Radiomarcación de IgG humana por medio de luz ultravioleta con un reactor propio.
Radiolabelling of human IgG with ultraviolet light having its own reactor.
V. Barreras, F. Zayas, M E. Rodríguez, N. Mesa
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Ciudad de La Habana. Cuba.</span></p><hr></hr><p class="elsevierStylePara">Sr. Director:</p><p class="elsevierStylePara">En los últimos años se ha propuesto el uso de luz ultravioleta para la fotorreducción<span class="elsevierStyleSup">1,2</span> de los puentes disulfuro de anticuerpos. Este método tiene la ventaja de que no se requiere purificación posterior del anticuerpo reducido.</p><p class="elsevierStylePara">En el presente informe se exponen los resultados preliminares de la fotorreducción de inmunoglobulina G (IgG) humana con un reactor compuesto de tres lámparas de 30 watts.</p><p class="elsevierStylePara">Se añaden 600 µl de solución de IgG-humana (Centro de Hemoderivados. Cuba) de 2,0 mg/ml de solución salina fisiológica (SSF) en un frasco de contaje de centelleo líquido, se añaden 20 µl de una solución de estaño-ligando de 1,80 mg de Sn+2/ml de HCl-0,038 N y 50 umoles de tartrato/ml de solución estannosa. Se ensayan dos concentraciones de Sn+2 que permiten alcanzar 30 y 60 µg de Sn+2/mg de IgG. Todos los solventes y soluciones se burbujearon con nitrógeno gaseoso previo a la irradiación. Inmediatamente se aplican 90 watts durante 15 minutos y seguidamente se añade al frasco un volumen de pertecnectato-<span class="elsevierStyleSup">99m</span>Tc obtenido del generador 99Mo-99mTc de la firma Amersham Int. Transcurridos 30 minutos se determina la pureza radioquímica por cromatografía en papel ascendente (CPA) con etanol al 85% (EtOH) y solución salina fisiológica (SSF) en Whatman No. 1. La estimación de radiocoloides se efectúa por cromatografía de exclusión<span class="elsevierStyleSup">3</span> en columnas (1 x 10 cm) de Sephadex G-25M equilibradas previamente con SSF.</p><p class="elsevierStylePara">Se desarrollan variantes en la fotorreducción utilizando 30 µg Sn+2/mg de IgG y 90 watts-15 minutos, se determina la pureza radioquímica de los radiofármacos correspondientes en SSF y se someten a competencias contra DTPA (2.000/1), albúmina (200/1) y cisteína (3.000/1) a diferentes tiempos.</p><p class="elsevierStylePara">La formulación óptima se aplica sobre una columna (1 x 30 cm) de superose 12, equilibrada con buffer fosfato 0,1 M pH-7.4 con un flujo de 0,5 ml/mnt. Se compara el perfil radiométrico obtenido contra los perfiles de absorbancia de la IgG nativa y la IgG reducida por la combinación Sn+2-luz ultravioleta (90 watts-15 minutos).</p><p class="elsevierStylePara">Se observó para EtOH y SSF respectivamente, que más del 96,0% y 90,0% de la radiactividad se asoció al origen, tal y como describió Stalteri<span class="elsevierStyleSup">2</span>. La elevación de la concentración de Sn+2 entre 30 y 60 µg Sn+2/mg de IgG no incrementa los rendimientos señalados para EtOH y SSF, sin embargo, la fracción de radiocoloides se eleva hasta un 50,0%.</p><p class="elsevierStylePara">En la tabla I se presentan los resultados de las variantes de la fotorreducción, en ésta se evidencia la necesidad del Sn+2 previo a la irradiación, lo cual posibilita una vez radiomarcada la IgG un mejor acceso del <span class="elsevierStyleSup"> 99m</span>Tc a los sitios de alta afinidad<span class="elsevierStyleSup">4</span>, ya que el nivel de disociación en esta condición se hace menor, especialmente para el DTPA y la albúmina. Para la cisteína no se observan grandes diferencias quizá por la elevada relación molar utilizada. La irradiación inicial y la adición posterior del Sn+2 produjo la mayor disociación, lo cual sugiere que el Sn+2 juega un rol básico como promotor o iniciador de la ruptura<span class="elsevierStyleSup">5</span> de los puentes disulfuro, acción que se intensifica al aplicar luz ultravioleta.</p><p class="elsevierStylePara"> </p><table><tr><td colspan="8"><p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold">Tabla I</span> COMPETENCIAS CONTRA AGENTES QUELATANTES DE LA IgG RADIOMARCADA</p></td></tr><tr><td colspan="8"><hr></hr></td></tr><tr align="CENTER"><td></td><td colspan="7"><span class="elsevierStyleItalic">% de disociación</span></td></tr><tr align="CENTER"><td></td><td colspan="7"><hr></hr></td></tr><tr align="CENTER"><td></td><td><span class="elsevierStyleItalic">% Pureza</span></td><td colspan="2"><span class="elsevierStyleItalic"> DTPA</span></td><td colspan="2"><span class="elsevierStyleItalic"> HSA</span></td><td colspan="2"><span class="elsevierStyleItalic"> CYS</span></td></tr><tr><td></td><td colspan="7"><hr></hr></td></tr><tr align="CENTER"><td><span class="elsevierStyleItalic">Condiciones de radiomarcaje de la IgG</span></td><td><span class="elsevierStyleItalic">SSF</span></td><td><span class="elsevierStyleItalic">4 horas</span></td><td><span class="elsevierStyleItalic">24 horas</span></td><td><span class="elsevierStyleItalic">4 horas</span></td><td><span class="elsevierStyleItalic">24 horas</span></td><td><span class="elsevierStyleItalic">4 horas</span></td><td><span class="elsevierStyleItalic">24 horas</span></td></tr><tr><td colspan="8"><hr></hr></td></tr><tr align="CENTER"><td>Sn + 90 watts-15 minutos de irradiación</td><td>95,9</td><td>8,6</td><td>14,7</td><td>36,4</td><td>44,9</td><td>73,0</td><td>80,0</td></tr><tr align="CENTER"><td>Sn + 15 minutos de incubación</td><td>89,5</td><td>24,0</td><td>33,1</td><td>44,4</td><td>56,9</td><td>73,9</td><td>81,3</td></tr><tr><td>90 watts-15 minutos y adición de Sn</td><td>90,0</td><td>23,7</td><td>34,5<br></br> N = 3</td><td>53,4</td><td>58,9</td><td>75,6</td><td>85,5</td></tr><tr align="CENTER"><td colspan="8"><hr></hr></td></tr></table><p class="elsevierStylePara">En la figura 1 se muestran los perfiles en Superose 12, tras la fotoactivación se elevan las formas poliméricas<span class="elsevierStyleSup">1</span>, que incorporan una fracción considerable de <span class="elsevierStyleSup">99m</span>Tc.</p><p class="elsevierStylePara"><img src="125v18n3-13006322fig01.gif"></img></p><p class="elsevierStylePara">Fig. 1.<span class="elsevierStyleItalic">--FPLC Superose 12. Flujo 0,5 ml/min. (A) Absorbancia a 280 nm de la IgG nativa. (B) Absorbancia a 280 nm de la IgG luego de la irradiación. (C) Perfil radiométrico de la <span class="elsevierStyleSup">99m</span>Tc-IgG luego de la irradiación.</span></p><p class="elsevierStylePara">Se puede resumir que con una concentración de Sn+2 de 30 µg/mg de IgG, el uso de frascos de centelleo líquido y la irradiación con 90 watts durante 15 minutos, se logra el radiomarcaje eficiente y estable de la IgG con <span class="elsevierStyleSup">99m</span>Tc, aunque en este proceso se produce la agregación molecular de la proteína.</p><p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold">Lic. Francisco I. Zayas Crespo</span><span class="elsevierStyleItalic"><br></br> Instto. de Nefrología<br></br> Dpto. de Medicina Nuclear. Ave 26 y R. Boyeros<br></br> Cerro Ciudad de la Habana 6<br></br> 10600 Cuba</span></p><hr></hr><p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold">BIBLIOGRAFÍA</span></p><p class="elsevierStylePara">1. Sykes TR, Woo TK, Baum RP, Qi P, Noujaim AA. Direct labeling of monoclonal antibodies with technetium-99m by photoactivation. J Nucl Med 1995;36:1913-22.</p><p class="elsevierStylePara">2. Stalteri MA, Mather SJ. Technetium-99m labelling of the antitumour antibody PR1a3 by photoactivation. Eur J Nucl Med 1996;23:178-87.</p><p class="elsevierStylePara">3. Jovanovic V, Maksin T, Rastovac M, Bzeric J. Comparative quality control of 99mTc-pyrophosphate and 99mTc-diphosphonate radiopharmaceuticals. Eur J Nucl Med 1983;8:179-82.</p><p class="elsevierStylePara">4. Paik CH, Phan Lan NB, Hong JJ y cols. The labeling of high affinty sites of antibodies with 99mTc. Int J Nucl Med Biol 1985;12:3-8.</p><p class="elsevierStylePara">5. Rhodes BA, Zamora PO, Newell KD, Valdez EF. Technetium-99m labelling of murine monoclonal antibody fragments. J Nucl Med 1986;5:685-93.</p>" "tienePdf" => false "multimedia" => array:1 [ 0 => array:6 [ "identificador" => "fig1" "tipo" => "MULTIMEDIAFIGURA" "mostrarFloat" => true "mostrarDisplay" => false "copyright" => "Elsevier España" "figura" => array:1 [ 0 => array:4 [ "imagen" => "125v18n3-13006322fig01.gif" "Alto" => 407 "Ancho" => 375 "Tamanyo" => 9719 ] ] ] ] ] "idiomaDefecto" => "es" "url" => "/2253654X/0000001800000003/v0_201308011544/13006322/v0_201308011544/es/main.assets" "Apartado" => array:4 [ "identificador" => "17648" "tipo" => "SECCION" "es" => array:2 [ "titulo" => "Cartas al director" "idiomaDefecto" => true ] "idiomaDefecto" => "es" ] "EPUB" => "https://multimedia.elsevier.es/PublicationsMultimediaV1/item/epub/13006322?idApp=UINPBA00004N" ]
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ISSN: 2253654XIdioma original: Español
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