La tuberculosis continúa siendo un problema en todo el mundo. Desde el punto de vista clínico es muy importante diferenciar el complejo Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis) de otras micobacterias con el fin de aplicar cuanto antes un tratamiento adecuado. Actualmente, la hibridación con sondas de ácidos nucleicos es el método empleado en la identificación de M. tuberculosis. En los últimos años han aparecido en el mercado métodos rápidos de inmunoanálisis cromatográfico que detectan el antígeno MPT64, segregado específicamente por el complejo M. tuberculosis durante el crecimiento en cultivo. Estos métodos se han evaluado sobre todo a partir de cultivos líquidos, con una sensibilidad del 95-100% y una especificidad del 100%, son sencillos, rápidos y asequibles a cualquier laboratorio1–8. Su rendimiento a partir de cultivos en medio sólido no ha sido bien establecido4. Nosotros determinamos recientemente la utilidad del método BD MGIT TBc ID® (Becton Dickinson, EE. UU.), propuesto para la detección de M. tuberculosis en medio líquido de Middlebrook 7H9, obteniendo buenos resultados (sensibilidad del 98% y especificidad del 100%)9. Nuestro nuevo objetivo ha sido comprobar su rentabilidad a partir de cultivos en medio sólido, en comparación con el método SD BIOLINE TB Ag MPT64 Rapid® (Standard Diagnostic, Korea), que dispone de un tampón de extracción de antígeno para este cometido.
Se analizaron 25 cepas de M. tuberculosis identificadas por hibridación con sondas de ADN Accuprobe® (Gen-Probe, bioMérieux, Francia) y cultivadas en medio de Löwenstein-Jensen. Para la preparación del inóculo de reacción se suspendieron 3-4 colonias en 200μl de solución salina, en el caso del método BD MGIT TBc ID, y en 200μl de tampón de extracción para el método SD BIOLINE TB Ag MPT64 Rapid. Un volumen de 100μl de este inóculo fue depositado en el pocillo de muestra del dispositivo de análisis correspondiente y, transcurridos 15 minutos, se registró el resultado. La presencia de dos bandas de color rosa-rojo en la ventana de resultados, una en la posición «C» (control) y otra en la posición «T» (análisis) donde se localiza el anticuerpo monoclonal antí-MPT64, fue indicativa de la detección de M. tuberculosis.
Las 25 cepas ensayadas dieron positiva la prueba inmunocromatográfica con ambos métodos. En el método BD MGIT TBc ID la coloración de las bandas de reacción fue perceptible aproximadamente a los 10 minutos y la intensidad máxima del color apareció a los 15 minutos, mientras que en el método SD BIOLINE TB Ag MPT64 Rapid el color de las bandas fue evidente y de intensidad máxima a los 5 minutos. Por otra parte, la coloración de la banda de análisis fue menos intensa en todas las cepas con el primer método, y en nueve de ellas (36%) fue francamente débil. Estas mismas cepas ensayadas de nuevo con método BD MGIT TBc ID pero utilizando tampón de extracción de antígeno, en vez de solución salina, mostraron mayor intensidad del color, lo que demuestra la importancia del tampón para poner de manifiesto el antígeno.
Los métodos de inmunoanálisis cromatográfico son una alternativa excelente a los métodos de biología molecular para la identificación de M. tuberculosis. Los resultados falsos negativos sólo se detectan en cepas de M. bovis que no producen antígeno y en cepas de M. tuberculosis con mutaciones del gen mpt642. El método BD MGIT TBc ID evaluado por nosotros puede utilizarse a partir de cultivos en medio sólido, empleando solución salina para la preparación del inóculo de reacción. No obstante, la intensidad de color de la banda de análisis es más débil que la obtenida a partir de cultivos líquidos. Esta circunstancia, aunque no invalida el resultado, puede dificultar la interpretación de la prueba. El método SD BIOLINE TB Ag MPT64 Rapid, que dispone de un tampón de reacción para cepas procedentes de medios sólidos, no presenta este problema y ofrece un menor tiempo de respuesta diagnóstica. Por lo que concluimos que los dos métodos son apropiados para la identificación de M. tuberculosis a partir de cultivos sólidos si el inóculo se prepara con solución tampón.
