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Ciudad de La Habana. Cuba.<hr></hr>Sr. Director:En los últimos años se ha propuesto el uso de luz ultravioleta para la fotorreducción1,2 de los puentes disulfuro de anticuerpos. Este método tiene la ventaja de que no se requiere purificación posterior del anticuerpo reducido.En el presente informe se exponen los resultados preliminares de la fotorreducción de inmunoglobulina G (IgG) humana con un reactor compuesto de tres lámparas de 30 watts.Se añaden 600 µl de solución de IgG-humana (Centro de Hemoderivados. Cuba) de 2,0 mg/ml de solución salina fisiológica (SSF) en un frasco de contaje de centelleo líquido, se añaden 20 µl de una solución de estaño-ligando de 1,80 mg de Sn+2/ml de HCl-0,038 N y 50 umoles de tartrato/ml de solución estannosa. Se ensayan dos concentraciones de Sn+2 que permiten alcanzar 30 y 60 µg de Sn+2/mg de IgG. Todos los solventes y soluciones se burbujearon con nitrógeno gaseoso previo a la irradiación. Inmediatamente se aplican 90 watts durante 15 minutos y seguidamente se añade al frasco un volumen de pertecnectato-99mTc obtenido del generador 99Mo-99mTc de la firma Amersham Int. Transcurridos 30 minutos se determina la pureza radioquímica por cromatografía en papel ascendente (CPA) con etanol al 85% (EtOH) y solución salina fisiológica (SSF) en Whatman No. 1. La estimación de radiocoloides se efectúa por cromatografía de exclusión3 en columnas (1 x 10 cm) de Sephadex G-25M equilibradas previamente con SSF.Se desarrollan variantes en la fotorreducción utilizando 30 µg Sn+2/mg de IgG y 90 watts-15 minutos, se determina la pureza radioquímica de los radiofármacos correspondientes en SSF y se someten a competencias contra DTPA (2.000/1), albúmina (200/1) y cisteína (3.000/1) a diferentes tiempos.La formulación óptima se aplica sobre una columna (1 x 30 cm) de superose 12, equilibrada con buffer fosfato 0,1 M pH-7.4 con un flujo de 0,5 ml/mnt. Se compara el perfil radiométrico obtenido contra los perfiles de absorbancia de la IgG nativa y la IgG reducida por la combinación Sn+2-luz ultravioleta (90 watts-15 minutos).Se observó para EtOH y SSF respectivamente, que más del 96,0% y 90,0% de la radiactividad se asoció al origen, tal y como describió Stalteri2. La elevación de la concentración de Sn+2 entre 30 y 60 µg Sn+2/mg de IgG no incrementa los rendimientos señalados para EtOH y SSF, sin embargo, la fracción de radiocoloides se eleva hasta un 50,0%.En la tabla I se presentan los resultados de las variantes de la fotorreducción, en ésta se evidencia la necesidad del Sn+2 previo a la irradiación, lo cual posibilita una vez radiomarcada la IgG un mejor acceso del 99mTc a los sitios de alta afinidad4, ya que el nivel de disociación en esta condición se hace menor, especialmente para el DTPA y la albúmina. Para la cisteína no se observan grandes diferencias quizá por la elevada relación molar utilizada. La irradiación inicial y la adición posterior del Sn+2 produjo la mayor disociación, lo cual sugiere que el Sn+2 juega un rol básico como promotor o iniciador de la ruptura5 de los puentes disulfuro, acción que se intensifica al aplicar luz ultravioleta. <table><tr><td colspan="8">Tabla I COMPETENCIAS CONTRA AGENTES QUELATANTES DE LA IgG RADIOMARCADA</td></tr><tr><td colspan="8"><hr></hr></td></tr><tr align="CENTER"><td></td><td colspan="7">% de disociación</td></tr><tr align="CENTER"><td></td><td colspan="7"><hr></hr></td></tr><tr align="CENTER"><td></td><td>% Pureza</td><td colspan="2"> DTPA</td><td colspan="2"> HSA</td><td colspan="2"> CYS</td></tr><tr><td></td><td colspan="7"><hr></hr></td></tr><tr align="CENTER"><td>Condiciones de radiomarcaje de la IgG</td><td>SSF</td><td>4 horas</td><td>24 horas</td><td>4 horas</td><td>24 horas</td><td>4 horas</td><td>24 horas</td></tr><tr><td colspan="8"><hr></hr></td></tr><tr align="CENTER"><td>Sn + 90 watts-15 minutos de irradiación</td><td>95,9</td><td>8,6</td><td>14,7</td><td>36,4</td><td>44,9</td><td>73,0</td><td>80,0</td></tr><tr align="CENTER"><td>Sn + 15 minutos de incubación</td><td>89,5</td><td>24,0</td><td>33,1</td><td>44,4</td><td>56,9</td><td>73,9</td><td>81,3</td></tr><tr><td>90 watts-15 minutos y adición de Sn</td><td>90,0</td><td>23,7</td><td>34,5 N = 3</td><td>53,4</td><td>58,9</td><td>75,6</td><td>85,5</td></tr><tr align="CENTER"><td colspan="8"><hr></hr></td></tr></table>En la figura 1 se muestran los perfiles en Superose 12, tras la fotoactivación se elevan las formas poliméricas1, que incorporan una fracción considerable de 99mTc.<img src="125v18n3-13006322fig01.gif"></img>Fig. 1.--FPLC Superose 12. Flujo 0,5 ml/min. (A) Absorbancia a 280 nm de la IgG nativa. (B) Absorbancia a 280 nm de la IgG luego de la irradiación. (C) Perfil radiométrico de la 99mTc-IgG luego de la irradiación.Se puede resumir que con una concentración de Sn+2 de 30 µg/mg de IgG, el uso de frascos de centelleo líquido y la irradiación con 90 watts durante 15 minutos, se logra el radiomarcaje eficiente y estable de la IgG con 99mTc, aunque en este proceso se produce la agregación molecular de la proteína.Lic. Francisco I. Zayas Crespo Instto. de Nefrología Dpto. de Medicina Nuclear. Ave 26 y R. Boyeros Cerro Ciudad de la Habana 6 10600 Cuba<hr></hr>BIBLIOGRAFÍA1. Sykes TR, Woo TK, Baum RP, Qi P, Noujaim AA. Direct labeling of monoclonal antibodies with technetium-99m by photoactivation. J Nucl Med 1995;36:1913-22.2. Stalteri MA, Mather SJ. Technetium-99m labelling of the antitumour antibody PR1a3 by photoactivation. Eur J Nucl Med 1996;23:178-87.3. Jovanovic V, Maksin T, Rastovac M, Bzeric J. Comparative quality control of 99mTc-pyrophosphate and 99mTc-diphosphonate radiopharmaceuticals. Eur J Nucl Med 1983;8:179-82.4. Paik CH, Phan Lan NB, Hong JJ y cols. The labeling of high affinty sites of antibodies with 99mTc. Int J Nucl Med Biol 1985;12:3-8.5. Rhodes BA, Zamora PO, Newell KD, Valdez EF. Technetium-99m labelling of murine monoclonal antibody fragments. J Nucl Med 1986;5:685-93." 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ISSN: 2253-654X

La Revista Española de Medicina Nuclear e Imagen Molecular, fundada en 1982, es el órgano oficial de expresión de la Sociedad Española de Medicina Nuclear e Imagen Molecular, que aglutina a más de 700 miembros. La revista, que publica seis números regulares al año, tiene como principal objetivo promocionar la investigación y la formación continuada en todos los ámbitos de la Medicina Nuclear. Para ello, sus secciones principales son Originales, Notas Clínicas, Imágenes de Interés y artículos de Colaboración especial. Los trabajos pueden enviarse en español o en inglés y son sometidos a un proceso de revisión por pares. En 2009 se convirtió en la primera revista española del ámbito de la Imagen Médica en tener Factor de Impacto.

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