0 - QUIMIOTAXIS DE NEUTRÓFILOS MARCADOS CON 99MTC-HMPAO ESTABILIZADO CON COCL2
1Unidad de Radiofarmacia. Servicio de Medicina Nuclear; 2Servicio de Inmunología. Laboratorio Clínico; 3Servicio de Medicina Nuclear. Hospital Universitario de Bellvitge-IDIBELL. Hospitalet de Llobregat.
Objetivo: Determinar si el marcaje de leucocitos con 99mTc-HMPAO estabilizado con CoCl2 altera la capacidad quimiotáctica de los neutrófilos.
Material y métodos: Se procesaron 3 alícuotas de suspensiones leucocitarias procedentes de 45 ml de sangre de 12 donantes sanos: 1) sin marcar, 2) marcaje con 99mTc-HMPAO y 3) marcaje con 99mTc-HMPAO estabilizado con CoCl2. Se realiza para cada alicuota un ensayo de quimiotaxis con el kit Migratest®: En un pocillo de una placa multipocillo se añadió tampón (-), y en otro el péptido quimioatrayente fMLP (+). En cada pocillo se añadió un inserto de 3.0 μm y sobre él los leucocitos. Se incubó la placa 45 min a 37 oC. Se retiraron los insertos y se pasó la suspensión celular de cada pocillo y parte de la suspensión del inserto (-) a tubos. Se añadieron microesferas de recuento, el anticuerpo anti-L-selectina, se incubó a 4 oC y se hizó tinción de DNA vital. Se analizaron por citometría de flujo el % de neutrófilos activados, el índice quimiotáctico (neutrófilos migrados en + respecto -) y el FSC (tamaño de la célula).
Resultado:
|
Leucocitos sin marcar |
99mTc-HMPAO-Leucocitos |
99mTc-HMPAO(estab)-Leucocitos |
||||||
|
- |
+ |
L-Sel |
- |
+ |
L-Sel |
- |
+ |
L-Sel |
Neutrófilos activados (%) |
60,2 ± 17,6 |
86,3 ± 5,5 |
35,9 ± 17,7 |
66,2 ± 8,4 |
86,7 ± 4,6 |
35,3 ± 15,6 |
65,6 ± 8,3 |
86,7 ± 4,4 |
36,3 ± 20,4 |
Índice quimiotáctico |
1,61 ± 0,79 |
1,54 ± 0,72 |
1,46 ± 0,73 |
||||||
FSC |
359 ± 20 |
372 ± 22 |
345 ± 33 |
366 ± 18 |
373 ± 22 |
337 ± 32 |
365 ± 19 |
377 ± 26 |
325 ± 50 |
Conclusiones: En las tres muestras hay más neutrófilos activados en el control positivo, coincidiendo con un mayor valor medio de tamaño celular (FSC). El índice quimiotáctico es muy similar en los tres casos, sin diferencias estadísticamente significativas. El uso de 99mTc-HMPAO estabilizado con CoCl2 en el marcaje de los leucocitos no influye en la quimiotaxis de los neutrófilos.