Extracción de ADN de tejidos embebidos en parafina por Chelex-100. ADN de tejidos en parafina por resina quelante

Resumen

Antecedentes

El tejido embebido en parafina (TEP) es una fuente invaluable para los estudios moleculares retrospectivos. El método de Chelex-100 ha sido empleado para la extracción de ADN en TEP con el objetivo de ser utilizado posteriormente en la técnica de la Reacción en Cadena de la Polimerasa (RCP). En este trabajo, se describe la utilidad del Chelex-100 para la detección de ADN de Mycobacterium tuberculosis de TEP.

Métodos

Se realizaron las técnicas de Hematoxilina-Eosina y Ziehl-Neelsen a TEP de pacientes fallecidos por SIDA. Adicionalmente, se utilizó el método de Chelex-100 para extraer ADN y evaluar dos juegos de iniciadores para la detección de M. tuberculosis empleando la RCP.

Resultados

Con el empleo del Chelex-100 se obtuvo un material genético con buena calidad y cantidad suficiente. Se identificó M. tuberculosis en las muestras analizas a través de la amplificación de la secuencia específica de inserción (IS6110), demostrando la utilidad de la resina quelante para la RCP de fragmentos cortos.

Conclusión

El método del Chelex-100 brinda una opción menos costosa, rápida, fácil y segura para los estudios moleculares en Anatomía Patológica.

Summary

Introduction

Paraffin-embedded tissue (PET) is an invaluable resource for retrospective molecular studies. Chelex-100 method has been used to DNA extraction from PET. The DNA obtained is used in Polymerase Chain Reaction (PCR) technique. In this work, the utility of Chelex-100 method for the detection of Mycobacterium tuberculosis is showed.

Methods

The Hematoxilyn-Eosin and Ziehl-Neelsen techniques were performed in PET samples from three patients dying of AIDS. Additionally, Chelex-100 method was used for DNA extraction from these tissues and two PCR with different primers were evaluated for identification of M tuberculosis.

Results

Genetic material with a good quality and in enough quantity was obtained the Chelex-100 method. M tuberculosis was identified in the samples by PCR, using a specific sequence (IS 6110). We showed the utility of Chelex-100 method in PCR from short DNA fragments.

Conclusions

The Chelex-100 method is a rapid, easy, safe and inexpensive option in molecular Pathology research.