Introducción: Las alteraciones en la expresión de HLA-I constituyen el mecanismo de evasión inmune más utilizado por las células tumorales, dado que estas moléculas son indispensables para la presentación de antígenos tumorales a los linfocitos T citotóxicos. Una de las estrategias planteadas para mejorar la respuesta inmune se basa en el restablecimiento de la expresión de las moléculas de HLA-I.
Objetivo: Restablecer la expresión de las moléculas de HLA-A*02:01 y HLA-B*44:01 en una línea celular de cáncer mediante transferencia génica usando adenovirus recombinantes.
Materiales y métodos: La tipificación de HLA-I en la línea celular SiHa se realizó por PCR-SSP y Luminex. Paralelamente los genes de HLA-A*02:01 y HLA-B*44:01 se clonaron en el vector de transferencia pShuttle-CMV. Se realizó la recombinación homóloga entre el pShuttle y el genoma adenoviral (pAdEasy1). La clonación y la recombinación se verificaron por PCR y electroforesis en agarosa. Las células Ad293 fueron transfectadas con el vector adenoviral recombinante para la producción de los respectivos adenovirus.
Resultados: La tipificación mostró que el fenotipo de la línea SiHa es HLA-I, HLA-A*24:02/A*24:02;HLA-B*40:02/B*40:02;HLA-C*03:04/C*03:04. Con PCR se confirmó la clonación de los genes HLA-A*02:01 y HLA-B*44:01 en el pShuttle-CMV, y con PCR dúplex se confirmó la recombinación homóloga del vector de transferencia con el genoma del Adenovirus.
Conclusiones: Se clonó HLA-A*02:01 y HLA-B*44:01 en el vector Shuttle-CMV. Se recombinó el pShuttle-CMV-HLA-A*02:01 y el pShuttle-CMV-HLA-B*44:01 con el pAdEasy. Los adenovirus producidos en células Ad-293 están en proceso de confirmación de su identidad.
