CO021 - PREPARACIÓN, DOBLE RADIOMARCAJE DE NP DE HSA CON TECNECIO-99M Y GALIO-67 Y ESTUDIOS DE BIODISTRIBUCIÓN IN VIVO MEDIANTE MICROSPECT/CT PARA ACELERAR SU DESARROLLO FARMACÉUTICO COMO NANOVACUNAS
1Unidad de Radiofarmacia, Servicio de Medicina Nuclear, Clínica Universidad de Navarra (Pamplona), Pamplona, España. 2Servicio de Medicina Nuclear, Clínica Universidad de Navarra (Pamplona), Pamplona, España. 3Unidad de Imagen Molecular Traslacional (UNIMTRA), Clínica Universidad de Navarra (Pamplona), Pamplona, España. 4Unidad de Radiofarmacia, Servicio de Medicina Nuclear, Clínica Universidad de Navarra (Madrid), Madrid, España.
Introducción: En el marco del desarrollo de nuevas nanovacunas, se optimizaron la preparación y el radiomarcaje simultáneo de nanopartículas de albúmina con tecnecio-99m y galio-67 para estudios de biodistribución in vivo y seguimiento de los distintos componentes del sistema.
Material y métodos: Tras preparar bevacizumab (usado como proteína modelo) con el quelante NODAGA, purificar por exclusión molecular y resuspender en 0,25M AcONa conteniendo 5 g/L gentísico, se añadieron 4,5mg de bevacizumab-NODAGA sobre 37 MBq de [67Ga]GaCl3 (obtenido a partir de [67Ga]Ga-Citrato). Tras 30’ a 37 oC, se analizó PRQ por ITLC (citrato sódico 1M y AcNH4: metanol (50:50)). Las nanopartículas de albúmina conteniendo [67Ga]Ga-NODAGA-Bevacizumab se prepararon por desolvatación/coacervación añadiendo 1mL (4 mg) del anticuerpo marcado sobre 100 mg de HSA en 7,84 mL agua, 8 mL de etanol y 500 μL de PEG 35.000 (100 mg/mL) y se eliminó el etanol en rotavapor, obteniendo las nanopartículas en 6mL. El tamaño de partícula se determinó mediante DLS. Las NP marcadas con galio-67 se marcaron con tecnecio-99m añadiendo 74 MBq de [99mTc]NaTcO4 a 1 mL de NP-HSA-[67Ga]Ga-NODAGA-bevacizumab. Para los estudios de biodistribución, se administraron por vía subcutánea 150 μL de las NP doblemente radiomarcadas (5,55 MBq de galio-67 y 11,1 MBq de tecnecio-99m) en ratones y se adquirieron imágenes MicroSPECT/CT a 1,18 y 42h, reconstruyéndolas usando los fotopicos de tecnecio-99m y galio-67.
Resultados: La PRQ del doble radiomarcaje fue superior al 95%. El tamaño de partícula fue de 250 nm (PDI < 0,2). A 18 y 42h posadministración, se observó actividad en ganglios linfáticos axilares e inguinales, lo que sugiere estimulación del sistema inmunológico. En comparación con los controles de [99mTc]TcO4- y [67Ga]Cl3Ga, no se observó actividad en estómago, intestino, glándulas salivares y médula ósea.
Conclusiones: Los estudios de biodistribución de nanopartículas de HSA radiomarcadas con tecnecio-99m y galio-67 permite el seguimiento in vivo de los distintos componentes para acelerar el desarrollo farmacéutico de nanovacunas de administración subcutánea.
