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PROYECTO GEIH-Ab 2001: ESTUDIO MULTICÉNTRICO DE LA EPIDEMIOLOGÍA DE ACINETOBACTER BAUMANNII
J. Rodríguez Baño, J.M. Cisneros, J. Vila, A. Pascual, L. Martínez Martínez, G. Bou, J. Pachón y Grupo de Estudio de Infección Hospitalaria (GEIH)
Objetivos: Numerosos hospitales han comunicado brotes epidémicos causados por A. baumannii (AB). Este estudio pretende describir la epidemiología de este microorganismo en una amplia muestra de hospitales españoles.
Métodos:Estudio prospectivo multicéntrico de prevalencia de periodo de colonización/infección por AB. Se incluyeron todos los casos detectados a partir de muestras clínicas durante el mes de noviembre de 2000 en los hospitales que aceptaron participar. Las cepas se enviaron a un laboratorio centralizado para identificación definitiva.
Resultados: Participaron 28 hospitales que atienden a una población de más de 11 millones de personas (6 de Andalucía; 5 de Cataluña, Comunidad de Madrid y Galicia; 2 de Castilla-La Mancha; y 1 de Baleares, Canarias, Cantabria, Castilla-León y Navarra); uno de ellos es un centro de crónicos. Siete tienen < 500 camas, 10 tienen entre 500 y 1.000 camas, y 11 > 1.000 camas. En el periodo de estudio se aisló AB en 25 centros (89%). El número de casos incluidos fue de 245. El rango de casos por hospital fue de 0 a 42. La prevalencia de periodo fue de 0,19 casos por 1.000 estancias (rango: 0 a 1,17). No hubo diferencias significativas por comunidades autónomas o tamaño del centro. El 93% de los casos se consideró de adquisición nosocomial, el 3% importados de otro centro y el 4% comunitarios. Solo 3 casos fueron pediátricos. La prevalencia de periodo fue mayor en UCIs (1,29 casos por 1.000 estancias) que en servicios médicos o quirúrgicos. La mediana de estancia previa a la obtención de la muestra fue de 15 días.
Conclusiones:AB se aisló en la mayoría de hospitales participantes, siendo principalmente de adquisición nosocomial tardía. Algunos casos se consideraron importados de otros centros. Hay un absoluto predominio en adultos. La prevalencia de periodo fue muy variable entre los hospitales, y fue mayor en las UCIs que en otros servicios.
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PROYECTO GEIH-Ab 2001: CARACTERÍSTICAS CLÍNICAS DE LA COLONIZACIÓN/INFECCIÓN POR A. BAUMANNII EN HOSPITALES ESPAÑOLES
J.M. Cisneros, J. Rodríguez-Baño, A. Pascual, L. Martínez-Martínez, J. Vila, G. Bou, J. Pachón y Grupo de Estudio de Infección Hospitalaria (GEIH).
Métodos:Estudio prospectivo multicéntrico de prevalencia de período de colonización/infección por A. baumannii. Se incluyeron todos los pacientes con aislamiento de A. baumannii en muestras clínicas durante el mes de noviembre del año 2000.
Resultados: Se incluyeron 206 pacientes pertenecientes a 25 hospitales. Edad media 54,3 años (0-91 años), 149 varones (72%). Enfermedad subyacente crónica 149 (72%). Adquisición nosocomial 201 (97,6%). Factores de riesgo más comunes: tratamiento antimicrobiano 164 (80%); sonda uretral 161 (78%) y estancia en UCI 142 (69%). Muestras clínicas más frecuentes: respiratorias 82 (40%); orina 51 (25%); exudado herida quirúrgica 46 (22%) y sangre 8 (4%). Se consideraron infección 110 casos (53%) y colonización 96 (47%). La neumonía fue la infección más común 36 (33%), seguida de la ITU 17 (15,5%), la traqueobronquitis 16 (14,5%) y la infección de la herida quirúrgica 15 (14%). La infección se manifestó con sepsis grave, shock séptico o síndrome de disfunción multiorgánica en 29 (26%). Recibieron tratamiento antimicrobiano apropiado 71 pacientes (64,5%). La mortalidad a los 30 días del diagnóstico fue del 18,9% (39 pacientes). En los pacientes infectados la mortalidad y la estancia hospitalaria postcultivo fueron mayores que en los colonizados (26,3% vs 10,4%, p < 0,05 y 23,2 vs 19,2 días, p < 0,05). En los pacientes infectados la presencia de sepsis grave/shock séptico; la estancia en UCI y el tratamiento inapropiado son los factores independientes de mal pronóstico seleccionados en el análisis multivariante.
Conclusiones: A. baumannii causa con igual frecuencia colonización e infección nosocomial. La infección se acompaña de mayor morbimortalidad que la colonización. En los pacientes infectados el tratamiento antimicrobiano inapropiado es un factor independiente de mal pronóstico.
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INFECCIÓN NOSOCOMIAL POR ACINETOBACTER BAUMANNII EN ÁREAS DE MEDICINA INTERNA Y CUIDADOS INTENSIVOS EN NUESTRO HOSPITAL
M.T. Cabezas, J. Salas, J. Fierro, M.A. Molina, M.J. Giménez, L. Martínez, T. Fernández, R. Álvarez-Ossorio, J.A. Sáez y C. Avivar
H. Poniente. El Ejido, Almeria. ISCIII.
Objetivos: Estudio descriptivo de la situación en nuestro hospital, de la infección por Acinetobacter baumannii (A.b.).
Material y métodos: Se ha aislado A.b. en 56 pacientes en el período comprendido entre 1 de marzo de 1999 y 31 de octubre de 2001. Para el control de la infección se tomaron muestras ambientales (habitaciones de paciente, equipo médico y personal sanitario), mediante el método de gasa húmeda. El cultivo de A.b. en Agar MacConckey (Biomerieux®) y la identificación y el estudio de sensibilidad en VITEK (Biomerieux®), y en paralelo, antibiograma en Agar-Müller-Hinton con técnicas disco-difusión. El serotipado se llevó a cabo en CNM-ISCIII mediante PFGE.
Resultados: La edad media de los pacientes media es de 72 ± 11 años (rango 22-88) con un perfil similar: edad avanzada, patología crónica de base, ingresos previos (44%), y politratados con diferentes antibióticos. Se han aislado 187 cepas, 73 en esputo, 59 en heridas, 6 en sangre, 5 en catéter y, además, 122 cepas en muestras ambientales. Hasta septiembre del 2001 se detectan brotes epidémicos en área de MI; a partir de entonces aparece un brote en UCI. Durante el año 1999 predomina el serotipo 1 (a,b,c) en 6 pacientes y en 2, se aislaron 2 serotipos diferentes. En el año 2000 se serotiparon 22 cepas: hasta julio, 14 eran serotipo 1 (10 cepas) y 1 de los serotipos 3, 4, 5, 6. A partir de octubre del 2000 a marzo del 2001 aparece el serotipo 14 en 9 de 16 cepas. La sensibilidad a Imipenem es estable durante todo el período (63,3%), al igual que a Ampicilina + Sulbactam (72,7%); a Tobramicina, disminuye claramente durante el 2001 (de 54,24% a 27%). Todas las cepas testadas frente a Colistina han sido sensibles (93).
Conclusiones:En nuestros pacientes, Acinetobacter baumannii es responsable de una elevada morbimortalidad. Observamos la desaparición del serotipo 1 a favor del serotipo 14, demostrando mayor resistencia. La Colistina parece ser una buena alternativa de tratamiento.
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ACINETOBACTER BAUMANNII: ¿EXISTE LA TRASMISIÓN AÉREA NOSOCOMIAL?
A. Cotura, C. Roig, A. Rivera, P. Cortes, F. Sánchez y J. Barrio
Servei Microbiologia y Unitat Malalties Infeccioses. Hospital Sant Pau. Barcelona.
Objetivos: Evaluar la correlación entre cepas aisladas del aire en una Unidad de Cuidados Intensivos con cepas aisladas de controles de portadores en esa Unidad.
Métodos:Durante un control ambiental rutinario en la Unidad de Cuidados Intensivos de nuestro hospital se detectó la presencia en el aire de Acinetobacter baumannii cuyo patrón de sensibilidad era comparable al de las cepas de la misma especie aisladas de pacientes ingresados en esa Unidad. Como consecuencia de esta observación se estudió la relación entre las cepas de ambos orígenes. Se han evaluado seis cepas: tres de procedencia aérea (obtenidas a partir del muestreador Air Sampler MAS 100 System, Merck) y tres de procedencia humana, según el protocolo establecido por el hospital para control de portadores (frotis faríngeo, rectal y axilar). Las cepas de Acinetobacter baumannii fueron identificadas mediante pruebas bioquímicas y se realizaron los estudios de sensibilidad a los antimicrobianos por técnicas de difusión y microdilución. La posible relación clonal entre las cepas se estableció mediante estudio del patrón de sensibilidad y del patrón de macrorrestricción genómica por PFGE utilizando la enzima ApaI.
Resultados: En las tres cepas de origen aéreo se detectó tres patrones de sensibilidad (I, II, III) y tres pulsotipos (A, B, C) existiendo una correlación absoluta entre ambos (AI, BII, CIII). De estas tres clonas, dos de ellas, AI y BII, se aislaron en los frotis de los pacientes.
Conclusiones:La difusión de Acinetobacter baumannii en el medio intrahospitalario tiene lugar, fundamentalmente, por contacto a través de las manos y fomites. El aislamiento de la misma cepa en el aire y en los pacientes colonizados sugiere la posibilidad de valorar prospectivamente el papel de la transmisión aérea en la diseminación de cepas multirresistentes en unidades como las de Cuidados Intensivos.
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ANÁLISIS GENOTÍPICO DE UN BROTE DE INFECCIÓN NOSOCOMIAL POR ACINETOBACTER BAUMANNII MULTIRRESISTENTE
A. Saldarreaga, P. Marín, P. García-Martos, J. Puerto, J. Mira, R. Cisterna y A. García-Tapia
Hospital Puerta del Mar, Cádiz. Hospital de Basurto, Bilbao.
Objetivos: Comunicar un brote de infección por Acinetobacter baumannii multirresistente y caracterizar molecularmente las cepas para determinar su relación genética y definir los distintos clones implicados.
Métodos:Se estudiaron un total de 22 aislados clínicos de A. baumannii pertenecientes a otros tantos pacientes, 20 de ellos ingresados en Cuidados Intensivos, obtenidos en un período de 4 meses. La identificación se realizó mediante sistema comercial WIDER (Soria Melguizo, Madrid) y pruebas convencionales. La sensibilidad a antimicrobianos se efectuó por dilución en medio líquido según las normas del NCCLS. La caracterización genotípica se llevó a cabo mediante el análisis del polimorfismo de los fragmentos de restricción (RFLP), utilizando la técnica ERIC-PCR (Enterobacterial Repetitive Intergenic Concensus Secuences-Polimerase Chain Reaction), con los primers ERIC I y ERIC II, y RAPD (Randomly Amplified Polymorphic DNA) con el primer AP3.
Resultados: El análisis genómico permitió identificar 6 patrones de amplificación diferentes entre las 22 cepas de A. baumannii; clones denominados aleatoriamente 1, 2, 3, 4, 5, 6. El clon 2 fue el predominante, englobando al 55% de las cepas, todas ellas resistentes a imepenem y meropenem y sensibles a colimicina. El 22% de los aislamientos pertenecieron al clon 1, con el mismo perfil de resistencia a carbapenemas que el clon 2. Solamente 2 aislamientos (9%) se incluyeron en el clon 3. Las tres cepas restantes mostraron patrones o clones diferentes.
Conclusiones:En el brote epidémico de infección por Acinetobacter baumannii detectado en la Unidad de Cuidados Intensivos de nuestro hospital, existe un clon predominante al que pertenecen la mayor parte de las cepas. Las técnicas de biología molecular son suficientemente discriminatorias para diferenciar especies y subespecies de Acinetobacter y, por tanto, una herramienta muy valiosa para tipificar brotes de infección, dada la limitación de otros marcadores epidemiológicos.
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ESTUDIO DE LAS CARACTERÍSTICAS GENÉTICAS DE LOS AISLAMIENTOS DE ACINETOBACTER BAUMANNII PROCEDENTES DEL HOSPITAL DE SANTA MARINA (BILBAO)
M.J. Canduela*, F. López-Otsoa*, I. Pujana*, G. Martín**, K. Towner*** y L. Gallego*
*Dpto. Inmunología, Microbiología y Parasitología. Facultad de Medicina y Odontologia. UPV. **Servicio Microbiología Hospital de Santa Marina. ***QMC-PHLS Nottingham, UK.
El objetivo de este estudio fue determinar las características genéticas y epidemiológicas de los aislamientos de Acinetobacter baumannii aislados en el hospital de Santa Marina (Bilbao) de pacientes bronquiectásicos crónicos.
Se analizaron un total de 126 aislamientos clínicos. Para la identificación se utilizó la técnica de PCR con los iniciadores AP3, ERIC2 y M13. Los resultados obtenidos se analizaron mediante el programa Molecular Analyst/Machintosh Fingerprinting. En todos los aislamientos se realizó también un análisis del contenido plasmídico.
Se identificaron 20 clones diferentes mediante el iniciador M13. Sin embargo con los iniciadores AP3 y ERIC2 se observaron diferencias en algunas cepas de 2 o 3 bandas mostrando 9 variantes subclonales. Tres fueron los clones predominantes: uno de ellos con 51 aislamientos (40,47%), otro con 33 aislamientos (26,2%) y un tercero con 11 aislamientos (8,73%).
51 aislamientos contenían plásmidos cuyos tamaños estaban representados en un rango de 205 -1,35 kb
En conclusión, el número de clones encontrados fue elevado pero la mayor parte de los aislamientos pertenecían a tres clones. Esto significa la amplia diseminación de estos genotipos en el medio ambiente hospitalario estudiado. Para determinar el clon definitivo es importante combinar los resultados de varios iniciadores. La mayoría de los aislamientos no contenían plásmidos y tampoco observamos ninguna relación entre los clones aislados y su contenido plamídico.
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CONTROL DE DOS BROTES POR ACINETOBACTER BAUMANNII MULTIRRESISTENTE EN UNA UNIDAD DE CUIDADOS INTENSIVOS POSQUIRÚRGICOS
B. Padilla, C. Sánchez-Carrillo, C. Pérez, J. Guinea, J.A. Gómez y E. Bouza
Servicio de Microbiología Clínica. H. Gregorio Marañón. Madrid.
Objetivo: Descripción de dos brotes nosocomiales por Acinetobacter baumannii multirresistente (AB-MR) y su control en una unidad de cuidados intensivos post-quirúrgicos de nuestro hospital donde no existía previamente infección y/o colonización por este microorganismo.
Métodos: Tras la aparición de cada caso índice, se inició un plan de actuación para detectar activamente pacientes que presentaran colonización por AB-MR mediante la realización de 3 muestras (exudado rectal, piel y muestra del TRS) a todos los pacientes que permanecían al menos 48 h en la unidad y semanalmente hasta el alta. A los pacientes con aislamiento de AB-MR en cualquier muestra se les sometió a un estricto aislamiento de contacto y lavados con clorhexidina.
Resultados: El primer brote tuvo lugar desde abril a octubre 1998 (196 pacientes estudiados) y el segundo desde abril a julio 2001 (98 pacientes estudiados). El número de pacientes colonizados y/o infectados fue de 27 en el 1er brote y 7 para el segundo. La estancia media de los pacientes con colonización respecto a los no colonizados de la misma unidad fue de 27,6/7,2 días para el 1er brote y de 38,3/6,9 días para el segundo. La mortalidad global fue de 32,2 y 71,4% para el primer y segundo brote respectivamente. Globalmente, el rendimiento para la detección de AB-MR fue de 72, 70 y 68% para la muestra rectal, de piel y respiratoria respectivamente. Después de un periodo de seguimiento de 3 meses tras el alta del último paciente detectado en cada brote, no se evidenció ningún caso nuevo.
Conclusión: La detección activa y rápida de pacientes infectados y de posibles colonizados así como el cumplimiento inmediato y estricto de las medidas de aislamiento, son medios útiles para el control de un brote por AB-MR en una unidad sin incidencia previa por este microorganismo.
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ERRADICACIÓN DE UN BROTE DE A. BAUMANNII (AB) EN UNA UNIDAD DE CUIDADOS INTENSIVOS
M. Navarro, J. Vallés, G. Serrate, M. Canals, D. Fontanals, D. Mendoza y F. Segura
Corporació Sanitària Parc Taulí. Dpto. Enfermedades Infecciosas. Sabadell, Barcelona.
En agosto de 2001 apareció un brote de A. baumannii en la UCI de nuestro centro, lo que motivó la puesta en marcha de un programa de control.
Objetivos: Describir las características del brote y evaluar la eficacia de las medidas de aislamiento y los métodos de control empleados.
Métodos:Se iniciaron medidas de aislamiento de contacto en el caso índice y con la detección del segundo caso se procedió al aislamiento por cohortes (pacientes colonizados, no colonizados y los que ingresaron posteriormente). Se recogían semanalmente muestras faríngeas, perianales, axilares u otras según criterio clínico y se continuaron los cultivos hasta tres semanas después de la aparición del último caso. Se utilizó para la siembra un medio Mckonkey y posteriormente, al comprobar que se trataba de un brote epidémico, un medio selectivo. Se destinó un equipo exclusivo de enfermería para los enfermos colonizados en UCI y posteriormente en las unidades de hospitalización.
Resultados: Total de pacientes con AB: 11 (1 infección, caso índice, y 10 colonizaciones. En los primeros 15 días se detectaron 4 casos y en los 20 días posteriores los restantes. En este momento se restringió el número de ingresos y se mantuvieron cerradas 6 camas durante 3 días utilizándose seguidamente para nuevos ingresos, estableciéndose medidas de aislamiento de contacto en todos ellos. Sólo se detectó un nuevo caso después de la adopción de estas medidas. El número máximo de pacientes colonizados simultáneamente en UCI fue 6/14 (42,8%). Media días de positivización desde el ingreso en UCI: 14,6 (1-48). La axila fue primer lugar de detección de muestras positivas en 6 casos (3 casos con simultaneidad). El total de pacientes a los que se les realizó cultivos de vigilancia fue 110 (10% pacientes colonizados).
Conclusiones:La aplicación precoz de medidas de aislamiento, la distribución de los pacientes en cohortes y la colaboración de todo el equipo asistencial ha permitido erradicar el brote de A. baumannii en nuestro centro.
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DIFERENCIACIÓN DE BIOTIPOS DE A. CALCOACETICUS-A. BAUMANNII MEDIANTE ESPECTROMETRÍA INFRARROJO POR TRANSFORMADA DE FOURIER (FTIR)
A.I. Dueñas, M.A. Bratos, J.M. Eiros, A. Mayo, M.A. Miguel, A. Orduña y A. Rodríguez-Torres
Servicio de Microbiología. Hospital Clínico Universitario, Facultad de Medicina, Valladolid.
Objetivos: Diferenciar los biotipos de A. calcoaceticus-A. baumannii mediante espectrometría de infrarrojo por transformada de Fourier.
Material y métodos: Se estudiaron 356 cepas de A. calcoaceticus-A. baumannii que se identificaron y biotipificaron según el esquema simplificado de Bouvet y Grimont. Las muestras se procesaron para la espectrometría (se sembraron en caldo, se sometieron a tres ciclos de lavado-centrifugación y los sedimentos se liofilizaron) y se analizaron en un espectrofotómetro Cygmus 100 FT-IR Spectrometer (Mattson Instruments). Se obtuvo el registro (espectro) de la región del infrarrojo medio (4.000-500 cm-1) y los datos se analizaron estadísticamente mediante análisis de componentes principales y análisis discriminante mediante el programa el programa SAS v.6.12
Resultados: Los mejores porcentajes de correcta clasificación de los cuatro biotipos estudiados se obtuvieron en el análisis discriminante de las dos primeras ventanas del espectro (900-700 cm-1y 1.200-900 cm-1) y sus derivadas, que fueron del 57,9% para el biotipo 2, el 76,5% para el biotipo 9, el 85,6% para el biotipo 1 y el 93,3% para el biotipo 18, con una especificidad próxima al 100% para este último biotipo. En las demás ventanas del espectro (1.500-1.200 cm-1, 1.800-1.500 cm-1, 3.000-2.800 cm-1) se obtuvieron, en general, porcentajes de clasificación más bajos. Se analizaron, además, las combinaciones por parejas de las tres ventanas más discriminativas, con las que no se mejoraron los resultados obtenidos con el análisis de las ventanas por separado.
Conclusiones:La espectrometría-FTIR se ha mostrado útil para diferenciar algunos biotipos de A. calcoaceticus-A. baumannii, especialmente el biotipo 18, aunque se requieren más estudios para confirmar estos resultados.
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PROYECTO GEIH-Ab 2001: SENSIBILIDAD DE ACINETOBACTER SPP. AISLADOS EN HOSPITALES ESPAÑOLES A LOS ANTIMICROBIANOS
F. Fernández Cuenca, A. Pascual, J. Vila, G. Bou, J.M. Cisneros, J. Rodríguez Baño, J. Pachón, L. Martínez Martínez y Grupo de estudio de Infección Hospitalaria (GEIH)
Objetivo: Determinar la sensibilidad de los aislamientos de Acinetobacter spp. (Ab) del proyecto GEIH a antimicrobianos de uso clínico.
Métodos:Se incluyeron 244 cepas aisladas durante noviembre de 2000 en 28 hospitales españoles. La identificación se realizó mediante pruebas bioquímicas y genotípicas (ARDRA). La relación clonal entre las cepas de Ab se determinó mediante PFGE. Las CMIs de amicacina (AK), ampicilina (AP), ampicilina más sulbactam (A/S), azitromicina (AZ), cefalotina (CF), cefepima (FP), cefoxitina (FX), ceftazidima (CZ), ciprofloxacino (CP), doxiciclina (DX), gemifloxacino (GX), gentamicina (GN), imipenema (IP), meropenema (MP), piperacilina (PP), polimixina B (PB), rifampicina (RF), sulbactam (SB) y tobramicina (TO) se determinaron mediante microdilución, siguiendo las recomendaciones del NCCLS.
Resultados: Se obtuvieron 96 clones diferentes de Ab. La sensibilidad se estudió con un representante de cada clon, incluyéndose, dentro de un mismo clon todas las cepas con distinta sensibilidad a CZ, SB, IP, CP, GN AK y DX. La CMI50 (mg/L) fue similar a la CMI90 para AP, PP, CF y FX (>= 512), GN (>= 256), CP (>= 128) y GX (>= 32), mientras que para los demás antimicrobianos estos valores fueron 64 y >= 512 (CZ), 32 y 256 (AK, FP), 8 y 64 (DX, SB), 16 y 128 (A/S), 1 y 128 (IP), 2 y >= 128 (MP), 8 y 128 (TO), 32 y 64 (AZ), 4 y 8 (RF) y 1 y 2 (PB), respectivamente. Los porcentajes de cepas sensibles y con sensibilidad intermedia (para los que se definen puntos de corte por el NCCLS) fueron 6,2 y 15,8 (PP), 25,9 y 6,8 (CZ), 24,9 y 15,3 (FP), 57,6 y 17,5 (SB), 44,1 y 24,3 (A/S), 63,3 y 6,2 (IP), 53,1 y 9,0 (MP), 18,6 y 0,6 (CP), 22,0 y 4,5 (GN), 33,3 y 16,4 (TO), 49,2 y 12,4 (AK) y 45,2 y 4,0 (DX), respectivamente.
Conclusiones:Existe gran variabilidad en los patrones de sensibilidad de Ab aislados en España a los antimicrobianos. Los antimicrobianos más activos frente a Ab fueron PB, RF, IP, MP, DX, SB y A/S.
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DETERMINACIÓN DE LA SENSIBILIDAD ANTIBIÓTICA EN AISLAMIENTOS CLÍNICOS DE ACINETOBACTER BAUMANNII
F. Lopez-Otsoa*, M.J. Canduela*, I. Pujana*, G. Martín**, K. Towner*** y L. Gallego*
*Universidad del País Vasco. **H. de Santa Marina. ***QMC-PHLS Nottingham, U.K.
Se analizaron 126 aislamientos de Acinetobacter baumannii, recogidos durante 18 meses en el Hospital de Santa Marina (Bilbao). El objetivo del estudio fue el análisis de la susceptibilidad antibiótica y la relación epidemiológica entre aislamientos. La susceptibilidad frente a los antibióticos testados (CMI) fue realizada siguiendo las normas de la NCCLS. Las técnicas empleadas para la caracterización genética fueron AP-PCR: AP3 (5'-TCACGATGCA-3') y ERIC-PCR: ERIC2 (5'-AAGTAAGTCACTGGGGTGAGCG-3). El análisis epidemiológico se realizó utilizando el software informático: Molecular Analyst/Macintosh Fingerprinting.
El porcentaje de aislamientos resistentes frente a cada uno de los antibióticos ensayados fue el siguiente: Cefotaxima: 90%, Amikacina: 49%, Gentamicina: 85% Imipenem: 61%, Meropenem: 59%, Ticarcilina: 83%, Ceftazidima: 86%, Cefepime: 82%, Aztreonam: 82%, Ciprofloxacino: 86%, Norfloxacino: 88%, Levofloxacino: 89% y Ofloxacino: 92%. Este patrón de resistencias reveló a la Amikacina como antibiótico más eficaz, siendo el Ofloxacino el menos activo. Los perfiles de amplificación obtenidos con cada secuencia, nos demostraron de manera inequívoca, la existencia de 29 agrupaciones clonales, siendo 3 de ellos predominantes (62% de la población analizada).
Como conclusión, destacar que la mayoría de cepas multirresistentes pertenecía a una de las agrupaciones clonales mayoritarias, aunque también había aislamientos multirresistentes en el resto de agrupaciones identificadas y afirmar que el aumento de cepas de Acinetobacter baumannii multirresistentes del Hospital de Santa Marina (Bilbao), parece deberse principalmente a la diseminación de un clon multirresistente mayoritario.
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SENSIBILIDAD A DIVERSOS ANTIBIÓTICOS DE LAS CEPAS DE DIFERENTES BIOTIPOS DE A. CALCOACETICUS-A.BAUMANNII
A.I. Dueñas, J.M. Eiros, M.A. Bratos, C. Merino, M.A. Miguel, P. Gutiérrez, A. Orduña y A. Rodríguez-Torres
Servicio de Microbiología. Hospital Clínico Universitario, Facultad de Medicina de Valladolid.
Objetivos: Estudiar la sensibilidad mediante microdilución en caldo de cepas de distintos biotipos de cepas de A. calcoaceticus-A. baumannii aisladas entre marzo de 1999 y enero de 2000.
Material y métodos: La identificación presuntiva de las cepas de Acinetobacter y el antibiograma se obtuvieron mediante paneles comerciales (Wider, Fco Soria Melguizo, Madrid). La identificación a nivel de especie se confirmó con las pruebas indicadas en el esquema simplificado de Bouvet y Grimont. La biotipificación de las cepas se realizó mediante pruebas de asimilación de sustratos siguiendo el procedimiento descrito por Bouvet y Grimont.
Resultados: Se identificaron ocho biotipos entre las cepas de A. calcoaceticus-baumannii: biotipo 1 (271), biotipo 2 (30), biotipo 3 (1), biotipo 6 (1), biotipo 8 (4), biotipo 9 (5), biotipo 14 (1) y biotipo 18 (11). Las cepas del biotipo 1, mostraron porcentajes de sensibilidad inferiores al 10% frente a piperacilina, ticarcilina, amicacina, gentamicina, tobramicina, aztreonam las cuatro cefalosporinas ensayadas y las dos quinolonas. Los porcentajes de sensibilidad más altos se observaron rente a sulbactam (76,9%) e imipenem (91,2%). Los porcentajes de sensibilidad frente a la mayoría de los antibióticos de las cepas del biotipo 2 fueron ligeramente superiores a los del biotipo 1, con porcentajes del 85,7% para el sulbactam y del 96,4% para el imipenem. Las cepas de los restantes biotipos consideradas conjuntamente, mostraron porcentajes de sensibilidad superiores al 80% frente a ocho de los antibióticos ensayados (ticarcilina, ceftriaxona, cefepime, piperacilina-tazobactam, sulbactam, imipenem, meropenem y amicacina).
Conclusiones:Se observaron diferencias en la sensibilidad de las cepas de los distintos biotipos de A. calcoaceticus-A. baumannii estudiadas, siendo las cepas de los biotipos 1 y 2 más resistentes que las de los restantes biotipos.
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ANÁLISIS IN VITRO DE LA ACTIVIDAD DE VARIOS ANTIBIÓTICOS RESPECTO A LA COLISTINA FRENTE A UNA CEPA DE ACINETOBACTER BAUMANII (Ab) CON ALTA RESISTENCIA (R) A CARBAPENÉMICOS
C. Borraz, A. Montero, J. Ayats, F. Tubau, A. Doménech, S. Ribes, C. Ardanuy y J. Ariza
Hospital de Bellvitge. Departamento de Enfermedades Infecciosas. Hospitalet Llobregat, Barcelona.
Ab presenta en la actualidad en muchos hospitales del mundo R a todos los antibióticos, incluidos los carbapenémicos. En nuestro hospital, la cepa prevalente presenta R de alto nivel a imipenem (IMP) (CMI = 512) y sulbactam (SUL) (CMI = 128), y CMI = 8 de tobramicina (TOB) y rifampicina (RIF), y es sensible únicamente a la colistina (COL) (CMI = 0,5).
Objetivos: Valorar la actividad de la COL en solitario frente al resto de ATB y sus combinaciones mediante el método de curvas de letalidad.
Métodos:Se estudiaron cada uno de los ATB en solitario a concentraciones de 2x, 1x, 1/2x y 1/4x CMI. El efecto bactericida de la COL se estudió a concentraciones de 4x, 8x, 16x y 32x CMI. Las combinaciones estudiadas fueron: IMP+TOB, IMP+RIF, IMP+SUL, SUL+TOB, SUL+RIF y TOB+RIF, a concentraciones de 1x, 1/2x y 1/4x CMI para cada uno de los antibióticos. Un ATB se definió como bactericida cuando se obtuvo un descenso en el número de LOGs de UFC >= 3 respecto al inóculo inicial. Se definió como sinergia entre 2 ATB cuando el efecto de LOGs de la combinación fue >= 2 comparado con la actividad del ATB más activo en solitario.
Resultados: Con cada ATB en solitario, IMP y RIF fueron bactericidas a las 24 h a concentraciones de 1x y 2x CMI. La COL mostró actividad bactericida con concentraciones >= 16x CMI. Respecto a la utilización de 2 ATB en combinación, las combinaciones de IMP con SUL, TOB o RIF, de SUL con TOB o RIF y de RIF con TOB presentaron actividad aditiva o sinérgica.
Conclusiones:Mediante el método de curvas de letalidad frente una cepa de Ab con alta R a carbapenémicos el único ATB bactericida a concentraciones alcanzables en humanos fue la RIF. La COL mostró escasa eficacia, precisando concentraciones >= 16x CMI para lograr un efecto bactericida. Las combinaciones IMP con SUL, TOB o RIF, SUL con TOB o RIF y TOB con RIF podrían ser alternativas terapéuticas en el tratamiento de las infecciones causadas por Ab resistente a carbapenémicos.
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MECANISMO DE ACCIÓN ANTIBIÓTICA SOBRE ACINETOBACTER BAUMANNII MULTIRRESISTENTES DE PÉPTIDOS CORTOS CECROPINA-MELITINA
J.M. Saugar*, T. Alarcón**, C. Chiva***, M. López-Brea**, D. Andreu*** y L. Rivas*
*Centro de Investigaciones Biológicas (CSIC), Madrid. **Hospital Universitario La Princesa, Madrid. ***Universidad Pompeu Fabra, Barcelona.
Los péptidos antibióticos eucariotas constituyen una potencial alternativa quimioterapéutica a los antibióticos habituales1 frente a la cada vez más frecuente aparición de multirresistencias en Acinetobacter baumannii, incluyendo polimixina B2. Recientemente hemos descrito la actividad del análogo de cecropina A-melitina CA(1-8)M(1-18) frente a Acinetobacter multirresistente3, cuyo mecanismo de acción difiere de la polimixina B4. En una nueva etapa se han estudiado 9 análogos de dicho péptido de entre XX y XX residuos; las LD50 de 7 de ellos son inferiores a 3 µM. El desplazamiento de dansil-polimixina por los análogos activos demuestra su unión al LPS, con la consiguiente permeabilización de la membrana externa, demostrada por la sensibilización de la célula a la lisis por detergente. Se seleccionó el análogo 3 (KWKLLKKIGAVLKVL-NH2) como el de mayor actividad para los estudios de permeabilización de membrana interna. Este análogo facilita la entrada de la sonda catiónica SYTOX y su unión al DNA intracelular, medida por el incremento de su fluorescencia, despolariza la membrana plasmática conforme al incremento de fluorescencia de la sonda DiSC(3)-5 y disminuye la velocidad de consumo de oxígeno. La correlación entre estas actividades es estadísticamente significativa, por lo que el mecanismo letal se basaría esencialmente en la permeabilización de la membrana interna, con pérdida de la homeostasis intracelular.
La disminución de la longitud del péptido disminuye considerablemente los costos de obtención sintética del mismo así como su inmunogenicidad, lo que facilita su posible utilización como nuevo agente quimioterapéutico.
Bibliografía:
1. Andreu D, Rivas L. (1998) Biopolymers 47:415-433.
2. Urban C et al. (2001) Antimicrob Ag Chemother 44:415-433.
3. Alarcon et al. (2001) Rev Esp Quimioterap 14:184-190.
4. Saugar et al. (2001) Antimicrob Ag Chemother (En prensa).
Subvencionado por proyectos FIS 99/0025, CAM 08/0029/1998 y Programa de Grupos Estratégicos CAM.
396
ACTIVIDAD BACTERICIDA DE 3 PÉPTIDOS CORTOS HÍBRIDOS CECROPINA-MELITINA EN ACINETOBACTER BAUMANNII
T. Alarcón*, J. M. Saugar**, L. Rivas**, D. Andreu*** y M. López-Brea*
*H.U. La Princesa, Madrid. **C. Inv. Biológicas (CSIC), Madrid. ***Univ. Pompeu Fabra, Barcelona.
Objetivo: Determinar la actividad de 3 híbridos cecropina-melitina de cadena corta en A. baumanni. comparando su actividad con la de CA(1-8)M(1-18).
Métodos:Se estudiaron dos cepas de A. baumannii, una cepa control sensible (ATCC 19606) y un aislamiento clínico multirresistente (incluyendo carbapenémicos). Se determinó la actividad in vitro de 3 péptidos híbridos cecropina A-melitina de cadena corta: CRIS2 (KWKLFKKILKVL), CRIS3 (KWKLLKKIGAVLKVL) y CRIS7 (WKLLKKILKIL) y el péptido CA(1-8)M(1-18) (CAM). Se determinó la CMI mediante microdilución en caldo y la actividad bactericida mediante curvas de muerte. Se utilizó Mueller Hinton caldo, inóculo de 105-106ufc/ml y 5 concentraciones dobles seriadas desde 16 µM para CAM y desde 8 µM para los otros péptidos. Se realizó recuento de colonias al tiempo 0 y después de 1, 2, 6 y 24 h de incubación a 37 ºC.
Resultados: La CMI fue de 1 mg/l con CAM, 2 mg/l con CRIS2 y 1 mg/L con CRIS3 y CRIS7 tanto para la cepa sensible como para la cepa multirresistente. En el estudio de curvas de muerte se observó una disminución del número inicial de colonias por debajo del nivel de detección (100 ufc/ml), en 2 horas con 4, 8 y 16 µM de CAM, en las dos cepas probadas, aunque con 4 y 8 µM se observó un aumento del número de colonias a las 24 h. Los 3 péptidos más cortos fueron más activos que CAM y la muerte bacteriana se produjo en 1 o 2 h de incubación a concentraciones de 2, 4, 8 µM con CRIS2, CRIS3 y CRIS7 en la cepa resistente y también con 1 µM en la cepa sensible. Además, no se observa recuperación bacteriana con concentraciones >= 1µM de CRIS3 y CRIS7 o >= 2 µM de CRIS2, tanto en la cepa sensible como en la multirresistente.
Conclusión:Los péptidos híbridos cecropina-melitina presentan buena actividad in vitro frente a A. baumannii y los de cadena corta mejoran en la actividad bactericida, sugiriendo que pueden ser alternativas en el tratamiento de las infecciones producidas por estos patógenos.
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DETECCIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE INTEGRONES DE CLASE I EN ACINETOBACTER BAUMANNII
M.J. Canduela*, F. López-Otsoa*, I. Pujana*, G. Martín**, K. Towner*** y L. Gallego*
*Departamento de Inmunología, Microbiología y Parasitología. Facultad de Medicina y Odontología. UPV, Bilbao. **Servicio Microbiología Hospital de Santa Marina, Bilbao. ***QMC-PHLS Nottingham, UK.
El objetivo de este trabajo fue detectar la presencia de integrones de clase I en aislamientos de Acinetobacter baumannii, identificar los genes que contienen y su relación con la resistencia a aminoglicósidos y a ß-lactámicos.
Se analizaron un total de 126 aislamientos procedentes de muestras clínicas del Hospital de Santa Marina (Bilbao). La sensibilidad de los antimicrobianos se determinó mediante CMI según los criterios de la NCCLS. Los antibióticos testados fueron amikacina, gentamicina, ticarcilina, ceftazidima, cefotaxima y cefepime. La detección de integrones de Clase I se realizó mediante amplificación con los iniciadores 5'CS y 3'CS y posterior digestión con el enzima Hinf I. Por ultimo se llevó a cabo la secuenciación de los integrones detectados. El porcentaje de resistencia a los antibióticos analizados fue de un 85% a Gentamicina, 49% a Amikacina, 90% a Cefotaxima, 86% a Ceftazidima, 82% a Cefepime y de un 83% a Ticarcilina. Los integrones encontrados fueron de 4 tipos a, b, c y d. El integrón a con 760 pb y en cuya digestión obtuvimos 3 fragmentos de 350, 220 y 190 pb; el integrón b con 550 pb; el integrón c con 800 pb y en cuya digestión obtuvimos dos fragmentos de 550 y 170 pb y el integrón d con 600 pb y en cuya digestión obtuvimos tres fragmentos de 300, 170 y 100 pb.
La secuenciación del integrón a mostró la presencia de un gen aadB que comenzaba en el nucleótido 87 y un gen OXA-7 en el 472. La secuenciación del integrón c mostró un gen aac(6') que comenzaba en el nucleotido 120. No se han podido secuenciar los integrones b y d.
En conclusión, el elevado nivel de resistencia mostrado en las cepas de A. baumannii analizadas puede deberse a la presencia de integrones de clase I en los que se confirmó la presencia de genes de resistencia a ß-lactámicos y aminoglicósidos.
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IDENTIFICACIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE UNA NUEVA ß-LACTAMASA TIPO OXA, CODIFICADA EN UN INTEGRÓN, EN ACINETOBACTER BAUMANNII
J. Ruiz, M.M. Navia, J. Sánchez, M.T. Jiménez de Anta y J. Vila
S. Microbiología, Hospital Clinic-IDIBAPS, Barcelona.
Objetivo: Estudiar los mecanismos de resistencia a ß-lactámicos presentes en una cepa clínica de Acinetobacter baumannii.
Metodología:Los niveles de susceptibilidad a antimicrobianos se establecieron mediante E-test. La presencia de ß-lactamasas se determinó mediante isoelectroenfoque. La presencia de integrones tipo 1 se estableció mediante PCR con cebadores específicos. Los integrones obtenidos se clonaron en un vector tipo pCRII, y se secuenciaron. Mediante PCR con cebadores adaptados, se subclonó la ß-lactamasa en un vector (pAlter) seleccionable por tetraciclina, determinandose su espectro de actividad.
Resultados: En una cepa resistente a ampicilina, ceftazidima, piperacilina, cefotaxima, cefoxitina, ticarcilina, piperacilina + tazobactam y aztreonam (CMI > 256 µg/ml)) y a cefepime (CMI > 32 µg/ml) e intermedia a amoxicilina + clavulánico (CMI: 16 µg/ml), se determinó, mediante pI, la presencia de 2 ß-lactamasas (pI: 7,4 y > 8), la segunda de las cuales, probablemente, la cefalosporinasa cromosómica. El estudio de integrones reveló la presencia de 2 (550 pb y > 2Kb). En el segundo de ellos se detectó la presencia de una aacA4, un ORF y una oxa (OXA-37), con una homología en aminoácidos del 99,6% con la OXA-20 (previamente descrita en este microorganismo). Al igual que en esta la principal característica de la OXA-37 es el codón de inicio (TTG en vez de ATG). Al ser subclonada se detectaron las siguientes CMIs: ampicilina 6 µg/ml, cefotaxima 0,125 µg/ml cefoxitina 16 µg/ml, ticarcilina 12 µg/ml, piperacilina + tazobactam 4 µg/ml, aztreonam 6 µg/ml, cefepime < 0,002 µg/ml y amoxicilina + clavulánico 6 µg/ml.
Conclusiones:Se ha identificado una nueva ß-lactamasa tipo OXA en A. baumannii. No obstante, su contribución en el desarrollo de resistencia frente a ß-lactámicos es modesta.
399
CARACTERIZACIÓN PARCIAL DE UN TRANSPOSÓN QUE CONTIENE EL GEN tetA EN UN AISLAMIENTO CLÍNICO DE ACINETOBACTER BAUMANNII
A. Ribera*, I. Roca**, J. Ruiz*, I. Gibert** y J. Vila*
*S. Microbiología, ICII, H. Clínic IDIBAPS, Barcelona. **D.Genética y Microbiología. UAB, Barcelona.
Objetivo: El objetivo de este estudio es el de analizar los mecanismos moleculares responsables de la resistencia a tetraciclina en un aislamiento clínico de Acinetobacter baumannii.
Metodología:Para ello, se obtuvo una librería genómica de esta cepa mediante extracción de DNA genómico, digestión parcial con enzima de elevada frecuencia de corte (Sau3AI), clonación de fragmentos entre 4-9kb en un vector de expresión (pBSK) y posterior transformación de una cepa de Escherichia coli (DH5*) sensible a la mayoría de antibióticos. Posteriormente se seleccionó mediante 18 µg/ml de tetraciclina y se analizaron los clones obtenidos resistentes a dicho antibiótico.
Resultados: Se obtuvo un clon resistente a tetraciclina. Se procedió a caracterizar el inserto (5859pb) y se encontró que correspondía al gen tetA asociado a un sistema de expulsión activa de tetraciclina. Junto al gen tetA (1199pb), se clonó tetR (650pb), gen represor del anterior, 2019pb de una transposasa (tnpA), de un total de 2972pb, y entre el gen tetR y la transposasa, se encontraron unos 1348pb correspondientes a una IS (IR más otra transposasa) similar a un IS encontrado en Salmonella typhi. Además, se comprobó la actividad del gen responsable de la resistencia a tetraciclina en la cepa de E. coli mediante el cálculo de la CMI de dicho antibiótico. Mientras que la CMI de tetraciclina de la cepa salvaje era de 0,75 µg/ml, la de la cepa clonada era de 256 µg/ml.
Conclusión:En este trabajo se demuestra la presencia del gen tetA (gen que codifica para una bomba de expulsión activa y es responsable de resistencia a tetraciclina) en A. baumannii y se sugiere la transferencia de resistencia a tetraciclina entre diferentes especies, ya que dicho gen se encuentra localizado en un transposón y mantiene una homología casi del 100% con el descrito en otras bacterias gram-negativas.
400
ESTUDIO DEL PERFIL DE RESISTENCIA A ANTIBIÓTICOS BETALACTÁMICOS EN ACINETOBACTER BAUMANNII
L. Pérez, T. Alarcón, S. López-Hernández, S. Jiménez, E. Escudero, B. Buendía y M. López-Brea
Hospital Universitario de la Princesa. Madrid.
Objetivo: Comparar el perfil de resistencia de 156 cepas de A. baumannii, aisladas de muestras clínicas significativas en el periodo de 1995-1997, con 97 cepas obtenidas en el periodo 1999-2000.
Materiales y métodos: Se determinaron las concentraciones mínimas inhibitorias de las 253 cepas de A. baumannii por el método de dilución en agar, siguiendo las normas del NCCLS del año 2000, a los siguientes antibióticos: ticarcilina (TIC), piperacilina (PIP), cefotaxima (CTX), ceftazidima (CAZ), imipenem (IMP). Se definieron 5 grupos según la sensibilidad a los betalactámicos (BL) probados: el fenotipo I incluía los aislamientos sensibles a los 5 BL, el fenotipo II, las cepas resistentes a TIC, PIP y sensibles a CTX, CAZ e IMP, el fenotipo III, los aislamientos sensibles a TIC e IMP, resistentes a CTX y con actividad variable frente a PIP y CAZ. El fenotipo IV agrupaba los aislamientos solamente sensibles a IMP y con actividad variable a CAZ, y el fenotipo V las cepas resistentes a todos los BL (variable = intermedio o resistente).
Resultados: Al comparar las cepas aisladas en el periodo 1995-1997 con las de los años 1999-2000, se observó que el porcentaje de cepas del fenotipo I disminuyó del 7% al 1%. Con respecto al fenotipo II, los resultados fueron similares, 0,6% en el periodo 1995-1997 y 0% en las aisladas en 1999-2000. Con respecto al fenotipo III se produjo una disminución brusca del 55,1% al 1%. En el caso del fenotipo IV, los porcentajes aumentaron del 26,2% al 78,3% y el número de cepas agrupadas en el fenotipo V, aumentó del 10,8% al 19,5%.
Conclusiones:Durante el primer periodo de estudio, el fenotipo predominante fue el III (55,1%), seguido del IV (26,2%), mientras que durante el segundo periodo, los fenotipos más frecuentes fueron el IV (78,3%) y el V (19,5). En el segundo periodo de estudio, la mayoría de los aislamientos fueron resistentes a todos los BL excepto IMP.
401
RESISTENCIA A IMIPENEM EN AISLAMIENTOS CLÍNICOS DE ACINETOBACTER BAUMANNII
F. Lopez-Otsoa*, N. Elguezabal, M.J. Canduela*, I. Pujana*, G. Martín**, K. Towner*** y L. Gallego*
*Universidad del País Vasco, Bilbao. **H. de Santa Marina, Bilbao. ***QMC-PHLS Nottingham, U.K.
Se analizaron 126 aislamientos de Acinetobacter baumannii, recogidos durante 18 meses en el Hospital de Santa Marina (Bilbao). El objetivo del estudio fue el análisis de la susceptibilidad antibiótica frente a Imipenem y la identificación de los clones y mecanismos implicados en la resistencia. La sensibilidad frente a Imipenem (CMI) fue determinada siguiendo las normas de la NCCLS. Efectuamos la caracterización genética mediante AP-PCR y ERIC-PCR. La extracción de proteínas de membrana (OMPs) se realizó con el método de carbonato y análisis en SDS-PAGE 10% con tinción de Coomasie. La detección fenotípica de carbapenemasas se llevo a cabo mediante el test de Hodge y la de metalobetalactamasas (MßLs), mediante el ensayo de sinergia entre discos (EDTA-Imipenem).
El 61% de los aislamientos fueron resistentes frente a Imipenem (62% de la población analizada). Se detectaron 29 agrupaciones clonales totales, siendo dos las mayoritariamente resistentes. No se apreciaron diferencias significativas en las OMPs, entre aislamientos susceptibles y resistentes. El ensayo de Hodge, reveló de forma inequívoca la existencia de carbapenemasas en cuatro de los aislamientos seleccionados. Solo uno fue claramente positivo en el test de detección de MßLs.
Como conclusión, destacar que el aumento de cepas de Acinetobacter baumannii resistentes a Imipenem del Hospital de Santa Marina (Bilbao), parece deberse a la diseminación de un clon y que la mayoría de cepas resistentes pertenecían exclusivamente a una de las agrupaciones clonales mayoritarias. En los aislamientos analizados se detectó la presencia de carbapenemasas, que podrían explicar la resistencia a Imipenem.
402
TRATAMIENTO DE LA NEUMONÍA ASOCIADA A VENTILACIÓN MECÁNICA POR ACINETOBACTER BAUMANNII MULTIRRESISTENTE
J. Garnacho, J.L. García, C. Ortiz, F.J. Jiménez, S. Gallego y A. Barrero
Servicio de Cuidados Críticos y Urgencias. H.U. Virgen del Rocío. Sevilla.
Objetivo: Comparar las distintas pautas de tratamiento de la neumonía asociada a ventilación mecánica (NAVM) por Acinetobacter baumannii (Ab) para conocer la eficacia y toxicidad de la colistina intravenosa.
Material y métodos: Estudio prospectivo de 37 episodios de NAMV (criterios del CDC) por Ab. El diagnóstico microbiológico se llevó a cabo por aspirado traqueal cuantitativo (> 106 UFC/mL) o por cepillo telescopado (> 103 UFC/mL). En los casos de Ab solo sensible a colistina se empleo ésta por vía intravenosa (metansulfonato de colistina 3-5 mg/kg/día). Si existía otra opción se empleó tratamiento según antibiograma. Se evaluó: gravedad al ingreso por APACHE II, disfunción de órganos por escala SOFA, manifestación clínica, tiempo de tratamiento, curación clínica, curación microbiológica y efectos adversos: toxicidad renal (definida como incremento de creatinina > 2 mg/dL o reducción de diuresis al 50%), hepática, hematológica y neurológicas por estudio nerurofisiológico (ENF). Se empleó la Chi-cuadrado y la t-Student siendo significativo p < 0,05.
Resultados: Se empleó colistina (Grupo C) en 21 casos, imipenen-cilastatina (Grupo IM) en 14 y otros en 2. El APACHE II (19,6 ± 7,2 vs. 20,5 ± 7) y el SOFA al diagnóstico de NAVM (10 ± 4,9 vs. 11,7 ± 6,6) fueron similares en ambos grupos así como la incidencia de sepsis grave o shock séptico (86% vs. 79% p = NS). La antibioterapia empírica fue apropiada más veces en el grupo IM (71% vs. 19%; p = 0,002). La curación clínica se obtuvo en un 57% en ambos grupos con erradicación microbiológica en un 32% en el grupo C y 22% en el IM (p = NS). El tiempo medio de tratamiento fue de 11 días en ambos casos. La mortalidad hospitalaria fue 62% en grupo C y 64% en IM (p = NS). La mortalidad atribuible fue del 40% y 39% respectivamente. Desarrollaron toxicidad renal 3 en Grupo C y 5 en IM (p = NS). Se realizó ENF en 12 pacientes del grupo C sin objetivarse bloqueos de conducción.
Conclusiones:El empleo de colistina intravenosa es un tratamiento al menos tan seguro y eficaz como el imipenen para la NAVM por Ab.
403
TRATAMIENTO SIMPLE Y COMBINADO FRENTE A LA INFECCIÓN POR ACINETOBACTER BAUMANNII (Ab) CON MODERADA Y ALTA RESISTENCIA (R) A IMIPENEM (IMP) EN UN MODELO DE NEUMONÍA EXPERIMENTAL EN RATÓN
A. Montero, X. Corbella, A. Doménech, J. Ayats, F. Tubau, C. Borraz, C. Cabellos, F. Gudiol y J. Ariza
Hospital de Bellvitge, Barcelona.
En los últimos años, Ab ha adquirido un grado de multi-R antibiótica que incluye al IMP. A pesar de que se ha utilizado ampliamente colistina (COL) como tratamiento (tto), no hay estudios in vivo que comparen su actividad antibacteriana frente otros antibióticos (ATB).
Objetivo: Comparar la eficacia de COL frente otros ATB en solitario y en combinación en el tto de la neumonía por Ab en el ratón.
Métodos:Se utilizaron 2 cepas de Ab con distinto grado de R a IMP. Las CMIs fueron (clon D/clon E): IMP 8/512, sulbactam (SUL) 4/128, tobramicina (TOB) 8/8, rifampicina (RIF) 8/8 y COL 0,5/0,5. Mediante canulación intratraqueal se indujo neumonía a ratones inmunompetentes C57BL/6. Las dosis de ATB administradas fueron: IMP 200 mg/kg/d, SUL 120 mg/kg/d, TOB 60 mg/kg/d, RIF 25 mg/kg/d y COL 500.000 U/kg/d. Los resultados de la eficacia antibiótica a las 44 horas de tto se expresaron como: media recuentos pulmonares grupo control-media grupo tratamiento (en log10 UFC/g).
Resultados: En los ratones control, los recuentos pulmonares a las 48 horas de la inoculación fueron: clon D 10,83 ± 0,32; clon E 10,77 ± 0,35 UFC/g de tejido pulmonar. Los resultados de la actividad antibiótica fueron (clones D/E): IMP -4,48/0,24; SUL -3,67/-0,04; TOB -3,45/-4,16; RIF -3,62/-5,15; COL -0,4/-2,39; IMP + SUL -3,34/; IMP + TOB -5,37/-5,59; IMP + RIF -3,82/-6,98; SUL + TOB -4,62/-4,95; TOB + RIF -3,97/-6,81.
Conclusiones:Aunque COL mostró in vitro CMI bajas que hacían pensar en una buena eficacia antibiótica, los tratamientos aislados con TOB o RIF fueron más efectivos en este modelo de neumonía en ratón para el tto de Ab con R moderada o alta a IMP. IMP y SUL mantuvieron su eficacia en el tto de Ab con R moderada. Las combinaciones de IMP o SUL con TOB mejoraron la actividad de los antibióticos en solitario para el tto del clon D y E. Las combinaciones de IMP o TOB con RIF fueron las más eficaces en el tto de la neumonía en ratones por el clon E o con alta R a IMP.
403 bis
PROYECTO GEIH-Ab 2001: ESTUDIO EPIDEMIOLÓGICO MOLECULAR DE 244 CEPAS DE ACINETOBACTER SP. AISLADAS EN DIVERSOS HOSPITALES ESPAÑOLES
A. Ribera, F. Fernández-Cuenca, A. Beceiro, G. Bou, L. Martínez Martínez, A. Pascual, J.M. Cisneros, J. Rodríguez-Baño, J. Pachon, J. Vila y Grupo de Estudio de Infección Hospitalaria (GEIH).
Objetivo: Los objetivos de este estudio son: 1) identificar la especie de Acinetobacter de todos los aislamientos clínicos recopilados de diferentes hospitales del estado español y 2) estudiar la relación epidemiológica entre ellos.
Metodología:Primeramente se identificaron todos los aislamientos clínicos mediante métodos fenotípicos (pruebas bioquímicas), y genotípicos (ARDRA, Análisis del patrón de restricción resultante de la digestión con enzimas de restricción de elevada frecuencia de corte del producto de amplificación del DNA ribosomal 16S). Posteriormente se procedió a estudiar la relación epidemiológica de todas las cepas mediante dos técnicas epidemiológicas comúnmente utilizadas, REP-PCR y PFGE (Digestión del DNA cromosómico con enzimas de baja frecuencia de corte y electroforesis en campo pulsado).
Resultados: Según los resultados de las pruebas de identificación, de las 244 cepas, 225 correspondían a A. baumannii, 18 a Acinetobacter Genoespecie 3 y un aislado correspondía a A. junii. Con respecto al estudio epidemiológico se obtuvieron 96 pulsotipos diferentes entre los 28 hospitales, mientras que por REP-PCR se obtuvieron 95 patrones diferentes. El índice de discriminación, calculado según el método de Hunter y Gaston, para el PFGE y REP-PCR era de 0,972 y 0,963 respectivamente.
Conclusiones:La especie más prevalentemente aislada en estos 28 hospitales es A. baumannii. Asimismo, se puede concluir que ambas técnicas epidemiológicas (REP-PCR y PFGE) poseen un poder discriminativo equivalente y que existe una gran heterogenicidad de clones de A. baumannii en toda España.
