis o m&#225;s ciclos de IAD desde 1993 hasta 1996</span></td></tr><tr><td width="400" colspan="5"><hr></hr></td></tr><tr align="CENTER"><td width="80"><span class="elsevierStyleItalic">N&#250;mero ciclo</span></td><td width="80"><span class="elsevierStyleItalic"> Pacientes</span></td><td width="80"><span class="elsevierStyleItalic"> Gestaciones</span></td><td width="80"><span class="elsevierStyleItalic"> Fecundabilidad</span></td><td width="80"><span class="elsevierStyleItalic"> Tasa</span></td></tr><tr><td width="80"></td><td width="80"></td><td width="80"></td><td width="80"></td><td width="80"><span class="elsevierStyleItalic"> acumulativa</span></td></tr><tr><td colspan="5" width="400"><hr></hr></td></tr><tr align="CENTER"><td width="80">1</td><td width="80">257</td><td width="80">47</td><td width="80">18&#44;2</td><td width="80">18&#44;2 &#177; 2&#44;2</td></tr><tr align="CENTER"><td width="80">2</td><td width="80">148</td><td width="80">29</td><td width="80">19&#44;5</td><td width="80">34&#44;1 &#177; 2&#44;1</td></tr><tr align="CENTER"><td width="80">3</td><td width="80">132</td><td width="80">27</td><td width="80">20&#44;4</td><td width="80">47&#44;2 &#177; 2&#44;4</td></tr><tr align="CENTER"><td width="80">4</td><td width="80">95</td><td width="80">14</td><td width="80">14&#44;7</td><td width="80">54&#44;7 &#177; 3&#44;1</td></tr><tr align="CENTER"><td width="80">5</td><td width="80">74</td><td width="80">12</td><td width="80">16&#44;2</td><td width="80">62&#44;2 &#177; 2&#44;8</td></tr><tr align="CENTER"><td width="80">6</td><td width="80">42</td><td width="80">14</td><td width="80">33&#44;3</td><td width="80">74&#44;5 &#177; 3&#44;1</td></tr><tr align="CENTER"><td width="80">&#62; 6</td><td width="80">33</td><td width="80">15</td><td width="80">45&#44;4</td><td width="80">87&#44;2 &#177; 3&#44;2</td></tr><tr><td width="80">TOTAL</td><td width="80">781</td><td width="80">158</td><td width="80">20&#44;2</td><td width="80">87&#44;2 &#177; 3&#44;2</td></tr><tr><td width="400" colspan="5"><hr></hr></td></tr></table><p class="elsevierStylePara">Si comparamos los resultados obtenidos en los ciclos que se han realizado con inducci&#243;n de la ovulaci&#243;n frente a los espont&#225;neos&#44; comprobamos que se han obtenido 100 embarazos en 463 ciclos inducidos &#40;21&#44;6&#37; gestaci&#243;n&#47;ciclo&#41;&#44; frente a 58 embarazos de 318 ciclos espont&#225;neos &#40;18&#44;2&#37; gestaci&#243;n&#47;ciclo&#41; &#40;tabla 5&#41;&#44; lo que no representa diferencias significativas&#46;</p><table><tr><td colspan="5"><span class="elsevierStyleBold">Tabla 5 Tasa de gestaci&#243;n en ciclos espont&#225;neos e inducidos de IAD</span></td></tr><tr><td width="400" colspan="5"><hr></hr></td></tr><tr><td colspan="2"><span class="elsevierStyleItalic">Ciclos espont&#225;neos</span></td><td></td><td colspan="2"><span class="elsevierStyleItalic">Ciclos inducidos</span></td></tr><tr><td width="400" colspan="5"><hr></hr></td></tr><tr><td>N&#46;&#186; ciclos</td><td></td><td>318</td><td>N&#46;&#186; ciclos</td><td>463</td></tr><tr><td>N&#46;&#186; embarazos</td><td></td><td>58</td><td>N&#46;&#186; embarazos</td><td>100</td></tr><tr><td colspan="2">&#37; gestaci&#243;n&#47;ciclo</td><td>18&#44;2&#37;</td><td>&#37; gestaci&#243;n&#47;ciclo</td><td>21&#44;6&#37;</td></tr><tr><td width="400" colspan="5"><hr></hr></td></tr><tr><td colspan="5"><span class="elsevierStyleItalic">N&#46;S&#46;</span></td></tr></table><p class="elsevierStylePara">Clasificando las distintas categor&#237;as etiol&#243;gicas de infertilidad en funci&#243;n de los resultados obtenidos &#40;azoospermia u otra patolog&#237;a para el var&#243;n&#44; y mujer con o sin alg&#250;n tipo de patolog&#237;a&#41; &#40;tabla 6&#41;&#44; hallamos la mayor tasa de gestaci&#243;n por ciclo en el caso de parejas con patolog&#237;a masculina distinta a la azoospermia y mujer con alg&#250;n tipo de patolog&#237;a &#40;24&#44;7&#37;&#41;&#44; as&#237; como en el grupo de varones azoosp&#233;rmicos y mujer normal &#40;23&#44;5&#37;&#41;&#46; Encontramos en estos dos grupos diferencias significativas &#40;p &#60; 0&#44;05&#41; respecto a los otros dos diagn&#243;sticos&#58; var&#243;n azoosp&#233;rmico&#47;mujer con patolog&#237;a &#40;17&#44;9&#37; gestaci&#243;n por ciclo&#41; y var&#243;n con patolog&#237;a distinta a la azoospermia&#47;mujer normal &#40;15&#37;&#41;&#46;</p><table><tr><td colspan="5" width="400"><span class="elsevierStyleBold">Tabla 6 Resultados de IAD dependiendo del diagn&#243;stico de la pareja</span></td></tr><tr><td width="400" colspan="5"><hr></hr></td></tr><tr align="CENTER"><td width="148"><span class="elsevierStyleItalic"> Patolog&#237;a</span></td><td width="63"><span class="elsevierStyleItalic">N&#250;mero de pacientes</span></td><td width="63"><span class="elsevierStyleItalic">N&#250;mero de ciclos</span></td><td width="63"><span class="elsevierStyleItalic">N&#250;mero de gestaciones</span></td><td width="63"><span class="elsevierStyleItalic">&#37; Gest&#47;ciclo</span></td></tr><tr><td width="400" colspan="5"><hr></hr></td></tr><tr align="RIGHT"><td width="148">Az&#47;mujer normal</td><td width="63"> 110</td><td width="63"> 335</td><td width="63"> 79</td><td width="63"> 23&#44;5&#42;</td></tr><tr align="RIGHT"><td width="148">Az&#47; patolog&#237;a femenina</td><td width="63"> 41</td><td width="63"> 134</td><td width="63"> 24</td><td width="63"> 17&#44;9&#42;</td></tr><tr align="RIGHT"><td width="148">Patolog&#237;a masculina&#47;mujer normal</td><td width="63"> 78</td><td width="63"> 227</td><td width="63"> 34</td><td width="63"> 15</td></tr><tr align="RIGHT"><td width="148">Patolog&#237;a masculina&#47;patolog&#237;a femen&#46;</td><td width="63"> 28</td><td width="63"> 85</td><td width="63"> 21</td><td width="63"> 24&#44;7&#42;</td></tr><tr align="RIGHT"><td width="148">TOTAL</td><td width="63"> 257</td><td width="63"> 781</td><td width="63"> 158</td><td width="63"> 20&#44;1&#37;</td></tr><tr><td width="400" colspan="5"><hr></hr></td></tr><tr><td colspan="5" width="400"><span class="elsevierStyleItalic">AZ&#58; Azoospermia&#44; &#42; p &#60; 0&#44;01&#46;</span></td></tr></table><p class="elsevierStylePara">En la tabla 7 se representa el n&#250;mero de pacientes&#44; ciclos y gestaciones&#44; as&#237; como el porcentaje de gestaci&#243;n por ciclo obtenido a lo largo del per&#237;odo de estudio del banco de semen&#44; desde 1993 hasta 1996&#46; Encontramos que&#44; aunque el n&#250;mero de pacientes va disminuyendo progresivamente &#40;82 en 1993 y 52 en 1996&#44; con diferencias estad&#237;sticamente significativas&#58; p &#60; 0&#44;05&#41;&#44; y&#44; por lo tanto&#44; tambi&#233;n el n&#250;mero de ciclos &#40;251 en 1993 y 157 en 1996&#41; &#40;p &#60; 0&#44;05&#41;&#44; la tasa de gestaci&#243;n por ciclo no var&#237;a&#44; no existiendo diferencias estad&#237;sticamente significativas en el tiempo&#46;</p><table><tr><td colspan="7" width="400"><span class="elsevierStyleBold">Tabla 7 Evoluci&#243;n del n&#250;mero de pacientes&#44; ciclos y gestaciones desde 1993 hasta 1996 en IAD</span></td></tr><tr><td colspan="7" width="400"><hr></hr></td></tr><tr align="CENTER"><td width="85"></td><td width="10"></td><td width="17"></td><td width="67"><span class="elsevierStyleItalic"> 1993</span></td><td width="67"><span class="elsevierStyleItalic"> 1994</span></td><td width="67"><span class="elsevierStyleItalic"> 1995</span></td><td width="67"><span class="elsevierStyleItalic"> 1996</span></td></tr><tr><td colspan="7" width="400"><hr></hr></td></tr><tr align="CENTER"><td colspan="2" width="95">N&#46;&#186; pacientes</td><td width="17"></td><td width="67">82</td><td width="67">55</td><td width="67">68</td><td width="67">52&#42;</td></tr><tr align="CENTER"><td colspan="2" width="95">N&#46;&#186; ciclos</td><td width="17"></td><td width="67">251</td><td width="67">215</td><td width="67">158</td><td width="67">157&#42;&#42;</td></tr><tr align="CENTER"><td colspan="2" width="95">N&#46;&#186; embarazos</td><td width="17"></td><td width="67">51</td><td width="67">44</td><td width="67">34</td><td width="67">31</td></tr><tr align="CENTER"><td colspan="3" width="112">&#37; Gestaci&#243;n&#47;ciclo</td><td width="67">20&#44;3</td><td width="67">20&#44;4</td><td width="67">21&#44;5</td><td width="67">19&#44;7</td></tr><tr><td colspan="7" width="400"><hr></hr></td></tr><tr><td colspan="7" width="400"><span class="elsevierStyleItalic">&#42; p &#60; 0&#44;05&#44; &#42;&#42; p &#60; 0&#44;01&#46;</span></td></tr></table><p class="elsevierStylePara">Tanto el n&#250;mero de dosis de semen utilizadas en cada uno de estos a&#241;os como el n&#250;mero de dosis congeladas&#44; var&#237;an significativamente a lo largo del tiempo&#46; As&#237;&#44; se utilizaron en 1993 1&#46;021 dosis en total&#44; frente a las 389 utilizadas en 1996 &#40;p &#60; 0&#44;001&#41;&#46; Tambi&#233;n son significativamente diferentes el n&#250;mero de dosis que se han enviado a otros centros para IAD&#44; y el n&#250;mero de dosis utilizadas con otros motivos &#40;experimentaci&#243;n&#44; etc&#46;&#41;&#44; como figura en la tabla 8&#46; Igualmente se congelaron en 1993&#44; 5&#46;443 dosis y 845 en 1996 &#40;p &#60; 0&#44;001&#41; &#40;tabla 9&#41;&#46;</p><table><tr><td colspan="7"><span class="elsevierStyleBold">Tabla 8 N&#250;mero de dosis usadas a lo largo del tiempo &#40;desde 1993 hasta 1996&#41;</span></td></tr><tr><td colspan="7" width="400"><hr></hr></td></tr><tr align="CENTER"><td></td><td></td><td><span class="elsevierStyleItalic">1993</span></td><td><span class="elsevierStyleItalic">1994</span></td><td><span class="elsevierStyleItalic">1995</span></td><td><span class="elsevierStyleItalic">1996</span></td><td><span class="elsevierStyleItalic">Total</span></td></tr><tr><td colspan="7" width="400"><hr></hr></td></tr><tr align="RIGHT"><td colspan="2">Pacientes</td><td>1&#46;021</td><td>775</td><td>541</td><td>389</td><td>2&#46;726&#42;</td></tr><tr align="RIGHT"><td colspan="2">Otros centros</td><td>1&#46;349</td><td>1&#46;154</td><td>969</td><td>957</td><td>4&#46;429&#42;</td></tr><tr align="RIGHT"><td colspan="2">Otros</td><td>574</td><td>248</td><td>314</td><td>231</td><td>1&#46;367&#42;</td></tr><tr align="RIGHT"><td colspan="2">TOTAL</td><td>2&#46;944</td><td>2&#46;177</td><td>1&#46;824</td><td>1&#46;577</td><td>8&#46;522&#42;</td></tr><tr><td colspan="7" width="400"><hr></hr></td></tr><tr><td colspan="7"><span class="elsevierStyleItalic">&#42; p &#60; 0&#44;01&#46;</span></td></tr></table><table><tr><td colspan="5"><span class="elsevierStyleBold">Tabla 9 N&#250;mero de dosis congeladas a lo largo del tiempo &#40;desde 1993 hasta 1996&#41;</span></td></tr><tr><td colspan="5" width="400"><hr></hr></td></tr><tr align="CENTER"><td><span class="elsevierStyleItalic">1993</span></td><td><span class="elsevierStyleItalic">1994</span></td><td><span class="elsevierStyleItalic">1995</span></td><td><span class="elsevierStyleItalic">1996</span></td><td><span class="elsevierStyleItalic">Total</span></td></tr><tr><td colspan="5" width="400"><hr></hr></td></tr><tr align="CENTER"><td>5&#46;443</td><td>3&#46;320</td><td>2&#46;054</td><td>845&#42;</td><td>15&#46;448</td></tr><tr><td colspan="5" width="400"><hr></hr></td></tr><tr><td colspan="5"><span class="elsevierStyleItalic">&#42; p &#60; 0&#44;01&#46;</span></td></tr></table><p class="elsevierStylePara">2&#46; <span class="elsevierStyleBold">Criopreservaci&#243;n de eyaculados prequimio y radioterapia</span></p><p class="elsevierStylePara">Los diagn&#243;sticos seminales encontrados en los eyaculados de los 163 pacientes se detallan en la tabla 10&#46; M&#225;s de la mitad de los eyaculados fueron normales &#40;52&#44;6&#37;&#41;&#44; el 26&#44;3&#37; eran oligoastenoteratozoospermias moderadas&#44; el 16&#44;5&#37; severas&#44; y el 5&#37; fueron azoospermias&#46;</p><table><tr><td colspan="3" width="400"><span class="elsevierStyleBold">Tabla 10 Clasificaci&#243;n diagn&#243;stica de los eyaculados de pacientes que mantienen semen criopreservado en el banco</span></td></tr><tr><td colspan="3" width="400"><hr></hr></td></tr><tr><td colspan="2" width="218"><span class="elsevierStyleItalic"> Diagn&#243;stico</span></td><td width="182"><span class="elsevierStyleItalic">N&#46;&#186; &#40;&#37;&#41;</span></td></tr><tr><td colspan="3" width="400"><hr></hr></td></tr><tr><td width="164">Nz</td><td width="54"></td><td width="182">85 &#40;52&#44;6&#37;&#41;</td></tr><tr><td colspan="2" width="218">OATz moderada</td><td width="182">43 &#40;26&#44;3&#37;&#41;</td></tr><tr><td colspan="2" width="218">OATz severa</td><td width="182">27 &#40;16&#44;5&#37;&#41;</td></tr><tr><td colspan="2" width="218">Azoospermia</td><td width="182">8 &#40;5&#37;&#41;</td></tr><tr><td colspan="2" width="218">TOTAL</td><td width="182">163</td></tr><tr><td colspan="3" width="400"><hr></hr></td></tr><tr><td colspan="3" width="400"><span class="elsevierStyleItalic">Nz&#58; Normozoospermia&#46; OATz&#58; Oligoastenoteratozoospermia&#46;</span></td></tr></table><p class="elsevierStylePara">En la gr&#225;fica 1 se presenta el porcentaje de patolog&#237;as en relaci&#243;n con el diagn&#243;stico seminal de los varones que han criopreservado semen previo tratamiento esterilizante&#46; As&#237;&#44; de los pacientes normozoosp&#233;rmicos&#44; el 18&#37; presentaba c&#225;ncer de test&#237;culo&#59; el 11&#37;&#44; Hodking&#59; 10&#37;&#44; leucemia&#59; 3&#44;6&#37;&#44; linfoma&#44; y 8&#37;&#44; otras patolog&#237;as&#46;</p><p class="elsevierStylePara"><img src="151v41n9-13009568fig01.jpg"></img></p><p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold">Gr&#225;fica 1&#46;</span><span class="elsevierStyleItalic"> Distribuci&#243;n de los distintos porcentajes de los diagn&#243;sticos seminales en funci&#243;n de las patolog&#237;as en pacientes con semen criopreservado&#46;</span></p><p class="elsevierStylePara">Existe otro grupo de pacientes que desconoc&#237;a la existencia del banco de semen antes de recibir tratamiento con citost&#225;ticos&#44; y que acuden postmedicaci&#243;n para congelaci&#243;n de espermatozoides en caso de existir&#46; Este grupo est&#225; formado por 38 pacientes&#44; de los cuales 26 fueron azoosp&#233;rmicos &#40;68&#37;&#41; y 12 ten&#237;an espermatozoides &#40;32&#37;&#41; &#40;tabla 11&#41;&#46;</p><table><tr><td colspan="7" width="400"><span class="elsevierStyleBold">Tabla 11 Diagn&#243;sticos seminales y patolog&#237;as previas existentes en pacientes que han acudido al banco de semen para criopreservaci&#243;n posttratamiento con citost&#225;ticos</span></td></tr><tr><td colspan="7" width="400"><hr></hr></td></tr><tr align="CENTER"><td width="62"></td><td width="10"></td><td width="62"><span class="elsevierStyleItalic">Nz</span></td><td width="62"><span class="elsevierStyleItalic"> OATm</span></td><td width="62"><span class="elsevierStyleItalic"> OATs</span></td><td width="62"><span class="elsevierStyleItalic">Az</span></td><td width="63"><span class="elsevierStyleItalic"> Total</span></td></tr><tr><td colspan="7" width="400"><hr></hr></td></tr><tr><td colspan="2" width="72">Seminoma</td><td width="62"></td><td width="62">4</td><td width="62">2</td><td width="62">4</td><td width="63">10</td></tr><tr><td colspan="2" width="72">Hodking</td><td width="62">4</td><td width="62"></td><td width="62"></td><td width="62">10</td><td width="63">14</td></tr><tr><td colspan="2" width="72">Leucemia</td><td width="62"></td><td width="62"></td><td width="62">2</td><td width="62">10</td><td width="63">12</td></tr><tr align="RIGHT"><td colspan="2" width="72"> Otros</td><td width="62"></td><td width="62"></td><td width="62"></td><td width="62">2</td><td width="63">2</td></tr><tr><td colspan="2" width="72">TOTAL</td><td width="62">4</td><td width="62">4</td><td width="62">4</td><td width="62">26</td><td width="63">38</td></tr><tr><td colspan="7" width="400"><hr></hr></td></tr><tr><td colspan="7" width="400"><span class="elsevierStyleItalic">Nz&#58; Normozoospermia&#46; OATm&#58; Oligoastenoteratozoospermia moderada&#46; OATs&#58; Oligoastenoteratozoospermia severa&#46; Az&#58; Azoospermia&#46;</span></td></tr></table><p class="elsevierStylePara">En cuanto a las patolog&#237;as&#44; no hay diferencias significativas entre c&#225;ncer de test&#237;culo&#44; leucemia y enfermedad de Hodking&#46;</p><p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold">DISCUSION</span></p><p class="elsevierStylePara">Las tasas de gestaci&#243;n por ciclo y por paciente obtenidas en estos cuatro a&#241;os en nuestro banco de semen&#44; no difieren del resto de los grupos en general&#46; As&#237;&#44; autores como Remoh&#237; <span class="elsevierStyleSup">&#40;15&#41;</span>&#44; ofrecen unas tasas del 17&#44;7&#37; y 52&#44;7&#37; por ciclo y por paciente respectivamente &#40;1&#46;429 ciclos y 480 pacientes&#41; &#44; frente al 20&#44;2&#37; y el 61&#44;4&#37; de nuestro grupo&#46; Incluso grupos como CECOS <span class="elsevierStyleSup">&#40;16&#41;</span> obtuvieron en 1993 un 33&#37; de gestaciones por paciente y el 11&#37; por ciclo&#44; aunque el n&#250;mero de casos es significativamente mayor &#40;23&#46;192 ciclos y 4&#46;900 mujeres&#41;&#46;</p><p class="elsevierStylePara">Asimismo&#44; tampoco es desde&#241;able la tasa de fecundaci&#243;n obtenida por nuestro grupo a los seis ciclos &#40;74&#44;5&#37;&#41;&#46; Tras seis ciclos de IAD sin gestaci&#243;n&#44; realizamos una reevaluaci&#243;n del caso &#40;laparoscopia&#44; histeroscopia&#44; etc&#46;&#41;&#44; si procede&#44; y efectuamos tres o cuatro ciclos m&#225;s&#46; As&#237;&#44; cuando se efect&#250;an m&#225;s de seis ciclos&#44; la tasa acumulativa es del 87&#37; &#40;se han obtenido 15 embarazos en 33 ciclos&#41;&#44; similar a la obtenida por Jeyendran <span class="elsevierStyleSup">&#40;17&#41;</span> en IAD con factor masculino absoluto &#40;mujeres solas o con varones azoosp&#233;rmicos&#41; que obtuvo una tasa acumulativa del 84&#37; tras ocho ciclos de inseminaci&#243;n&#46;</p><p class="elsevierStylePara">Si comparamos las tasas de gestaci&#243;n obtenidas en ciclos en los que se ha inducido la ovulaci&#243;n&#44; frente a las resultantes con ciclos espont&#225;neos&#44; no se han observado diferencias significativas entre ambas &#40;21&#44;6&#37; frente a 18&#44;2&#37; respectivamente&#41; &#40;tabla 5&#41;&#44; en contra de los resultados que obtuvieron otros autores <span class="elsevierStyleSup">&#40;15&#41;</span>&#46; Ya que realizamos IAD con ciclo espont&#225;neo solamente en los tres primeros ciclos y con mujeres sin ning&#250;n tipo de patolog&#237;a&#44; no son comparables los dos grupos mencionados anteriormente por no ser homog&#233;neos&#46; Si separamos las pacientes en las distintas categor&#237;as etiol&#243;gicas rese&#241;adas en la tabla 6&#44; la tasa de gestaci&#243;n por ciclo m&#225;s alta se encontr&#243; en el diagn&#243;stico de patolog&#237;a masculina severa y patolog&#237;a femenina simult&#225;neamente &#40;23&#37;&#41;&#44; sin diferencias significativas frente al grupo de var&#243;n azoosp&#233;rmico&#47;mujer normal&#44; aunque s&#237; la hubo respecto a los otros dos grupos&#58; azoospermia&#47;mujer con patolog&#237;a y var&#243;n con patolog&#237;a&#47;mujer normal&#46; Hay estudios que demuestran que las parejas de IAD del grupo con azoospermia tienen un mayor porcentaje de gestaci&#243;n al de parejas con factor masculino severo <span class="elsevierStyleSup">&#40;18&#44;19&#41;</span>&#46; Estos mismos autores encontraron&#44; en un estudio de pacientes oligozoosp&#233;rmicos&#44; que a mayor n&#250;mero de espermatozoides&#44; mayor porcentaje de disfunciones ovulatorias se presentaban en la mujer&#46; En otro estudio similar este grupo encontr&#243; tambi&#233;n que a menor n&#250;mero de espermatozoides&#44; mayor es la probabilidad de conseguir gestaci&#243;n cuando la pareja est&#225; incluida en un programa de IAD&#46; Estos hallazgos refuerzan la teor&#237;a de la subfertilidad femenina en el grupo de pacientes con factor masculino&#46; Sin embargo&#44; no encontramos una explicaci&#243;n al hecho de obtener resultados tan altos como los del grupo de var&#243;n azoosp&#233;rmico&#47;mujer normal en el diagnosticado como var&#243;n con patolog&#237;a masculina severa y mujer con patolog&#237;a&#46; Estos resultados difieren de los publicados por otros autores <span class="elsevierStyleSup">&#40;20&#41;</span>&#44; aunque nos sirve para comprobar la aptitud de esta t&#233;cnica&#58; el grupo formado por los varones azoosp&#233;rmicos y la mujer sin patolog&#237;a es el grupo ideal en el estudio de IAD&#44; y que puede ofrecernos las tasas m&#225;s reales de eficacia&#46; Por otra parte&#44; la discrepancia en los resultados de estos estudios pueden deberse a un criterio de inclusi&#243;n m&#225;s estricto para pacientes con factor masculino de modo que&#44; al incluir s&#243;lo a los m&#225;s severamente afectados&#44; se espera menor porcentaje de poblaci&#243;n femenina subf&#233;rtil y a una mayor detecci&#243;n de problemas de fertilidad en las mujeres&#44; que a su vez pueden tratarse oportunamente&#44; o bien excluirse directamente del programa de IAD&#46;</p><p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold">&#191;C&#243;mo ha evolucionado la IAD y el banco de semen desde que apareci&#243; el ICSI&#63;</span></p><p class="elsevierStylePara">En primer lugar&#44; un total de 34 pacientes que empezaron a realizar inseminaciones con semen de donante han abandonado para realizar ICSI antes de haber concluido los seis ciclos&#46; De las 257 parejas que han realizado IAD en este per&#237;odo &#40;1993-96&#41; la cifra realmente no es muy elevada&#46; En este sentido&#44; se puede comprobar que&#44; tanto el n&#250;mero de parejas como el n&#250;mero de ciclos va disminuyendo con el tiempo&#44; siendo estad&#237;sticamente significativa la diferencia desde 1993 y 1996&#46; Sin embargo&#44; la tasa global de gestaci&#243;n por ciclo no ha variado en estos a&#241;os&#44; lo que podr&#237;a utilizarse como control interno de calidad&#46;</p><p class="elsevierStylePara">El n&#250;mero de dosis de semen que se han utilizado a lo largo de este tiempo&#44; tambi&#233;n ha var&#237;ado l&#243;gicamente&#44; descendiendo de forma significativa desde 1&#46;021 dosis en 1993 hasta 389 en 1996&#46; Para comprobar que esta disminuci&#243;n en la utilizaci&#243;n de las mismas no solamente ha ocurrido en nuestro centro&#44; hemos analizado la evoluci&#243;n del n&#250;mero de dosis que se han enviado a otros centros donde no existe banco de semen&#44; para IAD&#44; comprobando que&#44; igualmente&#44; ha habido un descenso significativo&#46; Y ya que la demanda de IAD ha sido considerablemente menor&#44; tambi&#233;n ha disminu&#237;do el n&#250;mero de congelaciones&#58; si en 1993 se congelaron 5&#46;443 dosis en total&#44; en 1996 s&#243;lo se congelaron 845 &#40;p &#60; 0&#44;001&#41;&#46;</p><p class="elsevierStylePara">Estos datos nos demuestran&#44; en general&#44; que la utilizaci&#243;n del banco de semen en IAD&#44; aunque descendi&#243; con la aparici&#243;n del ICSI&#44; se ha estacionado&#44; y sigue siendo de utilidad en las indicaciones mencionadas al principio&#44; ofreciendo unas tasas de gestaci&#243;n muy aceptables&#46;</p><p class="elsevierStylePara">Asimismo&#44; cada vez es mayor el empleo del banco de semen para criopreservar espermatozoides de varones con riesgo de esterilidad irreversible&#44; para su posterior utilizaci&#243;n en reproducci&#243;n asistida&#46;</p><hr></hr><p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold"> BIBLIOGRAF&#205;A</span></p><p class="elsevierStylePara">1 Palermo G&#44; Joris H&#44; Devroey P&#44; Van Steirteghem AC&#46; Pregnancies after intertracytoplasmic injection of a single spermatozoon into an oocyte&#46; Lancet 1992&#59;340&#58;17-8&#46;</p><p class="elsevierStylePara">2 Van Steirteghem AC&#44; Nagy Z&#44; Joris H&#44; Liu J&#44; Staessen C&#44; Smitz J&#44; Wisanto A&#44; Devroey P&#46; High fertilization and implantation rates after intracytoplasmic sperm injection&#46; Human Reprod 1993&#59;8&#58;1061-6&#46;</p><p class="elsevierStylePara">3 Silber SJ&#44; Van Steirteghem AC&#44; Liu J&#44; Nagy Z&#44; Tournaye H&#44; Devroey P&#46; High fertilization and pregancy rate after intracytoplasmic sperm injection with spermatozoa o btained from testicle biopsy&#46; Human Reprod 1995&#59;10&#58;148-52&#46;</p><p class="elsevierStylePara">4 Devroey P&#44; Liu J&#44; Nagy Z&#44; Goossens A&#44; Torunaye H&#44; Camus M&#44; Van Steirteghem A&#46; Pregnancies after testicular sperm extraction and intracytoplasmic sperm injection in non obstructive azoospermia&#46; Human Reprod 1995&#59;10&#58;1457-60&#46;</p><p class="elsevierStylePara">5 Tarin JJ&#44; Handyside AH&#46; Embryo biopsy strategies for preimplantation difagnosis&#46; Fertil Steril 1993&#59;59&#58;943-52&#46;</p><p class="elsevierStylePara">6 World Health Organization&#46; WHO laboratory manual for the examination of heman semen and sperm cervical mucus interaction&#46; Cambridge University Press&#44; Cambridge&#44; 1992&#46;</p><p class="elsevierStylePara">7 Caballero P&#44; N&#250;&#241;ez R&#44; V&#225;zquez I&#46; T&#233;cnicas de congelaci&#243;n y descongelaci&#243;n de semen&#46; En &#171;Cuadernos de Medicina Reproductiva&#58; Inseminaci&#243;n Artificial&#187;&#44; vol&#46; I&#44; 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Información del artículo
ISSN: 03045013
Idioma original: Español
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