INFORME BREVE
Bacteriemia por Anaerobiospirillum thomasii con desenlace fatal
Anaerobiospirillum thomasii bacteremia with fatal outcome
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La línea inferior indica las distancias genéticas. La escala representa un 2<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>% de sustitución nucleotídica esperada por sitio. A la derecha de cada microorganismo se indica el número de acceso GenBank de cada secuencia utilizada para construir este dendograma.</p>" ] ] ] "textoCompleto" => "<span class="elsevierStyleSections"><p id="par0005" class="elsevierStylePara elsevierViewall">El género <span class="elsevierStyleItalic">Anaerobiospirillum</span> consiste en un grupo de bacilos gram negativos anaerobios espiralados, que comúnmente forma parte de la microbiota habitual intestinal de gatos, perros y humanos<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0075"><span class="elsevierStyleSup">3,7</span></a>. En 1976, Davis <span class="elsevierStyleItalic">et al</span>.<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0065"><span class="elsevierStyleSup">1</span></a> aíslan por primera vez al microorganismo conocido como <span class="elsevierStyleItalic">Anaerobiospirillum succiniciproducens</span>, hasta ese momento el único miembro del género <span class="elsevierStyleItalic">Anaerobiospirillum</span>. En 1997, Malnick<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0100"><span class="elsevierStyleSup">8</span></a> propone <span class="elsevierStyleItalic">Anaerobiospirillum thomasii</span> como un nueva especie dentro de este género. Ocasionalmente, estos bacilos pueden infectar a humanos. En una revisión bibliográfica se encontraron 56 casos de infección en humanos<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0085"><span class="elsevierStyleSup">5</span></a>. Ambas especies fueron aisladas en materia fecal de pacientes con diarrea<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0080"><span class="elsevierStyleSup">4,7</span></a>.</p><p id="par0010" class="elsevierStylePara elsevierViewall"><span class="elsevierStyleItalic">A. succiniciproducens</span> ha sido descrito como agente causal de bacteriemias, generalmente en pacientes con algún grado de inmunodepresión<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0085"><span class="elsevierStyleSup">5,9-11</span></a>. No existen casos descritos de bacteriemias por <span class="elsevierStyleItalic">A. thomasii.</span></p><p id="par0015" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Se presenta el caso de una paciente de sexo femenino de 54 años, con antecedentes de enolismo de 30 años de evolución, fumadora, con internaciones previas por síndrome ascítico edematoso y poca adherencia al tratamiento. La paciente refirió haber comenzado 2 semanas antes de la consulta con aumento del perímetro abdominal, astenia, anorexia y somnolencia. Debido a una mala evolución se decidió la internación. A la admisión, la paciente se presentó afebril, con hipotensión, desorientación, abdomen globoso y depresible, y abundante catarsis diarreica. El examen de sangre mostró valores de urea, creatinina y electrolitos normales, hiperbilirrubinemia (6,7<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mg<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>%), hipoalbuminemia (23<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>g/l) e hiperamonemia (230<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>μg<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>%), hematocrito 27<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>%, hemoglobina 8,7<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>g/dl, recuento de blancos 17 000 por mm<span class="elsevierStyleSup">3</span>, con 88<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>% de neutrófilos, velocidad de sedimentación globular de 50<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mm/h. Se tomaron 2 muestras de hemocultivo en frascos BacT/Alert FA (FAN Aerobic) y BacT/Alert FN (FAN Anaerobic) de bioMèrieux antes del inicio del tratamiento con ampicilina sulbactama 1,5<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>g/6<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>h. La paciente continuó con mala evolución y falleció al cuarto día de internación.</p><p id="par0020" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Se detectó crecimiento bacteriano en las botellas anaeróbicas al segundo día de incubación usando el sistema de detección de microorganismos BacT/ALERT® 3D60 (bioMèrieux). La coloración de Gram mostró la presencia de bacilos gram negativos con forma espiralada. El organismo se subcultivó en agar sangre y agar chocolate incubados a 35<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>°C en 5<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>% de CO<span class="elsevierStyleInf">2</span>, y en agar Brucella suplementado con vitamina K y hemina, incubado a 35<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>°C en condiciones anaeróbicas (cámara AnaeroPouch System con generador AnaeroPouch-Anaero, Mitsubishi Gas Chemical Company, Inc.). Todos los subcultivos fueron negativos después de 10 días de incubación, por lo que se decidió realizar la identificación molecular de la bacteria por secuenciación del gen del ARN ribosomal 16S a partir de los frascos originales de FAN Anaerobic.</p><p id="par0025" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Se procedió a la extracción de ADN directamente a partir de la botella de hemocultivo. Se tomaron 400<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>μl de cada uno de los frascos anaeróbicos. El ADN se purificó utilizando un sistema automatizado MagnaPure Compact (Roche), con un volumen final de elución de 50<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>μl.</p><p id="par0030" class="elsevierStylePara elsevierViewall">El gen del ARNr 16S se amplificó mediante el empleo de los <span class="elsevierStyleItalic">primers</span> universales 16S <span class="elsevierStyleItalic">forward primer</span> y DG74 <span class="elsevierStyleItalic">reverse primer</span>, previamente descritos<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0070"><span class="elsevierStyleSup">2,6</span></a>. El producto obtenido fue de aproximadamente 1200 pb, cubriendo desde la región variable V3 a la V9. La PCR se realizó en un termociclador Veriti (Applied Biosystems) usando los siguientes parámetros de ciclado: 95<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>°C 15<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>min, 30 ciclos de 94<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>°C 30 s, 55<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>°C 30 s y 72<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>°C 1<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>min, y una extensión final de 72<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>°C por 10<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>min. La amplificación se llevó a cabo usando el HotStarTaq Plus Master Mix Kit (QIAGEN), con una concentración final de la <span class="elsevierStyleItalic">master mix</span> de 1<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>×, 0,5-5<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>ng de ADN y 0,5<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>μM de cada uno de los <span class="elsevierStyleItalic">primers</span>, en un volumen final de 25<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>μl.</p><p id="par0035" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Los productos de PCR se corrieron en un gel de agarosa al 1<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>% (Agarosa LE grado analítico, Promega) y las bandas se visualizaron al UV por tinción con bromuro de etidio.</p><p id="par0040" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Finalmente, los productos fueron purificados con el Qiaquick PCR purification kit (Qiagen) y cuantificados con un espectrofotómetro NanoDrop 1000 (Thermo Scientific).</p><p id="par0045" class="elsevierStylePara elsevierViewall">El producto de PCR purificado se secuenció en ambos sentidos usando el kit BigDye Terminator V1.1 de Applied Biosystem en un volumen final de 20<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>μl, con una dilución de la <span class="elsevierStyleItalic">master mix</span> de 0,125×, 1<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>μM del <span class="elsevierStyleItalic">primer</span> 16S y DG74 y 15<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>ng de producto de PCR. Los parámetros de ciclado fueron: 96<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>°C 1<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>min, 30 ciclos de 96<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>°C 10 s, 50<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>°C 5 s y 60<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>°C 4<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>min. Los productos de secuenciación se corrieron en un secuenciador automático ABI 3500 de Applied Biosystem y se analizaron mediante el programa Sequencing Analysis v5.4.</p><p id="par0050" class="elsevierStylePara elsevierViewall">La secuencia obtenida (1130 nucleótidos) se comparó con secuencias conocidas de ARNr 16S contenidas en la base de datos GenBank, con el fin de identificar al microorganismo. Posteriormente, se construyó un árbol filogenético mediante el uso del programa Mega v5.05. Las secuencias se alinearon con Clustal W, se construyó el árbol mediante el algoritmo de Neighbor-Joining con un número de réplicas de 1000 empleando <span class="elsevierStyleItalic">Bacillus subtilis</span> como grupo externo.</p><p id="par0055" class="elsevierStylePara elsevierViewall">La comparación de la secuencia obtenida con secuencias de referencia depositadas en la base de datos GenBank mostró un 99<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>% de identidad (1121 concordancias sobre 1130 bases comparadas) entre el microorganismo hallado y <span class="elsevierStyleItalic">A. thomasii</span> cepa DSM 11806 y un 94<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>% de similitud (1058 de 1130 comparaciones) con <span class="elsevierStyleItalic">A. succiniciproducens</span> cepa S411.</p><p id="par0060" class="elsevierStylePara elsevierViewall">En la <a class="elsevierStyleCrossRef" href="#fig0005">figura 1</a> puede observarse la relación filogenética existente entre la cepa aislada y las 2 especies que forman parte del género <span class="elsevierStyleItalic">Anaerobiospirillum</span>. Como se aprecia, el microorganismo hallado forma un <span class="elsevierStyleItalic">cluster</span> con <span class="elsevierStyleItalic">A. thomasii</span>, con un valor de <span class="elsevierStyleItalic">bootstrap</span> de 100<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>%, mientras que <span class="elsevierStyleItalic">A. succiniciproducens</span> se encuentra en un <span class="elsevierStyleItalic">cluster</span> diferente. De acuerdo con los criterios de interpretación propuestos por el <span class="elsevierStyleItalic">Clinical and Laboratory Standard Institute</span><a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0120"><span class="elsevierStyleSup">12</span></a>, la secuenciación parcial del gen del ARNr 16S es una herramienta efectiva para la identificación de microorganismos anaerobios gram negativos. Estas guías establecen que la obtención de un porcentaje de similitud ≥ 99<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>% con más de un 0,8<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>% de separación entre especies permite informar con seguridad género y especie. La cepa secuenciada mostró un 99<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>% similitud con <span class="elsevierStyleItalic">A. thomasii</span> y un 5<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>% de separación con <span class="elsevierStyleItalic">A. succiniciproducens</span>, la otra especie del género.</p><elsevierMultimedia ident="fig0005"></elsevierMultimedia><p id="par0070" class="elsevierStylePara elsevierViewall">La abundante catarsis diarreica presentada por la paciente y los signos y síntomas de infección gastrointestinal que acompañaron a la bacteriemia indican que el portal primario de entrada de esta bacteria fue el tracto gastrointestinal<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0105"><span class="elsevierStyleSup">9</span></a>. Por otro lado, la condición subyacente de alcoholismo crónico ha sido descrita como un factor que predispone al desarrollo de bacteriemia por este género<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0100"><span class="elsevierStyleSup">8</span></a>. En el paciente estudiado, el pobre estado nutricional, la disrupción de la integridad de la mucosa gastrointestinal y la ascitis podrían haber sido importantes mecanismos que facilitaron la infección. No hay publicados estudios de sensibilidad a antibióticos por tratarse de una infección poco común, por lo que aún no se ha establecido una terapia óptima.</p><span id="sec0005" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0025">Responsabilidades éticas</span><span id="sec0010" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0030">Protección de personas y animales</span><p id="par0075" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Los autores declaran que para esta investigación no se han realizado experimentos en seres humanos ni en animales.</p></span><span id="sec0015" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0035">Confidencialidad de los datos</span><p id="par0095" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Los autores declaran que han seguido los protocolos de su centro de trabajo sobre la publicación de datos de pacientes.</p></span><span id="sec0020" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0040">Derecho a la privacidad y consentimiento informado</span><p id="par0100" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Los autores declaran que han seguido los protocolos de su centro de trabajo sobre la publicación de datos de pacientes.</p></span></span><span id="sec0025" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0045">Conflicto de intereses</span><p id="par0090" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Los autores declaran no tener ningún conflicto de intereses.</p></span></span>" "textoCompletoSecciones" => array:1 [ "secciones" => array:7 [ 0 => array:3 [ "identificador" => "xres602685" "titulo" => "Resumen" "secciones" => array:1 [ 0 => array:1 [ "identificador" => "abst0005" ] ] ] 1 => array:2 [ "identificador" => "xpalclavsec616740" "titulo" => "Palabras clave" ] 2 => array:3 [ "identificador" => "xres602686" "titulo" => "Abstract" "secciones" => array:1 [ 0 => array:1 [ "identificador" => "abst0010" ] ] ] 3 => array:2 [ "identificador" => "xpalclavsec616739" "titulo" => "Keywords" ] 4 => array:3 [ "identificador" => "sec0005" "titulo" => "Responsabilidades éticas" "secciones" => array:3 [ 0 => array:2 [ "identificador" => "sec0010" "titulo" => "Protección de personas y animales" ] 1 => array:2 [ "identificador" => "sec0015" "titulo" => "Confidencialidad de los datos" ] 2 => array:2 [ "identificador" => "sec0020" "titulo" => "Derecho a la privacidad y consentimiento informado" ] ] ] 5 => array:2 [ "identificador" => "sec0025" "titulo" => "Conflicto de intereses" ] 6 => array:1 [ "titulo" => "Bibliografía" ] ] ] "pdfFichero" => "main.pdf" "tienePdf" => true "fechaRecibido" => "2015-06-19" "fechaAceptado" => "2015-07-24" "PalabrasClave" => array:2 [ "es" => array:1 [ 0 => array:4 [ "clase" => "keyword" "titulo" => "Palabras clave" "identificador" => "xpalclavsec616740" "palabras" => array:3 [ 0 => "<span class="elsevierStyleItalic">Anaerobiospirillum thomasii</span>" 1 => "ARN ribosomal 16S" 2 => "Bacteriemia" ] ] ] "en" => array:1 [ 0 => array:4 [ "clase" => "keyword" "titulo" => "Keywords" "identificador" => "xpalclavsec616739" "palabras" => array:3 [ 0 => "<span class="elsevierStyleItalic">Anaerobiospirillum thomassi</span>" 1 => "16S ribosomal RNA" 2 => "Bacteremia" ] ] ] ] "tieneResumen" => true "resumen" => array:2 [ "es" => array:2 [ "titulo" => "Resumen" "resumen" => "<span id="abst0005" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><p id="spar0005" class="elsevierStyleSimplePara elsevierViewall"><span class="elsevierStyleItalic">Anaerobiospirillum thomasii</span> ha sido descrito como causante de diarrea en humanos, pero no se han informado bacteriemias asociadas a este organismo. En esta comunicación describimos el primer aislamiento de <span class="elsevierStyleItalic">A. thomasii</span> como causa de bacteriemia fatal en una paciente alcohólica.</p></span>" ] "en" => array:2 [ "titulo" => "Abstract" "resumen" => "<span id="abst0010" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><p id="spar0010" class="elsevierStyleSimplePara elsevierViewall"><span class="elsevierStyleItalic">Anaerobiospirillum thomasii</span> has been reported as a causative agent of diarrhea in humans; however no bacteremia associated with this pathogen has been described so far. 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