CO019 - NANOBODIES RADIOMARCADOS CON TECNECIO-99M COMO HERRAMIENTA PARA ESTUDIOS DE ESPECIFICIDAD Y BIODISTRIBUCIÓN IN VIVO
1Unidad de Imagen Molecular Traslacional (UNIMTRA), Servicio Medicina Nuclear, Clínica Universidad de Navarra, Pamplona, España. 2Instituto de Investigación Sanitaria Aragón, Zaragoza, España. 3Unidad de Radiofarmacia, Servicio Medicina Nuclear, Clínica Universidad de Navarra, Pamplona, España. 4Programa de tumores sólidos, Centro de Investigación Médica Aplicada (CIMA), Pamplona, España.
El objetivo del trabajo fue radiomarcar un nanobody diseñado para el tratamiento mediante inmunoterapia de tumores cerebrales B4GALNT1+ y el estudio in vitro e in vivo de su especificidad y biodistribución. El nanobody (14 KDa, 80 μg) se marcó utilizando 700 MBq de [99mTc][Tc(CO)3(H2O)3]+ mediante kits Isolink™. El mantenimiento de la especificidad de unión del 99mTc-nanoboy se estudió in vitro incubándolo 30’ a 37 oC utilizando líneas celulares B4GALNT1+ y B4GALNT1-, midiendo la radiactividad incorporada en contador gamma y validando los resultados mediante citometría de flujo. Los estudios de biodistribución in vivo se realizaron en un modelo murino de tumores xenoinjertados (n = 6) implantando tumores B4GALNT1+ y B4GALNT1- en ambos flancos. Tras la inyección intravenosa de 10,9 ± 0,7 MBq del 99mTc-nanobody, se realizaron imágenes microSPECT/CT a los 30m, 2h y 4h, cuantificando el porcentaje de dosis en los tumores (%ID). La actividad en tumores y otros tejidos se midió ex vivo en contador gamma (4h p.i.), calculando el porcentaje de dosis por gramo (%ID/g). Se logró el radiomarcaje del nanobody con rendimiento 80%/pureza radioquímica 95%. Los estudios in vitro demostraron una mayor incorporación del 99mTc-nanobody en las células B4GALNT1+ confirmadas por citometría (p < 0,005, ANOVA). Las imágenes in vivo mostraron una rápida y mayor incorporación en tumores+ respecto a tumores- desde 30m posadministración (1,7 ± 0,34% ID vs. 0,20 ± 0,07; ANOVA 2 vías, p < 0,0001) que permaneció invariable a lo largo del tiempo (ANOVA 2 vías, p = 0,208). El estudio de biodistribución demostró una excreción del nanobody vía renal desde 30m posadministración y mínima incorporación en otros órganos, confirmándose ex vivo a 4h (riñón: 78,8 ± 12,5%ID/g, cerebro: 0,07 ± 0,01%ID/g; músculo: 0,26 ± 0,03%ID/g). El radiomarcaje con [99mTc][Tc(CO)3(H2O)3] de nanobodies resulta una técnica eficaz para el estudio cuantitativo de su especificidad y cinética de biodistribución. Estas técnicas pueden utilizarse como herramienta para la selección de nanobodies optimizados frente a dianas específicas.
