CO037 - EVALUACIÓN DEL PAPEL DE LAS ANEXINAS EN LA TERAPIA CON CÉLULAS CAR-T DE TUMORES SÓLIDOS: RADIOMARCAJE CON TECNECIO-99M Y ESTUDIOS DE BIODISTRIBUCIÓN IN VIVO MEDIANTE MICROSPECT/CT
1Unidad de Radiofarmacia, Servicio de Medicina Nuclear, Clínica Universidad de Navarra, Pamplona, España. 2Programa de Inmunología e Inmunoterapia, CIMA Universidad de Navarra, Pamplona, España. 3Unidad de Radiofarmacia, Servicio de Medicina Nuclear, Clínica Universidad de Navarra, Madrid, España. 4Unidad de Imagen Molecular Traslacional (UNIMTRA), Clínica Universidad de Navarra, Pamplona, España.
Introducción: La expresión de fosfatidilserina (PS) en la membrana plasmática externa de las células tumorales puede constituir una diana para el desarrollo de terapias con células CAR-T. Basándonos en la capacidad de la proteína anexina-V para unirse a PS con alta afinidad, valoramos la posibilidad de generar una proteína adaptadora que contenga anexina para redirigir hacia PS la actividad de un CAR contra el dominio extra A de la fibronectina (EDA), que se expresa en la matriz extracelular de numerosos tumores. Así, hemos producido la proteína de fusión bifuncional EDA-Anexina-V y analizado su biodistribución en un modelo tumoral murino.
Objetivo: Radiomarcaje con tecnecio-99m de EDA-anexina y EDA-OVA (ovoalbúmina, proteína control con un peso molecular similar) para realizar estudios de biodistribución in vivo mediante micro-SPECT/CT en un modelo murino de teratocarcinoma (F9).
Material y métodos: Se marcaron 140 μg (200 μL) de EDA-anexina con 14 MBq de [99mTc]NaTcO4, utilizando 40 μL de SnCl2 (5 mg/mL) como agente reductor, y 70 μg (100 μL) de EDA-OVA con 17,4 MBq de [99mTc (CO)3(H2O)3]+, previamente preparados mediante la adición de 740MBq de [99mTc]NaTcO4 sobre un kit de tricarbonilos y posterior incubación a 100 oC (30’) y 25 oC (15’). Para los estudios de biodistribución, se administraron por vía intravenosa 12,4 MBq de [99mTc]Tc-EDA-OVA y 4,1 MBq de [99mTc]Tc-EDA-anexina a ratones sv119 con tumores F9 en el flanco, y se adquirieron imágenes micro-SPECT/CT a 1, 3, 6 y 22 h.
Resultados: La pureza radioquímica fue en ambos casos superior al 96% (ITLC-SG y citrato de sodio 0,1 M para [99mTc]Tc-EDA-OVA; ITLC-SG y NaCl 0,9% para [99mTc]Tc-EDA-anexina). Se detectó captación de [99mTc]Tc-EDA-OVA y [99mTc]Tc-EDA-anexina en el tumor a partir de 6h, mientras que, a t = 22h, [99mTc]Tc-EDA-OVA solo se detectó en riñones y vejiga y [99mTc]Tc-EDA-Anexina permanecía en el tumor, observándose además en hígado y médula ósea.
Conclusiones: Se ha realizado el radiomarcaje con tecnecio-99m de ambas proteínas de fusión y llevado a cabo estudios de biodistribución in vivo mediante microSPECT/CT, observándose una importante captación de [99mTc]Tc-EDA-Anexina en la diana vs. [99mTc]Tc-EDA-OVA, demostrando así la especificidad de la unión de la proteína EDA-anexina a los tumores como primer paso para el desarrollo de terapias CAR-T.
