Análisis microbiológico del semen de los varones en estudio de infertilidad
Microbiological analysis of semen cultures in men undergoing evaluation for infertility
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Los microorganismos podrían afectar la función reproductiva causando aglutinación de los espermatozoides móviles<span class="elsevierStyleSup">3</span>, reduciendo la capacidad de presentar reacción acrosómica<span class="elsevierStyleSup">4</span> y también causando alteraciones de la morfología espermática.</p><p class="elsevierStylePara">La prevalencia de la bacteriospermia en varones, tanto fértiles como infértiles, oscila del 10 al 100% en la bibliografía publicada<span class="elsevierStyleSup">5</span>. Este amplio rango refleja la variedad de protocolos empleados para la recogida de semen. La Organización Mundial de la Salud<span class="elsevierStyleSup">6</span> (OMS) aconseja que se debe tener especial precaución en la recogida de semen para evitar contaminación. También se recomienda una higiene estricta y la conveniencia de orinar antes de recoger el eyaculado. Boucher et al<span class="elsevierStyleSup">7</span> publicaron una significativa reducción en el recuento bacteriano y número de especies, y un incremento en el porcentaje de cultivos estériles cuando se explicaba verbalmente a los pacientes el método de recogida, y no sólo por escrito.</p><p class="elsevierStylePara">La presencia de leucocitos en el eyaculado de varones infértiles y su relación con la presencia de microorganismos está ampliamente documentada. Según criterios de la OMS, valores > 10<span class="elsevierStyleSup">6</span> leucocitos/ml se considera patológico. Sin embargo, hay controversia acerca de la relación entre leucospermia y bacteriospermia, así como si la presencia de bacterias representa únicamente contaminación, sobre todo en varones asintomáticos<span class="elsevierStyleSup">8</span> .</p><p class="elsevierStylePara">El objetivo de este trabajo es analizar los hallazgos microbiológicos encontrados en la población masculina con leucospermia que ha acudido para realizar un estudio de esterilidad.</p><p class="elsevierStylePara"> MÉTODOS</p><p class="elsevierStylePara"> Pacientes</p><p class="elsevierStylePara">Este estudio se ha realizado en 1.376 pacientes que han acudido a la consulta de esterilidad de la Clínica Tambre desde los años 2003 a 2005, a los cuales se les ha realizado un cultivo microbiológico de la primera fracción de la orina, fracción media y semen, para conocer el origen de la contaminación o infección si la hubiere<span class="elsevierStyleSup">9</span> .</p><p class="elsevierStylePara">Los varones incluidos en este estudio fueron instruidos verbalmente y por escrito para una correcta higiene de manos y genitales antes de la recogida de las muestras de orina y semen.</p><p class="elsevierStylePara">El criterio por el cual se realizó un cultivo microbiológico a un paciente en estudio de esterilidad es, principalmente, el hallazgo de más de 6 leucocitos por campo de 40X en el estudio inicial de semen. Los leucocitos se identificaron utilizando la tinción de May-Grunwald-Giemsa.</p><p class="elsevierStylePara">Los patrones microbiológicos de infección son:</p><p class="elsevierStylePara">­ No se valoran como infección los casos con menos de 50 UFC (unidades formadoras de colonias) de microorganismos no patógenos.</p><p class="elsevierStylePara">­ Se consideran como casos con infección los que tienen más de 10<span class="elsevierStyleSup">3</span> UFC de cualquier tipo de microorganismo, o cuando hay cualquier número de colonias de un agente infeccioso.</p><p class="elsevierStylePara">En los casos en que haya infección, se realiza antibiograma.</p><p class="elsevierStylePara"> Diseño experimental</p><p class="elsevierStylePara">El estudio microbiológico se ha realizado en primera parte de la micción, micción media y semen, en los cuales se ha analizado:</p><p class="elsevierStylePara">­ Porcentaje de casos con hallazgo de 1 microorganismo.</p><p class="elsevierStylePara">­ Porcentaje de casos con hallazgo de 2 microorganismos.</p><p class="elsevierStylePara">­ Porcentaje de casos con hallazgo de 3 microorganismos.</p><p class="elsevierStylePara">­ Recuento de colonias en cada uno de los casos.</p><p class="elsevierStylePara">­ Microorganismos hallados más frecuentemente.</p><p class="elsevierStylePara">Se analiza el porcentaje de muestras a las que se les ha indicado antibiograma (por considerar, como antes se ha comentado, que hay un microorganismo patógeno o un título bacteriano alto).</p><p class="elsevierStylePara">Se ha estudiado también la incidencia de micoplasmas (<span class="elsevierStyleItalic">Ureaplasma urealyticum</span>) y el título de UCC (unidades cambiadoras de color) de éstos.</p><p class="elsevierStylePara"> Estudio microbiológico</p><p class="elsevierStylePara">El análisis bacteriológico se realizó utilizando un método cuantitativo en fase sólida. Las placas se cultivaron en condiciones anaeróbicas y aeróbicas. Después de la incubación a 37 ºC se realizó el recuento de colonias utilizando los siguientes test de Bio-Merieux: <span class="elsevierStyleItalic"> Staphylococcus</span>, ID32 Staph test; <span class="elsevierStyleItalic">Streptococcus</span>, AP120 Strep test; Bacteriaceae gramnegativos, K32E test; Bacteriaceae anaeróbicos, ID 32C test, y Mycoplasmaceae, Mycoplasmic IST test.</p><p class="elsevierStylePara"> RESULTADOS</p><p class="elsevierStylePara"> Primera parte de la micción</p><p class="elsevierStylePara">Se ha encontrado un total de 587 casos con presencia bacteriana (42,6% de los incluidos en el estudio). De éstos, 457 muestras (33,2%) presentaban 1 único microorganismo, 124 (9%) 2 microorganismos y 6 (0,4%) 3 microorganismos. En la tabla 1 se muestra el número de casos y porcentajes de aislamiento de 1, 2 o 3 microorganismos en la primera parte de la micción y el número de colonias.</p><p class="elsevierStylePara"><img src="262v5n3-13110285tab01.gif"></img></p><p class="elsevierStylePara"> Micción media</p><p class="elsevierStylePara">Se ha encontrado un total de 343 casos con presencia bacteriana (25% de los incluidos en el estudio). De éstos, 268 casos (19,6%) presentaron 1 único microorganismo, 72 (5,2%) 2 microorganismos y 3 (0,2%) 3 microorganismos. En la tabla 2 se muestra el número de casos y porcentajes con 1, 2 o 3 microorganismos presentes en la micción media y el número de colonias.</p><p class="elsevierStylePara"><img src="262v5n3-13110285tab02.gif"></img></p><p class="elsevierStylePara"> Estudio microbiológico del semen</p><p class="elsevierStylePara">Se ha encontrado un total de 1.095 casos con presencia bacteriana (79,5% de los incluidos en el estudio). De éstos, 763 muestras (55,4%) presentaron 1 único microorganismo, 305 (22,1%) 2 microorganismos y 27 (2%) 3 microorganismos. En la tabla 3 se muestra el número de casos y porcentajes con 1, 2 o 3 microorganismos presentes en el semen y número de colonias.</p><p class="elsevierStylePara"><img src="262v5n3-13110285tab03.gif"></img></p><p class="elsevierStylePara">En la tabla 4 se presenta el número de casos y porcentajes de aislamiento de microorganismos, con título > 10<span class="elsevierStyleSup">3</span> y con microorganismos patógenos en la primera fracción de orina, fracción media y semen de 1.376 varones en estudio de esterilidad en la Clínica Tambre.</p><p class="elsevierStylePara"><img src="262v5n3-13110285tab04.gif"></img></p><p class="elsevierStylePara"> Microorganismos más frecuentes en las distintas fracciones</p><p class="elsevierStylePara">En la tabla 5 se muestran los microorganismos hallados con mayor frecuencia en las distintas fracciones estudiadas: primera micción, micción media y semen. Los microorganismos hallados con mayor frecuencia en la primera fracción de la orina han sido: <span class="elsevierStyleItalic">Staphylococcus epidermidis</span> (48%) y <span class="elsevierStyleItalic">Escherichia coli</span> (28%). Los microorganismos hallados con mayor frecuencia en la fracción media de orina han sido <span class="elsevierStyleItalic">S. epidermidis</span> (35%) y <span class="elsevierStyleItalic">E. coli</span> (37%). Los microorganismos hallados con mayor frecuencia en el semen han sido <span class="elsevierStyleItalic">S. epidermidis</span> (44,5), <span class="elsevierStyleItalic">E. coli</span> (24%) y <span class="elsevierStyleItalic">Streptococcus</span> sp. (10,4%).</p><p class="elsevierStylePara"><img src="262v5n3-13110285tab05.gif"></img></p><p class="elsevierStylePara">En la tabla 6 se muestra el total de microorganismos hallados en el análisis microbiológico del semen de 1.376 varones en estudio de infertilidad.</p><p class="elsevierStylePara"><img src="262v5n3-13110285tab06.gif"></img></p><p class="elsevierStylePara"> Antibiograma</p><p class="elsevierStylePara">Se ha realizado antibiograma a 299 pacientes (21,7% del total).</p><p class="elsevierStylePara"> Estudio de micoplasmas</p><p class="elsevierStylePara">Se ha hallado la presencia de <span class="elsevierStyleItalic">U. urealyticum</span> en 340 casos (24,7% del total analizado) (tabla 7). Sin embargo, <span class="elsevierStyleItalic">Ureaplasma</span> se considera como patógeno cuando hay más de 10<span class="elsevierStyleSup">3</span> UCC. Con este título se han hallado 169 casos (12,2%).</p><p class="elsevierStylePara"><img src="262v5n3-13110285tab07.gif"></img></p><p class="elsevierStylePara"> DISCUSIÓN</p><p class="elsevierStylePara">El semen está compuesto de espermatozoides almacenados en el epidídimo y las secreciones de las vesículas seminales, próstata, y glándulas bulbouretrales, y cada región es normalmente estéril. Por eso es probable que los microorganismos hallados en el semen provengan principalmente de contaminación de la flora uretral o sean comensales de la piel. Aunque los comensales pueden no tener ningún significado en la concepción natural, la contaminación de un cultivo en reproducción asistida puede limitar en gran manera el éxito del proceso. Este hecho da un nuevo impulso al problema. Si la contaminación uretral contribuye significativamente a la bacteriospermia, la fracción media de la orina tendría menos concentraciones de microorganismos que la primera fracción, y la recogida del semen tras la orina puede ser un modo efectivo de reducir la concentración de microorganismos previo a un proceso de reproducción asistida.</p><p class="elsevierStylePara">Las diferentes especies y cepas bacterianas encontradas en el semen de varones infértiles se describieron hace más de 20 años por Swenson et al<span class="elsevierStyleSup">10</span>. Desde entonces, se sabe que alrededor del 70% de las muestras de semen están contaminadas por bacterias, la mayoría de ellas no son patógenas y sin significado sobre la función espermática. Con la aparición de los métodos de amplificación utilizando la reacción en cadena de la polimerasa, se ha llegado a la conclusión de que los métodos microbiológicos de detección utilizados en el pasado han sobreestimado la incidencia de bacteriospermia significativa<span class="elsevierStyleSup">11</span>. Generalmente, se pueden cultivar varios microorganismos del tracto genital de varones infértiles, con más de una cepa bacteriana en la mayoría de los casos<span class="elsevierStyleSup">12.</span>.</p><p class="elsevierStylePara">En controles sanos (n = 42) y pacientes con síntomas de prostatitis (n = 142), en los cuales se ha excluido la prostatitis bacteriana tras 4 tomas para cultivo, no se halló una bacteriospermia significativa. Sin embargo, en prostatitis bacteriana probada, utilizando la misma técnica, la bacteriospermia era valorable en más de la mitad de los pacientes, lo que demuestra la excelente correlación entre la bacteriología del eyaculado y los resultados de la técnica<span class="elsevierStyleSup">13</span>.</p><p class="elsevierStylePara">Con respecto a los microorganismos localizados con más repetición, en un trabajo realizado por Giamarellou et al<span class="elsevierStyleSup">14</span>, que estudió a 30 varones con prostatitis crónica, se encontró que las bacterias más frecuentemente halladas en la secreción prostática eran <span class="elsevierStyleItalic">E. coli</span> y <span class="elsevierStyleItalic"> Stahpylococcus</span>.</p><p class="elsevierStylePara">Como se ha comentado con anterioridad, el eyaculado puede estar contaminado con flora uretral o comensales de la piel. Cottel et al<span class="elsevierStyleSup">15</span> realizaron un estudio para determinar la contribución de la flora comensal al fluido seminal y conocer, además, la relación entre bacteriospermia y leucocitos en semen. Para ello, realizaron cultivos de la primera fracción y fracción media de orina y semen, y evaluaron el número de leucocitos en 60 varones en estudio de infertilidad. Se detectaron microorganismos en el 37% de los casos en la primera fracción de orina, en el 27% de la media, y en el 51% de las muestras de semen. No había correlación entre los microorganismos hallados en semen y el aumento de leucocitos, o entre leucospermia y bacteriospermia y gestación. Estos autores concluyen que la bacteriospermia generalmente representa contaminación. En otros trabajos más recientes<span class="elsevierStyleSup">16</span> tampoco se ha demostrado relación entre la presencia de leucocitos, presencia o ausencia de bacteriospermia y parámetros seminales, sobre todo si no hay signos clínicos de infección<span class="elsevierStyleSup">17</span>.</p><p class="elsevierStylePara">Sin embargo, estos datos difieren de los que hemos encontrado en nuestra experiencia, probablemente debido a algunas diferencias de metodología. Los resultados obtenidos en nuestro estudio han demostrado presencia de bacterias en semen en casi un 80% de los casos, de los cuales el 33% presentaba microorganismos patógenos y el 26% presentaba un título mayor de 10<span class="elsevierStyleSup">3</span> UFC/ml, lo que es algo superior a los datos encontrados en la bibliografía. Los microorganismos hallados con mayor frecuencia, coincidiendo con otros autores<span class="elsevierStyleSup">14</span>, son <span class="elsevierStyleItalic">S. epidermidis</span> y <span class="elsevierStyleItalic">E. coli.</span></p><p class="elsevierStylePara">Por otra parte, nuestro estudio es el que aporta mayor número de pacientes de todos los publicados hasta ahora en la bibliografía, así como es el único, exceptuando el de Cottel et al<span class="elsevierStyleSup">15</span>, en el que se analizan los hallazgos bacteriológicos según los criterios de Meares y Stamey<span class="elsevierStyleSup">9</span>, lo que da mucha más validez a los resultados. Aunque la contaminación uretral se pudiera eliminar, el origen exacto de los microorganismos en semen no podría ser determinado, dadas las diferentes fuentes de los componentes del fluido seminal. Por eso, el papel de la infección en infertilidad debería analizarse mejor con respecto al microorganismo hallado que al lugar del que se sospecha la infección.</p><p class="elsevierStylePara">El papel de <span class="elsevierStyleItalic">U. urealyticum</span> en la infertilidad masculina y su patogenicidad ha generado controversia, y se han mostrado resultados contradictorios en la bibliografía. Por una parte, Andrade-Rocha<span class="elsevierStyleSup">18</span> investigó el valor clínico de <span class="elsevierStyleItalic">U. urealyticum</span> en el análisis de semen de rutina, y afirmó que, dada la baja frecuencia de presentación no es relevante. Sin embargo, en el mismo año, Knox et al<span class="elsevierStyleSup">19</span> publicaron que se encontró un 22% de pacientes tratados por infertilidad con cultivos de <span class="elsevierStyleItalic">Ureaplasma</span> positivos, en los cuales, una vez procesado el semen, seguían unidos a los espermatozoides en un 8,5% de los casos. Nuestro grupo publicó en 1998<span class="elsevierStyleSup">20</span> un trabajo en el cual se contaminaban experimentalmente eyaculados de donantes con distintas concentraciones de <span class="elsevierStyleItalic">Ureaplasma</span>, y se analizaron a distintos tiempos variaciones en los parámetros espermáticos. Se comprobó que tenía lugar un descenso significativo de la movilidad espermática en función del tiempo de incubación y título de <span class="elsevierStyleItalic">Ureaplasma</span>. Asimismo, se evidenció por estudio a microscopia electrónica que <span class="elsevierStyleItalic">Ureaplasma</span> se une a los espermatozoides en la cabeza y segmento intermedio y que así puede transportarse con ellos.</p><p class="elsevierStylePara"> CONCLUSIONES</p><p class="elsevierStylePara">Los resultados obtenidos en este análisis, en el cual ha intervenido una población de 1.376 varones en estudio de esterilidad, sugieren que el papel de la leucospermia en varones asintomáticos debe ser reevaluada. Así, la presencia de un porcentaje mayor al 25% de pacientes con gérmenes patógenos indica la necesidad de realizar un cultivo fraccionado de orina y semen como parte del estudio de esterilidad. Aunque el resultado de fertilidad de estos pacientes no se ha incluido en este estudio, un análisis futuro de estos resultados podría completar los hallazgos mostrados con este trabajo.</p><hr></hr><p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold"> Correspondencia:</span> Dra. R. Núñez Calonge.<br></br> Laboratorio de Andrología. Clínica Tambre.<br></br> Tambre, 8. 28002 Madrid. España.<br></br> Correo electrónico: <a href="mailto:rocio@clinicatambre.com" class="elsevierStyleCrossRefs"> rocio@clinicatambre.com</a></p>" "pdfFichero" => "262v5n3a13110285pdf001.pdf" "tienePdf" => true "PalabrasClave" => array:2 [ "es" => array:1 [ 0 => array:4 [ "clase" => "keyword" "titulo" => "Palabras clave" "identificador" => "xpalclavsec237409" "palabras" => array:4 [ 0 => "Semen" 1 => "Microorganismos" 2 => "Leucocitos" 3 => "Infección" ] ] ] "en" => array:1 [ 0 => array:4 [ "clase" => "keyword" "titulo" => "Keywords" "identificador" => "xpalclavsec237410" "palabras" => array:4 [ 0 => "Semen" 1 => "Microorganisms" 2 => "Leukocytes" 3 => "Infection" ] ] ] ] "tieneResumen" => true "resumen" => array:2 [ "es" => array:1 [ "resumen" => "Introducción: La bacteriospermia se encuentra frecuentemente asociada a muestras de semen de varones en estudio de infertilidad, aun en ausencia de síntomas clínicos de infección de las glándulas sexuales accesorias. Los leucocitos también se encuentran a menudo en el semen de estos varones, aunque hay controversia acerca de la relación entre leucospermia y bacteriospermia, particularmente en pacientes asintomáticos, y acerca de si la presencia de bacterias representa únicamente contaminación. El objetivo de este estudio es analizar los hallazgos microbiológicos del semen de pacientes en estudio de esterilidad y conocer la presencia de microorganismos patógenos. Métodos: Se han analizado los resultados de los cultivos de 1.376 varones (primera fracción de orina, fracción media y semen) en estudio de esterilidad en el período de 2 años. Resultados: En el 26% de los varones se detectó algún microorganismo patógeno en el semen, el más frecuente de ellos <span class="elsevierStyleItalic">Escherichia coli </span>(24%). También se ha hallado un 26% de pacientes con <span class="elsevierStyleItalic">Ureaplasma urealiyticum</span>. Conclusiones: La presencia de un porcentaje mayor del 25% de pacientes con gérmenes patógenos, en una muestra de varones tan alta, indica la necesidad de realizar un cultivo fraccionado de orina y semen en estos pacientes. " ] "en" => array:1 [ "resumen" => "Introduction: Bacteriospermia is frequently found in semen samples from men undergoing evaluation for infertility, even when clinical symptoms of infection of the accessory sex glands are absent. Leukocytes are also frequently found in the semen of these men, although there is controversy on the relationship between leukospermia and bacteriospermia ­especially in asymptomatic patients ­ and on whether the presence of bacteria is simply due to contamination. The aim of the present study was to analyze the microbiological findings in semen from patients undergoing infertility evaluation and to determine the presence of pathogenic microorganisms. Methods: The results of cultures from 1,376 men (first and midstream urine fractions, and semen) undergoing infertility evaluation during a 2-year period were analyzed. Results: In 26% of the men studied, at least one pathogenic microorganism was detected in semen, the most frequent being <span class="elsevierStyleItalic">Escherichia coli</span> (24%). <span class="elsevierStyleItalic">Ureaplasma urealyticum</span> was found in 26% of the men. Conclusions: Pathogenic microorganisms were found in more than 25% of a large sample of men. This finding indicates the need to perform urine and semen culture in these patients. 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| 2024 Septiembre | 278 | 18 | 296 |
| 2024 Agosto | 176 | 19 | 195 |
| 2024 Julio | 104 | 12 | 116 |
| 2024 Enero | 1 | 0 | 1 |
| 2023 Diciembre | 1 | 0 | 1 |
| 2023 Noviembre | 1 | 0 | 1 |
| 2023 Octubre | 3 | 7 | 10 |
| 2023 Mayo | 1 | 0 | 1 |
| 2023 Marzo | 13 | 0 | 13 |
| 2023 Febrero | 1 | 0 | 1 |
| 2021 Julio | 1 | 0 | 1 |
| 2021 Junio | 1 | 0 | 1 |
| 2020 Octubre | 5 | 0 | 5 |
| 2019 Diciembre | 1 | 0 | 1 |
| 2019 Noviembre | 1 | 0 | 1 |
| 2019 Octubre | 1 | 0 | 1 |
| 2019 Junio | 2 | 2 | 4 |
| 2019 Abril | 4 | 0 | 4 |
| 2018 Diciembre | 1 | 0 | 1 |
| 2018 Mayo | 1 | 0 | 1 |
| 2018 Abril | 321 | 13 | 334 |
| 2018 Marzo | 423 | 9 | 432 |
| 2018 Febrero | 318 | 11 | 329 |
| 2018 Enero | 298 | 4 | 302 |
| 2017 Diciembre | 242 | 11 | 253 |
| 2017 Noviembre | 416 | 32 | 448 |
| 2017 Octubre | 329 | 5 | 334 |
| 2017 Septiembre | 315 | 5 | 320 |
| 2017 Agosto | 305 | 45 | 350 |
| 2017 Julio | 442 | 116 | 558 |
| 2017 Junio | 468 | 120 | 588 |
| 2017 Mayo | 541 | 110 | 651 |
| 2017 Abril | 742 | 94 | 836 |
| 2017 Marzo | 751 | 163 | 914 |
| 2017 Febrero | 804 | 202 | 1006 |
| 2017 Enero | 392 | 106 | 498 |
| 2016 Diciembre | 427 | 95 | 522 |
| 2016 Noviembre | 616 | 166 | 782 |
| 2016 Octubre | 551 | 177 | 728 |
| 2016 Septiembre | 569 | 213 | 782 |
| 2016 Agosto | 572 | 170 | 742 |
| 2016 Julio | 444 | 123 | 567 |
| 2016 Junio | 343 | 149 | 492 |
| 2016 Mayo | 395 | 180 | 575 |
| 2016 Abril | 447 | 206 | 653 |
| 2016 Marzo | 404 | 166 | 570 |
| 2016 Febrero | 386 | 103 | 489 |
| 2016 Enero | 462 | 115 | 577 |
| 2015 Diciembre | 411 | 85 | 496 |
| 2015 Noviembre | 539 | 113 | 652 |
| 2015 Octubre | 734 | 98 | 832 |
| 2015 Septiembre | 606 | 78 | 684 |
| 2015 Agosto | 536 | 50 | 586 |
| 2015 Julio | 681 | 49 | 730 |
| 2015 Junio | 567 | 33 | 600 |
| 2015 Mayo | 643 | 41 | 684 |
| 2015 Abril | 609 | 36 | 645 |
| 2015 Marzo | 697 | 18 | 715 |
| 2015 Febrero | 729 | 15 | 744 |
| 2015 Enero | 339 | 14 | 353 |
| 2014 Diciembre | 494 | 10 | 504 |
| 2014 Noviembre | 551 | 12 | 563 |
| 2014 Octubre | 512 | 8 | 520 |
| 2014 Septiembre | 443 | 15 | 458 |
| 2014 Agosto | 428 | 10 | 438 |
| 2014 Julio | 469 | 10 | 479 |
| 2014 Junio | 371 | 8 | 379 |
| 2014 Mayo | 340 | 7 | 347 |
| 2014 Abril | 297 | 8 | 305 |
| 2014 Marzo | 280 | 5 | 285 |
| 2014 Febrero | 251 | 6 | 257 |
| 2014 Enero | 217 | 2 | 219 |
| 2013 Diciembre | 169 | 1 | 170 |
| 2013 Noviembre | 153 | 10 | 163 |
| 2013 Octubre | 142 | 5 | 147 |
| 2013 Septiembre | 111 | 5 | 116 |
| 2013 Agosto | 69 | 10 | 79 |
| 2013 Julio | 58 | 6 | 64 |
| 2007 Junio | 2135 | 0 | 2135 |
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