Detección y tipificación del virus del papiloma humano (VPH) en mujeres con cáncer de cuello uterino en Bogotá y Barranquilla. Procedimientos técnicos y de diagnóstico

Resumen

Objetivo

Analizar los procedimientos técnicos y de diagnóstico en la detección de genotipos del virus del papiloma humano (VPH) en muestras con cáncer de cuello uterino.

Métodos

Se tomaron tejidos incluidos en parafina de 268 casos de cáncer de cuello uterino, procedentes de Barranquilla y Bogotá. Se verificó el diagnóstico histológico mediante nuevos cortes y se analizó la calidad de las muestras mediante amplificación del gen de B-globina. En muestras B-globina negativas se realizaron nuevos cortes y nueva amplificación. La detección de VPH se realizó mediante iniciadores GP5+/GP6+biodirigidos hacia la región L1, y tipificación mediante EIA y RLB. En las muestras negativas para GP5+/GP6+ se desarrollaron PCR tipo específicas hacia la región E7 de 14 tipos de VPH de alto riesgo.

Resultados

De las 268 muestras iniciales, 20 (7,46%) tuvieron diagnóstico histológico inadecuado; 55/248 muestras fueron inicialmente B-globina negativas, pero 29 se recuperaron con una segunda PCR realizada, dejando 26 B-globina negativas (10,5%). Se detectó VPH en 210/222 muestras adecuadas mediante GP5+/GP6+ (94,6%), y en 7 muestras adicionales (3,15%), mediante iniciadores dirigidos hacia E7. No se detectó infección en 2,25% de los casos. Se encontraron 24 tipos de VPH; los más prevalentes fueron el VPH-16 (50,9%), VPH-18 (12,7%), VPH-45 (8,8%), VPH-31 (6,5%) y VPH-58 (6,0%). Hubo un 16,6% de infecciones múltiples.

Conclusión

El adecuado procesamiento y diagnóstico de las muestras y el uso de pruebas combinadas hacia las regiones L1 y E7 permiten una estimación óptima de la prevalencia de la infección en muestras incluidas en parafina.

Abstract

Objective

To analyze the role played by technical and diagnostic techniques in the detection of diverse genotypes of the human papilloma virus (HPV) in cervical cancer samples.

Methods

Paraffin fixed tissue samples were taken from 268 cases of cervical cancer in Bogotá and Barranquilla. Histological diagnosis was verified through new cuts and sample quality was analyzed through amplification of the β-globin gene. In the case of β-globin negatives, additional cuts and amplification were carried out. HPV detection was achieved using GP5+/GP6+bio indicators directed towards the L1 region, and typing through EIA and RLB. Among GP5+/GP6+ negatives, specific PCR type was developed towards the E7 region of 14 types of high risk HPV.

Results

Out of the initial 268 samples, 20 (7.46%) had inadequate histological diagnosis. Initially β-globin negative samples came to 55/248, but 29 recuperated with the realization of a second PCR, resulting in 26 β-globin negatives (10.5%). HPV was detected in 210/222 appropriate samples through GP5+/GP6+ (94.6%), and in 7 additional samples (3.15%) through the indicators directed towards E7. No infection was detected in 2.25% of cases. Twenty-four types of HPV were found, the most prevalent being HPV-16 (50.9%), HPV-18 (12.7%), HPV-45 (8.8%), HPV-31 (6.5%), and HPV-58 (6.0%). Multiple infection occurred in 16.6% of cases.

Conclusions

The adequate processing and diagnosis of samples and the use of combined tests towards the L1 and E7 regions allows for the optimum appraisal of infection prevalence among paraffin fixed samples.