Legionella spp. es una bacteria ambiental capaz de sobrevivir en un amplio intervalo de condiciones fisicoquímicas y puede colonizar los sistemas de distribución y almacenamiento del agua potable. Legionella pneumophila es el principal patógeno trasmitido por el agua y produce el 90% de los casos de legionelosis. El objetivo del presente trabajo fue detectar por cultivo la presencia de Legionella spp. en depósitos domiciliarios de agua potable de la ciudad de Resistencia, Chaco. La detección de Legionella en las muestras de agua se realizó por cultivo según lo establecido en la norma ISO 11731:1998. Se analizaron 32 muestras de agua y de 12 (37,5%) de ellas se recuperaron cepas de Legionella spp. La vigilancia de este microorganismo en el agua de consumo humano representa el primer paso para controlar su diseminación hacia huéspedes susceptibles.
Legionella spp. is an environmental bacterium that can survive in a wide range of physicochemical conditions and may colonize distribution systems of drinking water and storage tanks. Legionella pneumophila is the major waterborne pathogen that can cause 90% of Legionnaires’ disease cases. The aim of this study was to detect the presence of Legionella spp. in household drinking water tanks in the city of Resistencia, Chaco. The detection of Legionella in water samples was performed by culture methods as set out in ISO 11731:1998. Thirty two water samples were analyzed and Legionella spp. was recovered in 12 (37.5%) of them. The monitoring of this microorganism in drinking water is the first step towards addressing the control of its spread to susceptible hosts.
El género Legionella engloba a 54 especies y más de 70 serogrupos2,5. Si bien más de la mitad de las especies causan enfermedades en el hombre, es Legionella pneumophila la que origina la mayor proporción de las infecciones (más del 90%). Esta especie fue relacionada por primera vez con cuadros de neumonía en 1977. Dentro de esta especie, el serogrupo 1 es el agente etiológico del 80% de los casos de legionelosis. Las infecciones por Legionella pueden presentarse como casos esporádicos o bien como brotes, pero en ambas circunstancias resulta difícil determinar la fuente de infección11,14.
Legionella es un bacilo gramnegativo ampliamente distribuido en los ecosistemas acuáticos, donde puede sobrevivir en un amplio rango de condiciones fisicoquímicas2. A partir del ambiente puede pasar a colonizar los sistemas de abastecimiento de aguas de las ciudades y, a través de la red de distribución, incorporarse a los sistemas de almacenamiento del agua potable o bien a otros sistemas que requieren agua para su funcionamiento, como las torres de refrigeración5. Si en la instalación existe un mecanismo productor de aerosoles, la bacteria puede dispersarse en el aire y, de hecho, la inhalación de aerosoles es la vía más frecuente de infección16.
La legionelosis afecta particularmente a personas con el sistema inmunitario debilitado y se puede presentar en 2 formas clínicas diferenciadas: la infección pulmonar (o «enfermedad del legionario») y la forma no neumónica, conocida como «fiebre de Pontiac»2,16.
Las infecciones por este microorganismo son un importante problema de salud pública en Estados Unidos y Europa; se ha registrado un aumento de casos en los últimos años que han dado origen a importantes brotes, tanto en la comunidad como asociados a hospitales y hoteles3,6,12,13.
Se desconoce la incidencia de legionelosis en Latinoamérica y son pocos los trabajos existentes en nuestro país, situación posiblemente atribuible a la presentación en forma de casos esporádicos y no de brotes; se ha informado una incidencia de aproximadamente el 2% de todas las neumonías9,10.
El reconocimiento del nicho ecológico de Legionella es el primer paso para poder abordar el control de su diseminación y la prevención de la legionelosis; para ello se requiere implementar una normativa internacional en relación con este tema5,16.
Los métodos de detección de Legionella en aguas incluyen el cultivo y la identificación, el enzimoinmunoanálisis y la amplificación de un fragmento específico del genoma bacteriano mediante las técnicas moleculares de reacción en cadena de la polimerasa convencional (PCR) y en tiempo real (qPCR). El cultivo permite la detección y la identificación de cualquier especie y realizar estudios posteriores, y es el método de referencia para el cual existen varios ensayos normalizados, como la norma ISO 11731. No obstante, posee una serie de limitaciones dadas por la naturaleza fastidiosa de este microorganismo, que lleva a que se requieran períodos prolongados de incubación; la presencia de flora acompañante, que dificulta su aislamiento; y la secuencia de preparación de la muestra ambiental, que puede disminuir su concentración inicial. Otra limitación es la imposibilidad de detectar células viables no cultivables, las que mantienen su capacidad infectiva. Por otro lado, los métodos más rápidos y sensibles, como lo son las técnicas moleculares, permiten la detección de Legionella a muy bajas concentraciones y de material genético proveniente de células muertas, viables no cultivables, o de legionelas presentes en amebas. Un resultado positivo por esta técnica tan sensible no siempre podría implicar algún riesgo para la salud. Además, la presencia de inhibidores en la muestra ambiental, que pueden llevar a un resultado falso negativo, constituye otra limitación de orden práctico2,5,7.
En la Argentina, el agua destinada al consumo humano debe cumplir con los requisitos de aptitud microbiológica establecidos por el Código Alimentario Argentino; sin embargo, Escherichia coli o los coliformes no son indicadores adecuados de la presencia o ausencia de Legionella1,16.
El objetivo del presente trabajo fue detectar mediante cultivo la presencia de Legionella spp. en depósitos domiciliarios de agua potable de la ciudad de Resistencia, Chaco.
El muestreo se realizó entre los meses de abril y diciembre de 2015. Se analizó el agua procedente de los depósitos domiciliarios de agua potable de la ciudad de Resistencia. La detección de Legionella en las muestras de agua se realizó por cultivo, según lo establecido en la norma ISO 11731:1998. En cada vivienda se seleccionó el grifo conectado directamente al tanque de almacenamiento que no hubiera sido utilizado durante las 12-24h previas al muestreo. En cada punto se tomó el primer litro de agua en un recipiente estéril (muestra proximal), el cual se transportó a temperatura ambiente al laboratorio, donde se inició su procesamiento de manera inmediata.
Las muestras se concentraron por filtración, usando membranas de 0,45μm. Posteriormente, las membranas se transfirieron a 10ml de buffer Ringer 1/40 y se agitaron durante 2 min con vórtex. Alícuotas de 0,5ml se sembraron en placas con medio selectivo GVPC (Oxoid), el que fue preparado adicionando cisteína, glicina, vancomicina, polimixina B y cicloheximida (suplementos SR0110A y SR0152E Oxoid) al agar Buffered Charcoal Yeast Extract, BCYE (Oxoid). Paralelamente, otra alícuota de 0,5ml se sometió a tratamiento térmico (50°C durante 30 min) y se sembró en el mismo medio.
Se utilizó como control positivo una muestra de agua inoculada con la cepa L. pneumophila subsp. pneumophila (ATCC® 33152™). La concentración del inóculo fue de 3×108 UFC/ml. Las placas se incubaron durante 7 días. En aquellos casos en los que se evidenció crecimiento bacteriano, se seleccionaron colonias características, que fueron subcultivadas en agar BCYE con cisteína o sin esta (suplementos SR0110A y SR0175A Oxoid)2,8,14.
Se definió como muestra positiva aquella de la cual se recuperaron cepas que crecieron en el subcultivo en agar BCYE con cisteína y no crecieron en el mismo medio sin el agregado de cisteína; estas se identificaron como Legionella spp. siguiendo la normativa internacional.
Se analizaron 32 muestras obtenidas de depósitos domiciliarios de agua potable de Resistencia. El número de muestras analizadas representó el 0,03% de los hogares conectados a la red pública del departamento San Fernando, del cual Resistencia es su capital. En 12 (37,5%) de las muestras se aislaron colonias de Legionella spp. El rango de concentraciones encontradas fue de 40 UFC/l a 1,4×103 UFC/l.
La presencia de L. pneumophila y otras especies de Legionella fue reportada en sistemas de distribución y almacenamiento de agua potable en diferentes países. Los resultados preliminares de aislamiento de Legionella spp. con la técnica de referencia obtenidos en este trabajo difieren de los datos comunicados por investigadores de otras partes del mundo. Así, Serrano-Suárez et al. informaron un 27% de muestras positivas para L. pneumophila en el sistema de agua caliente de hoteles de Cataluña, España14. En la evaluación de 2 sistemas de distribución de agua potable de Estados Unidos, Wang et al. reportaron un 2% de muestras positivas para Legionella spp.15. Por su parte, Borella et al. encontraron un 22,6% de muestras positivas en un estudio muticéntrico realizado en sistemas de distribución de agua caliente domiciliarios en Italia4. En ese mismo país, Bonetta et al. informaron un 42% de muestras positivas para L. pneumophila3 en hoteles. No se hallaron estudios similares realizados en la Argentina.
La presencia de Legionella spp. en los depósitos domiciliarios origina la necesidad de contar con técnicas que permitan identificar la especie. Además de L. pneumophila, las especies Legionella anisa, Legionella dumoffii, Legionella micdalei, Legionella bozemani y Legionella longbeachae fueron implicadas como agentes etiológicos de enfermedad humana y recuperadas de sistemas de agua12. En los aislamientos del presente trabajo se realizó la extracción de ADN para la posterior confirmación de especie por técnicas moleculares (fuera del alcance del presente informe).
El cultivo de Legionella spp. es el método de referencia que permite su detección, a partir del cultivo es posible la identificación de cualquier especie y la realización de estudios posteriores. A su vez, la aplicación de esta técnica en la muestra proximal resultó ser la adecuada para la búsqueda de este microorganismo, dato coincidente con lo consignado en trabajos previos de otros autores14,15. De la revisión bibliográfica realizada surge que la combinación del cultivo con técnicas moleculares optimiza la detección de este patógeno en las muestras de agua3,7,12.
La desinfección del agua por cloración representa la última etapa del tratamiento convencional del agua potable utilizado en la provincia del Chaco. El Código Alimentario Argentino estipula una concentración mínima de cloro activo residual de 0,2mg/l. No obstante, la misma normativa establece que en las aguas ubicadas en los reservorios domiciliarios —objeto de estudio del presente trabajo— no es obligatoria la presencia de cloro activo. Esta situación podría ser uno de los factores que esté favoreciendo la presencia de Legionella en los depósitos domiciliarios1.
Los resultados encontrados en este trabajo, que confirman la capacidad de Legionella spp. de desarrollar en el agua tratada, sumados al brote de enfermedad respiratoria aguda relacionada con este patógeno que se produjo en un hospital en enero del 2013 señalan la necesidad de encarar nuevas líneas de investigación en muestras ambientales. Estas deberían evaluar los sistemas de circulación de agua fría y caliente, los sistemas de refrigeración de edificios y establecimientos de salud y la presencia de biofilms en las cañerías como potenciales reservorios de Legionella spp. La vigilancia de este microorganismo en el agua de consumo humano representa el primer paso en cualquier esquema de control de su diseminación hacia huéspedes susceptibles.
Este trabajo constituye el primer aporte en el estudio de la presencia de Legionella spp. en muestras ambientales, en este caso, en depósitos domiciliarios de agua potable de una ciudad de la región noreste de Argentina (NEA).
Responsabilidades éticasProtección de personas y animalesLos autores declaran que para esta investigación no se han realizado experimentos en seres humanos ni en animales.
Confidencialidad de datosLos autores declaran que en este artículo no aparecen datos de pacientes.
Derecho a la privacidad y consentimiento informadoLos autores declaran que en este artículo no aparecen datos de pacientes.
FinanciaciónInvestigación financiada por el Programa de Becas Carrillo-Oñativia, Comisión Nacional Salud Investiga, Ministerio de Salud de la Nación y por la Secretaría General de Ciencia y Técnica de la Universidad Nacional del Nordeste. PI17/12L003
Conflicto de interesesLos autores declaran no tener ningún conflicto de intereses.
A las Dras. Rosa Araujo y Silvia Cervero-Aragó, del Departamento de Microbiología, Facultad de Biología, Universitat de Barcelona.
